ČÁST 1 Vodné extrakty Herba Cistanche podpořily střevní motilitu u potkanů ​​se zácpou vyvolanou loperamidem zlepšením intersticiálních buněk Cajal

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 a Hai-hua Qian3

1 nemocnice Suzhou ofTradiční čínská medicína,Suzhou, Jiangsu 215009, Čína

2Nanjing University oftradiční čínská medicína, Nanjing, Jiangsu 210023, Čína

3Klinika anorektální chirurgie, Jiangsu Provincial Hospital oftradiční čínská medicína, Nanjing, Jiangsu 210029, Čína

Correspondence should be addressed to Hai-Hua Qian; haihuaqian@126.com

Přijato 24. května 2017; Revidováno 5. října 2017; Přijato 25. října 2017; Publikováno 28. prosince 2017

Akademický redaktor: Samra Bashir

Copyright © 2017 Shuai Yan et al. Toto je článek s otevřeným přístupem distribuovaný pod licencí Creative Commons Attribution License, která umožňuje neomezené použití, distribuci a reprodukci na jakémkoli médiu za předpokladu, že je původní dílo řádně citováno.

Tradiční čínská medicínabylo popsáno, že má dobré účinky při léčbě funkční zácpy. Tato práce se pokusila prokázat účinky vodných extraktů Herba Cistanche (AEHC) na léčbu STC a určit možné mechanismy pomocí modelu pomalé tranzitní zácpy (STC) vyvolané loperamidem. Pro identifikaci a potvrzení bioaktivních složek v AEHC byla provedena HPLC. Bylo zjištěno, že AEHC zeslabuje odpovědi STC na základě zvýšeného množství stolice, obsahu vlhkosti a rychlosti střevního průchodu, stejně jako sérových hladin GAS, MTL, SS a CGRP. Hladiny proteinu a mRNA c-kitu, značení intersticiálních buněk Cajal (ICC), se také zvýšily. Mezitím se zvýšila pouze hladina proteinu SCF, ligandu ofc-kit. Analýza našich dat naznačila, že AEHC by zjevně mohl zlepšit funkci ICC prostřednictvím signální dráhy zahrnující PI3K, SCF a c-kit a zvýšit indexy motility tlustého střeva, jako jsou GAS, MTL, SS a CGRP. Je zajímavé poznamenat, že AEHC se zdál být účinný na zácpu, takže jsou nutné další experimenty, aby se objasnily přesné mechanismy.

Pro více informací prosím kontaktujte:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola má mnoho účinků, klikněte sem a dozvíte se více

1. Úvod

Zácpa je běžným funkčním gastrointestinálním onemocněním a veřejným zdravotním problémem, charakterizovaným trvale obtížnou, vzácnou nebo neúplnou defekací [1]. Prevalence zácpy se na celém světě pohybuje od 0,7 procenta do 81 procent, zejména u starších osob [2, 3]. Pomalá tranzitní zácpa (STC) je běžnou gastrointestinální obtíží u 13–37 procent pacientů s chronickou zácpou rezistentní na léčbu [4, 5]. Epidemiologická data naznačují vyšší výskytSTCmezi mladými ženami než muži [6].STCzpůsobuje neřešitelnou zácpu, vykazuje malou odezvu na konzervativní léčbu a tendenci k neurodegenerativní poruše. Není tak jednoduché jako funkční onemocnění, ale vyžaduje invazivní a agresivní léčbu [7].

Univerzálně se používá řada současných chemických léků, jako jsou osmotická nebo sekreční laxativa a objemová činidla

léčí zácpu [8], i když jejich použití je omezené kvůli vysokým výdajům a vedlejším účinkům na břicho, jako jsou bolesti, křeče a nadýmání [9]. V současné době je hlavním cílem léčby zácpy regulace gastrointestinálního traktu. Cisaprid byl nejprve vytvořen jako podpůrný prostředek pro léčbu žaludečních onemocnění, ale později byl stažen z důvodu rizika srdečních arytmií [10].

Tegaserod je selektivní antagonista 5-hydroxytryptaminového receptoru, který může stimulovat střevní peristaltiku a sekreci [11, 12]. Prucaloprid je nový derivát dihydrobenzofurankarboxamidu a agonista {{3}HT receptoru s vysokou selektivitou a specificitou, který může zlepšit motilitu žaludku, tenkého střeva a tlustého střeva a pracuje rychleji v dynamice [13–15]. Jako derivát prostaglandinu E1 může lubiproston selektivně aktivovat kanál CIC, aby podpořil gastrointestinální sekreci a zvýšil účinky střevního přenosu [16].

Cistanchemá tonizující účinekledvinaa umí i léčitzácpa

Motilita při zácpě je rozšířeným problémem, ale její etiologie není dosud jasná. Nicméně přesvědčivé důkazy prokázaly příspěvek intersticiálních buněk Cajal (ICC) k patogenezi zácpy [17]. ICC se nachází mezi nervovými zakončeními a buňkami hladkého svalstva v gastrointestinálním traktu. ICC je obecně uznáván jako kardiostimulátorové buňky pro gastrointestinální aktivitu a jako mediátory neuromuskulárního přenosu [18]. Studie ukázaly, že hustota ICC v tlustém střevě pacientů s pomalou tranzitní zácpou je výrazně nižší ve srovnání s hustotou u normálních pacientů [19]. V souladu s tím může klesající počet ICC vést k nedostatku aktivity pomalých vln, a tak ovlivnit kontraktilní odpověď a indukovat opožděný tranzit u pacientů se zácpou s pomalým tranzitem. V tomto bodě může být zlepšení ICC pomocí léčiv zásadní pro vyléčení pomalé tranzitní zácpy.

Různé bylinné léky a tradiční čínská formula Mula nedávno přitáhly pozornost jako nová terapeutika pro léčbu chronické zácpy v důsledku zlepšené produkce stolice [20, 21]. Herba Cistanche je tradiční rostlinný lék používaný k léčbě chronického onemocnění ledvin, ženské neplodnosti, profuzní menoragie a impotence [22, 23]. Herba Cistanche zabraňuje apoptóze mozkových neuronů expresí faktorů souvisejících s apoptózou a neurotrofních faktorů v buňkách MES23.5 [24]. Herba Cistanche také prokázala farmaceutický potenciál při léčbě syndromu nedostatečnosti ledvin Yang-Qi-Yang. Nedávná studie prokázala, že Herba Cistanche zvyšuje mitochondriální dýchání a antioxidační stav glutathionu v kardiomyocytech H9c2 [25].

TCM věří, že zácpa má úzký vztah k ledvinám. Ledvina, která se otevírá na vnějších genitáliích a konečníku, řídí močení a defekaci. Přeprava odpadu závisí na podpoře ledvinové čchi a vyživování ledvinového jinu. Pokud je nedostatečný jang ledvin nebo vyhasne brána života, chladné překrvení tlustého střeva bude mít za následek stagnaci odpadu. Zácpa je také způsobena suchým pohybem střev, protože nedostatek ledvinové esence nevytváří dostatek tekutin [26].

HerbaCistancheje běžná jednotící bylina, která má sladkou a slanou chuť a teplou povahu. Připisuje se meridiánům tlustého střeva a ledvin, může tonizovat jang ledvin a zvlhčovat střevo, aby zmírnil zácpu. Tato jediná bylina a jejíčínštinafarmaceutické přípravky byly široce používány k léčbě zácpy s pozoruhodnou účinností [27].

V Číně účinky HerbyCistanchekořeny na zácpu byly zaznamenány [28, 29] a uváděny v Shen Nongově čínské Materia Medica jako „sušené sukulentní stonky druhu Cistanche“ [30]; vědecký důkaz o účinku kořenů Herba Cistanche na zácpu však dosud neexistuje, klinicky účinná dávka je 20 g denně vČínský lékopisa klinický účinek se dále nezvyšuje s dávkováním.

Vzhledem k tomu, že Herba Cistanche je tak vzácný [31], standardizuje se její klinické dávkování pro léčbuSTCpomocí experimentální studie nejen předchází neúspěšné léčbě v důsledku nedostatečného dávkování, ale také chrání pacienty před ekonomickými ztrátami a dokonce i nadužíváním léků. Doufáme

výsledky by mohly položit vědecký základ pro nové léky na zácpu. Proto je důležité v této studii prozkoumat funkci vodné Herba Cistanche na podporu střev a její účinek na ICC.

Cistanchemůže léčitzácpa

2. Materiály a metody

2.1. Příprava vodného extraktu z Herba Cistanche.

Všechny Herba Cistanche byly zakoupeny od Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, Čína), které byly sklizeny, shromážděny a zpracovány podle standardních etnobotanických postupů z plantáží v oblasti Sinkiang v Číně. Identitu rostliny morfologicky zjistil profesor Tu Lin Lu z Nanjingské univerzity čínské medicíny, Nanjing, Čína. Vzor voucheru (NUCMCHS-2015628) byl uložen na College of Health Sciences, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, Čína.

Plátky Herba Cistanche o hmotnosti 500 g byly rozdrceny pomocí elektrického mixéru a extrahovány v 5000 ml destilované vody, poté byl vodný extrakt čištěn při 100 °C po dobu 2 hodin pomocí cirkulačního extrakčního zařízení.

membránový pór (Millipore, Billerica, MA, USA) a zbytek získaný z extraktů byl rozpuštěn ve 4000 ml vody. Po refluxní extrakci byly extrakty shromážděny a odpařeny, čímž byl získán konečný vzorek produktu. Vodné extrakty byly koncentrovány na suché pelety (1 g/ml) za použití a

pro následné použití. Pevné vzorky byly rekonstituovány v destilované vodě, aby se získaly požadované dávky 10, 20 a 40 mg/kg tělesné hmotnosti pro experiment.

2.2. Zvířata.

Experimentální protokol použitý v této studii byl přezkoumán a schválen na základě etických postupů a vědecké péče nemocnicí Suzhou vtradiční čínská medicína-Výbor pro ústavní péči o zvířata a jejich použití, Suzhou, Čína (SHTCM-IACUC; číslo schválení: PNU- 2016-0003). Všichni samci krys (kmen Sprague Dawley) s ag byli zakoupeni od Shanghai Laboratory Animal Research Center v souladu s pokyny National Institutes of Health. Zvířata měla volný přístup ke standardní stravě (AIN-93 M) a vodě z vodovodu ad libitum a byla chována individuálně v nerezové oceli s procentuální relativní vlhkostí a denně vystavena 12 hodin přirozenému světlu a 12 hodin tmě.

2.3 Experimentální design.

Loperamid byl použit k vyvolání zácpy u potkanů ​​v souladu s předchozími studiemi [32, 33]. Celkem 60 krys bylo náhodně rozděleno do 5 skupin (na skupinu): A: normální skupina (NG), B: modelová skupina (skupina léčená Lop plus vehikulem), C: skupina krys se zácpou léčených nízkým obsahem vodného extraktu Herba Cistanche (skupina léčená Lop plus LAEHC), D: skupina krys se zácpou léčenou středně vodným extraktem z Herba Cistanche (skupina léčená Lop plus MAEHC) a E: skupina krys se zácpou léčenou vysoce vodným extraktem z Herba Cistanche (skupina léčená Lop plus HAEHC). Skupina A byla ošetřena normálním fyziologickým roztokem (10 ml/kg); Skupina B byla ošetřena loperamidem

(4 mg/kg); Skupina C byla ošetřena loperamidem (4 mg/kg) a nízkým obsahem vodného extraktu Herba Cistanche (1 g/kg); Skupina D byla ošetřena loperamidem (4 mg/kg) a středním vodným extraktem Herba Cistanche (2 g/kg) a skupina E byla ošetřena loperamidem (4 mg/kg) a vysoce vodným extraktem Herba Cistanche (4 g/kg). kg). Všem potkanům z normální skupiny byl injikován 0,9% chlorid sodný, zatímco ostatním byl injikován loperamid v 0,9% chloridu sodném dvakrát denně po 3 po sobě jdoucí dny, aby se vyvolala zácpa. Vodný extrakt Herba Cistanche byl suspendován ve vodě a byl perorálně podáván jednou denně od 4. dne do 18. dne ve skupině C, skupině D a skupině E, zatímco skupiny A a B dostávaly konzistentní objem vody sondou.

2.4. Chromatografický stav.

Profilování HPLC bylo provedeno v systému Shimadzu Liquid Chromatographic System (Tokio, Japonsko), který se skládal z čerpadla LC-20AT a

byly monitorovány při 330 nm při 30 C. Izokratická mobilní fáze sestávala z methanolu 0,1% kyseliny mravenčí (80 : 20, obj./obj.) a běžela při průtoku 1,0 ml/min. . Chromatografická separace byla

velikost částic 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Peking, Čína).

2.5. Analýza cvičení, příjmu potravy, příjmu vody, těla

Orná guma (vodná suspenze 20 procent aktivního uhlí a 10 procent orné gumy) byla podávána orálně v objemu 25 ml/kg každému zvířeti. Po 30 minutách byla zvířata humánně usmrcena cervikální dislokací a vypreparována. Byly překročeny tenké střevo od pyloru po slepé střevo a byla měřena vzdálenost, kterou urazila moučka z dřevěného uhlí, a celková délka tenkého střeva. Pro jednotlivou krysu bylo procento střevního průchodu vypočteno jako procento vzdálenosti ujeté potravou z aktivního uhlí vzhledem k celkové délce tenkého střeva. Následující rovnice vypočítá rychlost střevního průchodu (v procentech): vzdálenost ujetá aktivním uhlím/vzdálenost od pyloru do slepého střeva 100 procent.

2.6. Vzorek krve a odběr tkání. Na konci experimentálního období byly krysy podrobeny 12 hodinovému hladovění, ale byl jim umožněn volný přístup k vodě. Všechny krysy byly poté anestetizovány o 30 minut později intraperitoneální injekcí pentobarbitalu sodného (50 mg/kg) a umístěny na stůl s regulovanou teplotou. Vzorky krve byly odebrány a centrifugovány při 3500 otáčkách za minutu po dobu 15 minut, aby se získalo sérum. Tlusté střevo bylo okamžitě rozděleno a propláchnuto normálním fyziologickým roztokem při 4 °C a poté rozděleno na dva kusy. Jeden fragment byl fixován v 10% formalínu a zpracován v štěpeném parafínu pro následnou imunohistochemickou (IHC) analýzu, zatímco druhý byl Weight a Hair. Změny ve cvičení, příjmu potravy, vody

skladovány při 80 °C, dokud nebyly testovány. příjem, tělesná hmotnost a vlasy byly sledovány a zaznamenávány denně po celou dobu experimentu. Pozorovali jsme "změny ve cvičení" po konkrétních krocích: vlastnoručně vyrobený box (60 cm vysoký, 50 cm dlouhý a 80 cm široký s tmavou obvodovou stěnou) byl použit pro test v otevřeném poli; bílá země byla rozdělena na diamanty (12 cm) černou čarou v tmavé a tiché místnosti; 100 W žárovka zavěšená 1 m nad středem krabice; krysy byly umístěny do středu boxu 4., 6., 12. a 18. den modelování. Počet čtverců, kterými krysy prošly během 5 minut, byl použit jako skóre horizontálního pohybu a doba vzpřímení krys během 5 minut byla použita jako skóre vertikálního pohybu. Horizontální skóre a skóre pohybu plus skóre vertikálního pohybu indikují množství cvičení krys. Každý potkan byl měřen jednou [34, 35].

Cistanchemůže ulevitzácpa

2.7. Měření fekálních parametrů.

Poslední den orálního podání byly čerstvé pelety stolice od každého SD potkana shromážděny do zkumavek s kulatým dnem uzavřených po dobu 6 hodin a byly zaznamenány celkové hmotnosti z každé skupiny. Ke stanovení obsahu fekální vlhkosti jsme použili elektrické váhy k sušení pelet stolice, dokud nebylo dosaženo konstantní hmotnosti, a měřili jsme suchou hmotnost. Obsah vlhkosti

2.8. Hodnocení GAS, MTL, SS a CGRP.

Koncentrace gastrinu (GAS), motilinu (MTL), somatostatinu (SS) a peptidu souvisejícího s genem kalcitoninu (CGRP) v séru byly odhadnuty pomocí ELISA za použití komerčně dostupných souprav.

2.9. Histologická analýza.

Příčné tlusté střevo odebrané z SD potkanů ​​bylo fixováno 10% formalínem po dobu 12 hodin, zapuštěno

m tlusté plátky, které byly obarveny hematoxylinem a eosinem (H&E, Sigma-Aldrich, MO, USA). Morfologické rysy těchto řezů byly pozorovány pod světelnou mikroskopií, poté byla měřena délka klků, tloušťka krypty a tloušťka svalu pomocí Leica Application Suite (Leica Microsystems, Švýcarsko).

2.10. Imunohistochemická analýza.

Postupovali jsme podle metod Zhu et al. (2016) [36]; nešpiněné 5 m úseky byly

obarveno králičím anti-c-kitem (1:100) při 4 °C přes noc. Metoda sekundární protilátky a komplexu avidin-biotin-peroxidáza byly použity podle pokynů výrobce. K eliminaci nespecifické vazby byla použita imunoglobulin-negativní kontrola. Úrovně exprese c-kitu

2.11. Analýza rychlosti průchodu střevem.

Poměr střevních průchodů byl proveden podle dříve publikovaných protokolů [36]; krátce, po 14 dnech léčby, byly všechny SD krysy podrobeny 12 hodinovému hladovění, ale byl jim umožněn volný přístup k vodě.

Polymerázová řetězová reakce v reálném čase. Hladiny genové exprese mRNA c-kit, SCF a PI3K v tlustém střevě byly stanoveny pomocí soupravy pro extrakci celkové RNA (TIANGEN Biotech,

Peking, Čína) podle protokolů výrobce. PCR v reálném čase byla provedena pomocí systému ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (ABI). K detekci produktů PCR byl použit SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japonsko). Reakce byly provedeny ve třech opakováních. Následně byla čerstvá tkáň tlustého střeva potkana o hmotnosti 0,5 g homologní

l) byl extrahován podle pokynů výrobce za použití činidla TRIzol (Invitrogen, USA). K syntéze prvního vlákna cDNA v souladu s protokolem výrobce byla použita souprava pro reverzní transkripci-PCR (Takara Biotechnology Co., Inc.). Všechny cílové parametry jsou uvedeny v tabulce 1. Cyklovací protokol byl za následujících podmínek: 95 °C po dobu 5 minut (denaturace DNA), následovalo 40 cyklů 95 °C po dobu 15 s, 60 °C po dobu 20 s a 72 °C po dobu 40 s Analýza křivky tání byla provedena na konci amplifikačních cyklů.

2.12. Analýza Western Blot.

Obsah proteinu c-kit a SCF v homogenátech vzorků tlustého střeva byl hodnocen pomocí Western blotu. Stručně řečeno, celkové proteiny homogenátů byly stanoveny pomocí testu s kyselinou bicinchonovou (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). Dodecylsulfát-polyakrylamidový gel sodný (SDS-PAGE) byl použit k separaci proteinů v systému elektroforézy BioRad (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA). Proteiny byly poté přeneseny na polyvinylidendifluoridové (PVDF) membrány. Po 2 hodinách působení blokovacím pufrem v TBS obsahujícím 5 procent odtučněného mléka při pokojové teplotě byly PVDF membrány inkubovány přes noc s 1:1000 zředěným anti-c-kitem (Santa Cruz, CA, USA), 1:500 zředěným anti-c-kitem. SCF (Sigma, MO,

USA) a 1:8000 zředěné protilátky proti aktinu (Kangchen, Shanghai, Čína), v daném pořadí. Vazba primární protilátky byla detekována pomocí odpovídající sekundární protilátky konjugované s HRP (Beyotime, Jiangsu, Čína). Pro detekci chemiluminiscence byla použita vylepšená chemiluminiscenční souprava (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) a Odyssey Infrared Imaging System (Gene Company Ltd., Hong Kong). Jako kontrola zatížení byl použit prolaktin. Množství exprese proteinu je prezentováno relativně k hladinám aktinu.

2.13. Statistická analýza.

Data měření byla uvedena jako střední standardní chyba průměru (SEM) a analyzována pomocí SPSS

16.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). K určení významných rozdílů ve všech parametrech byla použita jednocestná analýza rozptylu (ANOVA) následovaná Duncanovými testy s více rozsahy. Hodnoty byly považovány za statisticky významné při

Cistancheodvar je dobrý lék na léčenízácpa

3. Výsledky

3.1. Složení a funkční složky Herba Cistanche.

Jak je znázorněno na obrázku 1, kořeny Herba Cistanche obsahují vysoké koncentrace několika bioaktivních složek souvisejících s laxativními účinky. Koncentrace celkového echinakosidu a celkového verbascosidu byly 0,64 mg/g a 0,16 mg/g, v daném pořadí. Dva píky indikující vysoké hladiny echinakosidu a verbascosidu byly detekovány v LP ve vhodném retenčním čase pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC).

3.2. Obecné pozorování.

Potkani SP nezemřeli v průběhu experimentu, což ukazuje na lepší bezpečnost a funkčnost zvířecího modelu. Ve srovnání se skupinou A vykazovaly krysy v modelové skupině nadýchanou srst, malátnost, suchou stolici a

zhoršila s prodloužením doby modelování.

3.3. Vliv AEHC na počet stolice a obsah vlhkosti u potkanů ​​se zácpou vyvolanou loperamidem.

Ve srovnání s normálními výkaly byly výkaly ve skupinách B, C, D a E suché, malé a tvrdé a nebyly před ošetřením vyleštěny.

koneckonců, krysám byl injikován loperamid (léčení lékem zmírnilo symptomy jako tělo a 3(b)).

hmotnost se mezi všemi experimentálními skupinami významně nelišila, ačkoli skupina E vykazovala mírně nižší tělesnou hmotnost než ostatní skupiny (obrázek 2(a)). Kromě toho SD potkani se zácpou jedli významně méně potravy než skupina A ( ), zatímco rozdíly mezi skupinami B, C, D a E (obrázek 2(b)) nebyly významné. Spotřeba vody se také nezměnila mezi skupinou A a skupinou B. Navíc nebyl v r zjištěn žádný významný nárůst spotřeby vody

že léčba AEHC nevyvolala žádnou změnu. Ačkoli rychlost střevního tranzitu ve skupinách C, D a byla také významně vyššíSkupiny C, D a E měly výrazně nižší poměry než skupina A.

3.4. Vliv AEHC na rychlost průchodu tenkým střevem u potkanů ​​se zácpou vyvolanou loperamidem.

Jak je vidět z obrázku 4, nebyly mezi pěti skupinami zjištěny žádné rozdíly ve výchozím čase průchodu tenkým střevem. Skupina B má ve srovnání se skupinou A výrazně nižší poměr pohonu práškovým uhlím (𝑃 < 0.01).="" ačkoli="" rychlost="" střevního="" tranzitu="" ve="" skupinách="" c,="" d="" a="" e="" byla="" také="" významně="" vyšší="" než="" ve="" skupině="" b="" (𝑃="">< 0,05),="" skupiny="" c,="" d="" a="" e="" měly="" významně="" nižší="" poměry="" než="" skupina="">

3.5. Intervence s AEHC částečně zvyšuje funkci indexu motility tlustého střeva.

Hladiny GAS a MTL v séru získané od potkanů ​​skupiny B významně poklesly ve srovnání s hladinami ze skupiny A (𝑃 < {{0}}.01,="" resp.).="" na="" druhé="" straně="" skupiny="" c,="" d="" a="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" resp.)="" mají="" efektivně="" vyšší="" hladiny="" gas="" a="" mtl="" z="" podávání="" extraktů="" herba="" cistanche="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" b="" hodnoty="" ss="" u="" potkanů="" ​​skupiny="" b="" byly="" vyšší="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" a="" (𝑃="">< 0,01);="" skupiny="" c,="" d="" a="" e="" mají="" oslabené="" hladiny="" ss="" (𝑃="">< 0,05)="" (obrázek="" 5).="" ve="" srovnání="" s="" potkany="" se="" zácpou="" byly="" hladiny="" cgrp="" u="" normálních="" potkanů="" ​​skupiny="" a="" (𝑃="">< 0,01)="" a="" ve="" skupinách="" c,="" d="" a="" e,="" kterým="" byl="" podáván="" herba="" cistanche,="" konstantní="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Histologická změna tlustého střeva.

Aby se prozkoumalo, zda léčba AEHC může vyvolat strukturální změnu tkáně tlustého střeva, byla po barvení H&E měřena délka klků, tloušťka vrstvy krypt a tloušťka svalu v příčných tlustých střevech krys v pěti skupinách. Porovnáním patologie tlustého střeva krys v každé skupině byla sliznice tlustého střeva hladká a obsahuje malé tepny a malé žíly v submukóze a velké množství tukových buněk. Svalová vrstva se navíc skládala z buněk hladkého svalstva a subserosa byla kompletní. Průměrná délka klků byla významně kratší ve skupině B než ve skupině A (𝑃 < {{0}}.01).="" průměrná="" délka="" klků="" ve="" skupině="" c="" se="" však="" výrazně="" zvýšila="" o="" více="" než="" 30="" procent="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" b="" (obrázky="" 6="" a="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" mezitím="" se="" průměrná="" délka="" klků="" výrazně="" prodlužuje="" ve="" skupinách="" d="" a="" e="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" b="" (obrázky="" 6(a)="" a="" 6(b))="" (𝑃="">< 0,01).="" navíc="" změna="" tloušťky="" svalu="" byla="" velmi="" podobná="" délce="" klků.="" ve="" skupině="" b="" tloušťka="">

byl dramaticky tenčí ve srovnání se skupinou A. Hladiny svalové tloušťky ve skupinách C, D a E se však zvýšily o 30–35 procent ve srovnání s tloušťkou ve skupině B (obrázky 6 a 7). Celkově tato zjištění naznačují, že AEHC může zvýšit délku klků a tloušťku svalů v tlustém střevě u krys se zácpou.

3.7. Podávání léčby AHEC Zvýšená proteinová exprese c-Kit a SCF.

Jeho imunoreaktivita byla detekována v tlustém střevě, protože buňky ve všech skupinách byly pozitivní na c-kit. Jak ukazuje obrázek 8, úroveň exprese c-kit ve skupině B byla nižší než ve skupině A (𝑃 < 0.05).="" úroveň="" exprese="" c-kitu="" ve="" skupině="" c="" byla="" vyšší="" než="" ve="" skupině="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5),="" zatímco="" více="" c-kit="" bylo="" přítomno="" ve="" skupinách="" d="" a="" e="" než="" ve="" skupině="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" po="" ošetření="" různými="" koncentracemi="" vodného="" extraktu="" herba="" cistanche="" po="" dobu="" 2="" týdnů="" byly="" hladiny="" proteinové="" exprese="" c-kit="" a="" scf="" detekovány="" analýzou="" western="" blot.="" analýza="" western="" blot="" ukázala,="" že="" hladiny="" exprese="" c-kit="" a="" scf="" byly="" po="" ošetření="" loperamidem="" v="" tlustém="" střevě="" krys="" výrazně="" nižší="" (obrázek="" 9).="" obrázek="" 8(e)="" ukazuje,="" že="" snížený="" c-kit="" u="" krys="" se="" zácpou="" významně="" vzrostl="" o="" 31,2="" procenta="" po="" léčbě="" krys="" 500="" ug/ml="" aehc="" (❑="">< 0,05).="" kromě="" toho="" léčba="" 100="" a="" 200="" ug/ml="" aehc="" zvýšila="" hladiny="" exprese="" proteinu="" c-kit.="" exprese="" proteinu="" scf="" se="" významně="" zvýšila="" o="" 20,1,="" 24,7="" a="" 8,4="" procent="" při="" léčbě="" 100,="" 200="" a="" 500="" µg/ml="" aehc,="" v="" daném="" pořadí="" (obrázek="" 9).="" 3.8.="" vliv="" aehc="" na="" expresi="" mrna="" c-kit,="" scf="" a="" pi3k.="" aby="" se="" zjistilo,="" zda="" léčba="" aehc="" může="" ovlivnit="" regulaci="" mrna="" související="" se="" svalovou="" kontrakcí,="" byly="" pomocí="" specifických="" primerů="" pozorovány="" změny="" v="" hladinách="" exprese="" c-kit,="" scf="" a="" pi3k="" v="" tlustém="" střevě="" krys="" se="" zácpou.="" výsledky="" ukázaly,="" že="" hladiny="" mrna="" c-kit="" ve="" skupině="" b="" byly="" významně="" nižší="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" zatímco="" hladiny="" mrna="" ve="" skupinách="" c,="" d="" a="" e="" byly="" vyšší="" než="" ve="" skupině="" b="" (𝑃="">< 0,05).="" (obrázek="" 10).="" také="" jsme="" zkoumali="">

exprese SCF, ligandu kitu. Exprese mRNA SCF u potkanů ​​skupiny B byla významně nižší než ve skupině A, zatímco léčba AEHC ve skupinách C, D a E zvýšila expresi mRNA SCF (obrázek 1 0). Kromě toho jsme zkoumali účinek AEHC na expresi genu PI3K. V den 14 byla hladina exprese genu PI3K významně vyšší ve skupinách C, D a E než ve skupině B (𝑃 <>