Část 2 Účinky fenyletanosidu Cistanche Deserticola na expresi -amyloidního proteinu v hippocampu transgenních myší APP / PS1

Část 2 Účinné složky Cistanche: terapeutický účinek totalfenylethanoidové glykosidya akteosidy na Alzheimerovu chorobu

Klikněte zde pro část 1

Pro více informací prosím kontaktujte ali.ma@wecistanche.com

Klikněte pro Cistanche DHT pro Alzheimerovu chorobu

4. Závěr

Alzheimerova chorobavyskytuje se hlavně v centrálním nervovém systému a je vyvolán mnoha faktory. Zatím je jeho patogeneze stále nejasná, ale jádro výzkumu je stále kolem A . Jako hlavní peptidy vylučované APP v mozku nemůže abnormální ukládání A 1-42 a A 1-40 přímo způsobit neuronální degeneraci. Z hlediska etiologie jsou to rozpustné oligomery ADDL produkované A 1-42, které způsobují mozek Skutečnou příčinou neuronální degenerace. Nicméně zkoumání exprese těchto dvou proteinů může také odrážet rozsah AD mozkových lézí v reálném čase, nepřímo ukázat expresi rozpustných oligomerních ADDL a poté dynamicky monitorovat neuronální poškození v mozku ze zdroje, což poskytuje odkaz na prevenci a léčbu nemocí. Vzhledem k tomu se A 1-42 a A 1-40 staly klíčovými cíli ve studiu patogeneze AD. Hipokampus je hlavní částí mozku pro hodnocení schopnosti učení a paměti. Poškození jeho neuronů je hlavní příčinou kognitivní dysfunkce u AD. Oblast CA1 hippocampu je jednou z hlavních částí patologického poškození AD. Tato část experimentu využívá HE Metoda barvení ukázala, že neurony v oblasti CA1 hippocampu normální skupiny byly uspořádány úhledně a těsně, rozmístěny rovnoměrněji a měly jasné vrstvy. V modelové skupině hipokampální oblast CA1 myši vykazovala degenerativní změny, jako je apoptóza neuronových buněk v důsledku poranění. Po intervenci různých dávek fenethylalkoholových glykosidových skupin Cistanche se buněčná morfologie hipokampální oblasti CA1

Všechny mají různé stupně zlepšení, což naznačujeCystanche fenylethanoidové glykosidymůže mít účinek ochrany neuronů a inhibice jejich apoptózy, ale protože barvení HE není specifické pro buněčnou apoptózu a ztrátu neuronů, je stále nutné cílit na molekuly specifické pro apoptózu v pozdějším stádiu. Relevantní detekce markerů.

Předběžná úprava tkáně, která má být testována, přímo souvisí s výsledkem barvení. V experimentu autor zjistil, že vzhledem k tomu, že hipokampus transgenních myší se nachází v hluboké vnitřní části spánkového laloku telencephalon, je malý a je obtížné oddělit tkáň. Malá neopatrnost způsobí jeho mechanické poškození, takže patologické změny nelze efektivně pozorovat. Zároveň, protože geneticky modifikované myši jsou drahé a experimentální dávkovací cyklus je dlouhý, ztráta vzorků může ovlivnit celkový postup výzkumu. Proto, když myš dokončí srdeční perfuzi, je celý mozek vyjmut a fixován paraformaldehydem, čepel skalpelu se použije k odstranění čichového bulbu a zbytek mozkové tkáně je dehydratován a usazen. Tloušťka řezu se kontroluje na 3 až 5 μm, aby se zajistilo, že hippocampus je neporušený. Za předpokladu optimalizace provozního procesu se zvyšuje efektivita výzkumu. Při detekci Western-blot autor zjistil, že vzhledem k malé molekulové hmotnosti proteinů A 1-42 a A 1-40 není snadné blotovat expresní pásy, takže je nutné provést screening jejich SDS -PAGE koncentrace gelu, doba elektroforézy a doba přenosu. Pokud je koncentrace separačního gelu příliš malá, elektroforetické dráhy budou migrovat a aktivace proteinu bude neúplná; příliš dlouhá doba elektroforézy způsobí posunutí pásu z gelové vrstvy; odpovídající doba přenosu způsobí, že western blot bude rozmazaný, čímž se ovlivní inkubace primární protilátky. Kombinujte se sekundárními protilátkami. S ohledem na to byla tato studie provedena prostřednictvím předběžných experimentů a nakonec byl vybrán 15procentní separační gel, elektroforézován a přenesena membrána po dobu 2 hodin, aby se provedl Western blot na A 1-42 a A 1-40, aby se prozkoumala jejich exprese .

Mezi technickými metodami, které se v současnosti používají pro regulaci proteinů, se metoda Western-blot používá hlavně pro kvantifikaci ke zkoumání specifické exprese příbuzných proteinů. Imunohistochemická metoda začíná z kvalitativního hlediska. Jednak může intuitivněji ukázat míru specifické vazby proteinu a protilátky a jednak může podpořit kvantitativní výsledky. Protože imunohistochemie má detekovat expresi proteinu vazbou protilátek na antigenní místa na histopatologických řezech, je příprava histopatologických řezů obzvláště důležitá. Sekce není snadné být příliš tlustá. Po dokončení řezu je třeba dbát na jeho uložení, aby nedošlo k vnějšímu poškození řezu tkáně; před zpracováním by měla být provedena adekvátní deparafinizace a doba by neměla být kratší než 2 hodiny; zvolte pufr s kyselinou citronovou s mírnými podmínkami a menším náhodným poškozením antigenu Proveďte opravu, odstraňte katalázu, plně obnažte antigenní místo a nechte primární protilátku zcela zapadnout do místa. Výše uvedené dvě metody, jako běžně používané detekční metody v molekulární biologii, se vzájemně doplňují a poskytují technickou podporu pro výzkum regulace proteinů.

Tato studie používala HE a další metody ke zkoumání hipokampálních lézí a exprese proteinů souvisejících s A v mozku. Výsledky ukázaly, že po zásahuCistanchefenylethanoid se buněčná morfologie hipokampální oblasti CA1 v mozku myší modelu AD zlepšila v různé míře. Hladiny exprese A 1-42 a A 1-40 byly významně sníženy. Kromě toho bylo zjištěno, že účinek ochranného neuronu u intervenční skupiny verbascoside byl lepší než u celkovéfenylethanoidové glykosidyskupina. Celkové glykosidyCystanche fenylethanoidové glykosidymají velký potenciál zlepšit patologické změny v oblasti mozku u myší s modelem AD a poté hrát antagonistický účinek na AD. Konkrétní mechanismus účinku je třeba v budoucnu dále studovat. Tato studie doplňuje výzkumná data o mechanismuCistancheantagonizující AD z pohledu A a zároveň pokládá výzkumný základ pro další objasnění mechanismu účinných složek nebo aktivních monomerůCistancheproti AD v pozdějším období.