Přehled složek florotaninů ve Fucales, část 3

Glykosid cistanche může také zvýšit aktivitu SOD v srdeční a jaterní tkáni a významně snížit obsah lipofuscinu a MDA v každé tkáni, účinně zachycovat různé reaktivní kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atd.) a chránit před způsobeným poškozením DNA. OH-radikály. Cystanche fenylethanoidové glykosidy mají silnou schopnost vychytávání volných radikálů, vyšší redukční schopnost než vitamín C, zlepšují aktivitu SOD v suspenzi spermií, snižují obsah MDA a mají určitý ochranný účinek na funkci membrány spermií. Polysacharidy Cistanche mohou zvýšit aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytech a plicních tkáních experimentálně senescentních myší způsobených D-galaktózou, stejně jako snížit obsah MDA a kolagenu v plicích a plazmě a zvýšit obsah elastinu. dobrý čisticí účinek na DPPH, prodlužuje dobu hypoxie u senescentních myší, zlepšuje aktivitu SOD v séru a oddaluje fyziologickou degeneraci plic u experimentálně senescentních myší Experimenty prokázaly, že Cistanche má dobrou antioxidační schopnost s buněčnou morfologickou degenerací a má potenciál být lékem k prevenci a léčbě nemocí stárnutí kůže. Zároveň má echinakosid v Cistanche významnou schopnost vychytávat volné radikály DPPH a dokáže vychytávat reaktivní formy kyslíku a bránit volnými radikály indukované degradaci kolagenu a má také dobrý opravný účinek na poškození aniontů volnými radikály thyminu.

Klikněte na Kde mohu koupit Cistanche

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Co se týče Eckolů, díky přítomnosti dibenzodioxinových struktur je lze tyto odlišit od ostatních skupin na základě jejich deprotonovaných molekulárních iontů, které jsou obvykle o 2 Da nižší než ostatní PT se stejnými DP, pro každý dibenzodioxinový motiv přítomný ve struktuře (obrázek 5 D). Například eckol představuje [MH]- při m/z 371, zatímco trifokální, triflorethol a fukoflorethol jsou všechny přítomny [MH]- při m/z 373. Na druhé straně vábničky, které mají ve své páteři dvě dibenzodioxinové struktury, přítomné [MH]− při m/z 741, zatímco jejich hexamerové ekvivalenty přítomné [MH]− při m/z 745. Totéž platí pro karmaloly, což jsou v podstatě haly obsahující dibenzodioxinové struktury [120]. A konečně, některé PT, které obsahují furanové kruhy, jako je fukofuroeckol a florofucofuroeckol, se vyznačují dehydratovaným-deprotonovaným molekulárním iontem, tj. [MH]-, který je o 18 Da nižší ve srovnání s jejich ekvivalenty neobsahujícími furan se stejnými DPs (např. struktury fukofuroeckol vs. floroeckol se liší pouze přítomností/nepřítomností furanového kruhu a vykazují [MH]− při m/z 496, respektive 478) [120]. Tabulka 3 ukazuje data MS shromážděná z různých studií zaměřených na identifikaci PT u Fucales.

Ačkoli tyto základy mohou být užitečné pro dosažení rozumné strukturní identifikace nízkomolekulárních PT, velké potíže nastávají, pokud jde o oligomery a polymery s vysokou molekulovou hmotností, protože jejich izomerizace se zvyšuje exponenciálně a mnohočetné možnosti uspořádání a kombinací floroglucinolu lze jen stěží vyřešit. objasněno pomocí MS nebo MS/MS. Nicméně v takových případech může MS stále poskytnout cenné informace o DP sloučenin přítomných ve směsi florotaninu. V tomto ohledu představuje matrice asistovaná laserová desorpce/ionizace-čas letu MS (MALDI-TOF-MS) vhodnější přístup pro analýzu větších oligomerů, protože dokáže detekovat molekuly s m/z nad horní hranicí ESI- SLEČNA. Tato technika byla použita ke studiu florotaninové frakce Sargassum wightii, což jí umožňuje potvrdit přítomnost dimerů, trimerů a hexamerů floroglucinolu [125]. MS s vysokým rozlišením (HRMS) je alternativní přístup, který lze také použít pro analýzu PT s vysokou molekulovou hmotností, spoléhající na vícenásobně nabité ionty a změny vzoru izotopů plus 1 13C. Jinými slovy, když je sloučenina dvojitě nebo trojitě nabitá, vykazuje plus 1 13C izotopový vzor s rozdíly m/z 0,5 a 0,33, v tomto pořadí . Na tomto principu Steevensz et al. [78] byli schopni profilovat PT složení P. canaliculata, F. spiralis, F. vesiculosus a A. nodosum z hlediska DP a detekovat sloučeniny s molekulovou hmotností až 6000 Da, které by jinak překročily hmotnostní rozsah ESI-MS.

Celkově, ačkoli hmotnostní spektrometrie může být vynalézavou technikou pro kvalitativní analýzu PT a dokonce dostatečně výkonnou k dosažení přiměřeně dobré charakterizace sloučenin s nízkou molekulovou hmotností, nedokáže získat dostatečné podrobnosti o typu a poloze vazby izomerních forem sloučenin. s vyšším DPS. Pokud je tedy cílem plně objasnit strukturální vlastnosti PT, je NMR jedinou účinnou metodou, která může nabídnout dostatečné rozlišení pro takovou hloubkovou analýzu.

5.2.3. NMR

NMR spektroskopie zahrnuje přímou a nedestruktivní analýzu, která může být užitečná nejen pro přístup k obsahu PT, ale také pro úplné objasnění strukturních rysů PT. Jsou-li zamýšleny kvantitativní údaje, jsou 1H NMR rezonanční signály všech fenolických sloučenin obsažených v extraktech řas integrovány a porovnávány se signály vhodného vnitřního standardu; tyto sloučeniny musí být stabilní, chemicky inertní, dostupné ve vysoce čisté formě a zcela rozpustné ve stejném deuterovaném rozpouštědle (rozpouštědlech) jako vzorek. Celkově autoři používají různé přístupy a metodiky ke kvantifikaci fenolických sloučenin a/nebo PT prostřednictvím této techniky, včetně vzorků pocházejících z Fucale.

V 2009, Parys a kol. poprvé popsali použití kvantitativní 1H NMR (NMR) ke stanovení variability obsahu florotaninu v A. nodosum v průběhu roku. V jejich práci byla jako vnitřní standard použita kyselina trimesinová (2,5 {6}} mg kyseliny trimesové v 0,8 ml deuterovaného methanolu a 0,2 ml oxidu deuteria) a pomocí floroglucinolu byla vytvořena kalibrační křivka. Navzdory vyššímu obsahu PTs, který byl detekován pomocí qHNMR ve srovnání s těmi získanými pomocí FC kolorimetrické metody, obě metody sledovaly stejný trend sezónních variací [126]. Je důležité poznamenat, že na rozdíl od kolorimetrického testu, který není specifický pro PT ani pro fenolické sloučeniny, je integrace rezonančních signálů 1H NMR spekter v qHNMR srovnávána se signály vnitřního standardu. Kvůli těmto zásadním rozdílům nelze mezi oběma metodikami přesně porovnávat [127,128].

Stiger-Pouvreau a spolupracovníci použili odlišný přístup ke kvantifikaci PT u hnědé řasy Cystoseira tamariscifolia s vysokým rozlišením magic angle spinning (HR-MAS). V této studii byla NMR v pevné fázi použita k detekci floroglucinolu (monomer) in vivo a 1H qNMR byla použita k odhadu kvantifikace monomeru (s použitím trimethylsilylpropionátu –d4 (TSP) jako vnitřního standardu). Floroglucinolový singlet při 5 6,02 ppm, integrovaný do tří protonů, potvrdil jeho přítomnost ve vzorku. Přesnost této metody byla hodnocena za použití standardního roztoku floroglucinolu a výsledky byly validovány srovnáním s výsledky FC testu. Nakonec autoři tvrdili, že předložená metodika sestává z inovativní a rychlé metody kvantifikace floroglucinolu, kterou lze aplikovat na všechny druhy řas. Jediné omezení qNMR metody spočívá v nutnosti, aby alespoň jeden ze spektrálních signálů (singlet, dublet, atd.) byl jednoznačně přiřazen jedné a pouze jedné sloučenině [129].

Již dříve v roce 2010 stejní autoři prokázali potenciál in-vivo 1H HR-MAS NMR spojeného s hmotnostní spektrometrií (LC/ESI–MSn ) k pozorování globálního chemického profilu pěti druhů rodu Cystoseira přítomných podél pobřeží. z Bretaně ve Francii: C. baccata, C. foeniculacea, C. humilis, C. nodi caulis a C. tamariscifolia [130]. The

hlavním cílem jejich práce bylo identifikovat exempláře Cystoseira a diskutovat o jejich taxonomii. Výsledky prokázaly účinnost prezentovaného přístupu k rozlišení především C. nodicaulis a C. tamariscifolia, protože jejich spektra prokazovala přítomnost charakteristických signálů umožňujících jejich jednoznačnou identifikaci. V případě singletu při 2,91 ppm pro první a pro druhý, vrchol přesně 6.00 ppm charakterizoval druh a naznačoval možný výskyt jednoduchého florotaninu. Foeniculacea a C. humilis byly obecně charakterizovány výskytem dvou dubletů stejné intenzity při 7,90 a 7,36 ppm. Absolutní rozlišení mezi těmito dvěma signály však zůstalo nemožné. Podobnost signálů in vivo NMR v tandemu s mírnou vnitrodruhovou chemickou diverzitou obou druhů tyto výsledky ospravedlnila. A konečně, v případě C. baccata, přestože vykazovala nejdůležitější chemickou rozmanitost, mnoho signálů umožňovalo neustálé rozlišování od ostatních druhů.

V roce 2020 Walsh a spolupracovníci [131] prokázali antimikrobiální potenciál dvou purifikovaných florotaninových extraktů z A. nodosum a F. serratus, dvou intertidalních hnědých mořských řas. V této práci umožnila 1H a 13C NMR analýza nejen kvantitativní a kvalitativní odhad celkových fenolických sloučenin, ale také přístup k rozdílům ve vazebném profilu mezi purifikovanými fenolickými extrakty obou druhů. Pokud jde o FC test, významně vyšší hladina celkových fenolických sloučenin byla zjištěna u A. nodosum než u F. serratus a výsledky byly validovány testem FC. Dosažené výsledky pomocí qNMR i FC testu navíc prokázaly existenci variací mezi vzorky odebranými každý měsíc a mezi oběma metodikami.

Pro objasnění struktury PTs byla 1H a 13C NMR analýza poprvé použita Glombitzou a jeho skupinou v 70. letech, kdy identifikovali floroglucinol u různých druhů hnědých řas. Složitost spekter spojených s těmito deriváty umožňovala pouze identifikaci menších polyfenolických struktur. V roce 1974 to bylo poprvé, kdy byly chemické struktury bifuhalolu a difloretolu objasněny z 80% ethanolového extraktu C. tamariscifolia [132].

Nicméně od té doby bylo pomocí NMR objasněno více než sto struktur PT [133]. Za tímto účelem se extrakty obvykle podrobují kroku předběžného zpracování hexanem nebo petroletherem, aby se vysrážely velké PT. Kromě toho, aby se zabránilo nestabilitě PT, usnadnilo se NMR analýze a změnila se polarita těchto sloučenin, jsou často acetylovány pomocí acetanhydridu a pyridinu, což umožňuje jejich čištění chromatografií na normální fázi oxidu křemičitého [119]. V 1H NMR spektrech tohoto typu sloučeniny je třeba poznamenat dva aspekty: rezonance aromatických protonů se objevuje mezi 5 6.0 a 7,5 ppm a acetylové skupiny se objevují jako singletové píky mezi 5 2 a 3 ppm . Toto je užitečný nástroj pro stanovení počtu volných hydroxylových skupin v původních nechráněných fenolických látkách. Dva typy aromatických kruhových systémů, které se mohou vyskytovat, jsou znázorněny na obrázku 6. Charakteristické chemické okolí dvou typů protonů (Ha a Hb) mění multiplicitu pozorovaných signálů v 1H NMR, stejně jako jejich integraci.

Společně s1H NMR spektroskopií byla 13C a HSQC a HMBC NMR spektra použita k objasnění struktur purifikovaných PT, včetně Fucales. Heteronukleární korelační-NMR-spektroskopický přístup je užitečný k identifikaci třídy PT z matrice vzorku (monomer, palivo, chlorethyl, plný, fukoflorethol atd.) [134]. Charakteristické signály 13C-NMR PT jsou shrnuty v tabulce 4. Uhlíkové rezonance určitého typu uhlíků, které se objevují při charakteristicko-chemických posunech, spolu s jejich intenzitou umožňují přiřadit některé signály konkrétním třídám PT, zejména floretholům a halám .

V roce 1997 Glombitza et al. [135] popsali izolaci a charakterizaci 33 PT z hnědé řasy Cystophora torulosa. Byly identifikovány různé třídy PT včetně floretholů a hal a fukofloretholů a hydroxyfukofloretholů (příklady na obrázku 7). Kromě toho bylo identifikováno a charakterizováno sedm nových hydroxyfukofloretholů nesoucích další hydroxylové skupiny (NMR a MS). Jak již bylo zmíněno, autoři popsali jejich izolaci jako acetáty, aby se zabránilo oxidaci a zvýšila lipofilita izolovaných derivátů PT [82].

Koch a kol. také prokázali použití 1H a 13C NMR k charakterizaci větších fuhalolacetátů v B. bifurcate [136]. HSQC a HMBC (2D) NMR spektroskopické techniky byly použity Cérantola et al. k zobrazení přítomnosti struktur fukolu a fukofloretholu v extraktech z Fucus spiralis [137]. Stejný přístup byl použit u Halidrys siliquosa, hojně rozšířeného v Bretani. Použití 1D a 2D NMR a MS analýzy umožnilo identifikaci čtyř fenolových derivátů: trifuhalolů a tetrafuhalolů a poprvé difloretholů a trifloretholů [125]. Tabulka 5 shrnuje studie uvedené výše, ve kterých 1H a 13C NMR přispěly k objasnění struktury PT extrahovaných z řas patřících Fucales.

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】