Optimalizace procesu dekolorizace a antioxidační aktivita CiStanche Deserticola Polysacharid Extract metodikou povrchu odezvy

ABSTRAKTNÍ:

 

Objektivní:Pro optimalizaci procesu dekolorizace polysacharidů Cistanche Deserticola a prozkoumat jejich antioxidační aktivitu.

Metody využívající aktivovaný uhlík jako odbarvovací činidlo byly zkoumány účinky 4 faktorů včetně aktivované dávky uhlíku, teploty dekolorizace, doby dekolorizace a pH na rychlost dekolorizace a rychlosti regenerace polysacharidů. Na základě experimentů s jedním faktorem byl proces dekolorizace polysacharidového extraktu Cistanche Deserticola optimalizován pomocí metodiky povrchu odezvy. Použitím metody hodnocení aktivity in vitro, schopnost vychytávání volných radikálů 1, 1- difenyl -2- picrylhydrazine (DPPH), celková redukční schopnost, schopnost hydroxylu radikální úklidová schopnost a 2,2'-vozin bis(3-ethylbenzothiazole- 6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS) cation free radical scavenging ability of the polysaccharides from Cistanche deserticola were determined. Výsledky Optimální podmínky procesu dekolorizace pro extrakt polysacharidů z Cistanche Deserticola byly následující: aktivní dávka uhlíku 20%, teplota dekolorizace 37 stupňů, doba dekolorizace 49 minut, pH 5,03. Za těchto optimálních podmínek činila míra dekoloizrace a míra polysacharidu 62,66% a 96,16%. Po odbarvení se výrazně zvýšily schopnosti vychytávání radikálu DPPH a radikálu s hydroxylem, zatímco schopnosti úklidu aniontového radikálu se výrazně snížily. Závěr Proces dekolorizace se snadno provozuje, s dobrými účinky dekolorizace a mírou regenerace polysacharidů. Má důležitou hodnotu aplikací a poskytuje základ pro pozdější výzkum a vývoj polysacharidu Cistanche Deserticola.

Klíčová slova: Cistanche Deserticolapolysacharid; odbarvování; Metodika povrchu odezvy; Antioxidační aktivita

CiStancheDeserticola efekty

 

1.2.3 Měření míry zotavení polysacharidu

Příprava standardní křivky:
Byla použita metoda kyseliny fenol-sulfurová. Přibližně 0. 0 5 0 0 g glukózového standardu (sušené na konstantní hmotnost při 105 stupňů) byl přesně zvážen a zředěn na 50 ml objemové baňky, aby připravil zásobní roztok. Poté bylo přesně měřeno 1,0 ml zásobního roztoku a zředěno na 10 ml v objemové baňce, aby se získal standardní roztok 0,1 mg/ml. Standardní roztoky 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 a 100 μl glukózy byly přesně měřeny do 1,5 ml odstředivých trubek. Destilovaná voda byla přidána do každé zkumavky, aby se vytvořil celkový objem 100 ul. Jako regulační roztok s prázdným řízením byla použita další 1,5 ml odstředivé trubice obsahující 100 ul destilované vody. K každé zkumavce bylo přidáno 100 μl 5% roztoku fenolu, důkladně smíšeno a poté bylo rychle přidáno 500 ul koncentrované kyseliny sírové. Trubky byly víry po dobu 3 minut a odešly, aby stály 35 minut. Poté bylo 200 ul reakčního roztoku přeneseno do 96- studny a absorbance byla měřena při 490 nm pomocí automatické čtečky mikrodestiček. Standardní křivka byla vynesena absorbancí (Y) jako svislá osa a koncentrace glukózy (x, ug/ml) jako horizontální ose. Získaná standardní rovnice křivky byla:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

Měření obsahu polysacharidů:
Alikvot 100 ul zředěnéhoCiStanche DeserticolaPolysacharidový extrakt byl přesně měřen do 1,5 ml odstředivé trubice. Hodnota absorbance byla stanovena pomocí výše popsané metody a koncentrace polysacharidu byla vypočtena pomocí standardní křivky.

Měření míry zotavení polysacharidu:
Hmotnost polysacharidů vCiStanche DeserticolaExtrakt před a po dekolorizaci byl měřen pomocí výše uvedené metody. Rychlost zotavení polysacharidu byla vypočtena pomocí rovnice (2):

Míra obnovy polysacharidů (%)
= (maftermbefore) × 100%\ left (\ frac {m _ \ text {After}} {_ \ Text {před}}} \ Right) \ Times 100 \%) × 100%
Kde:

Mbeforem _ \ text {před} mbefore a mafterm _ \ text {After} mafter jsou masy ofCiStanche DeserticolaPolysacharidy před a po odbarvení (G).

 

 

1.2.4 Experimentální design s jedním faktorem

Účinky čtyř faktorů-aktivovaných dávkování uhlíku, teploty odbarvení, doba dekolorizace a pH-on odbarvení míry odbarvení a míry regenerace polysacharidůCiStanche DeserticolaByl zkoumán polysacharidový extrakt.

Vliv aktivované dávky uhlíku:
Pevná doba odbarvení při 30 minutách, teplota odbarvení při 50 stupňů a pH při 5,03 (měřená hodnota vzorku). Byl studován vliv aktivované dávky uhlíku na rychlost dekolorizace a míru regenerace polysacharidů.

Vliv teploty odbarvení:
Fixní aktivovaná dávka uhlíku při 20% (m: m), doba dekolorizace po 30 minutách a pH při 5,03. Byl studován vliv teploty dekolorizace na rychlost dekolorizace a rychlost polysacharidu.

Vliv doby odbarvení:
Fixed Activated Carbon dávkování při 20%, teplota odbarvení při 50 stupni a pH při 5,03. Byl studován vliv doby dekolorizace na míru dekolorizace a míru regenerace polysacharidů.

Účinek pH:
Fixní aktivovaná dávka uhlíku při 20% (m: m), teplota dekolorizace při 50 stupni a doba dekolorizace po 30 minutách. Byl studován vliv pH na míru dekolorizace a míru regenerace polysacharidu.

 

1.2.5 Optimalizace povrchu odezvy Experimentální návrh

Na základě optimálních podmínek uvedených v experimentech s jedním faktorem byla experimentální metoda Box-Behnnken použita k provedení čtyřfaktorového třífaktorového tříúrovňového designu pro podmínky odbarvení v podmínkách odbarveníCiStanche Deserticolapolysacharidový extrakt. Míra dekolorizace a míra regenerace polysacharidů byly použity jako indexy hodnocení. Parametry návrhu jsou uvedeny v tabulce 1.

1.2.6 Stanovení antioxidační aktivityCiStanche DeserticolaPolysacharidy

(1) StanoveníCiStanche DeserticolaPolysacharidy 'DPPH radikální vychytávání

Na základě metody Kan Jintao et al. [21] S malými úpravami, 0. 5 ml 1. 0 Mg/Ml Polysacharid vodný roztok byl smíchán s 2,4 ml 0. 1 Mmol/L DPPH Ethanol Solution (1, {{1 0}} difenyl -2- picrylhydrazine) a 1,1 ml destilované vody. Směs byla ponechána reagovat ve tmě rychlostí 37 stupňů po dobu 30 minut. Absorbance reakčního roztoku byla měřena při 517 nm a DPPH radikální rychlost úklidu 1,0 mg/ml polysacharidů před a po odbarvení byla vypočtena pomocí rovnice (3):

Míra radikálního úklidu DPPH (%)

{{{0}} [1− (A1 -A2) A 0] × 100%=} 1 - \ frac {A _1 - {{9}) 100 \%= [1 -A0 (A1 −A2)] × 100%

Kde:

A1A _1 A1 je absorbance vzorkové zkumavky,

A2A _2 A2 je absorbance, když bezvodý ethanol nahradí roztok DPPH,

A {{0}} A _0 A0 je absorbance, když destilovaná voda nahradí vzorek.

 

(2) Stanovení celkové snížení sílyCiStanche DeserticolaPolysacharidy

S odkazem na metodu Lu Xue et al. [22], 1. 0 Mg/ml polysacharidů před a po odbarvení byly připraveny. Do desky 96- bylo přidáno 5 ul vzorek a 180 μl FRAP (antioxidační výkony redukující železitý iont), důkladně promíchány a ponechány reagovat 37 stupňů po dobu 5 minut. Absorbance byla měřena při 593 nm a celková redukční síla polysacharidů byla exprimována z hlediska koncentrace standardního roztoku Feso4.

(3) Stanovení schopnosti vychytávání hydroxylových radikálůCiStanche DeserticolaPolysacharidy

Podle metody popsané v literatuře [23] a pokyny soupravy pro testovací soupravu hydroxylového radikálu, 1. 0 mg/ml polysacharidů před a po odbarvení byly připraveny. Destilovaná voda byla použita k nahrazení peroxidu vodíku pro absorbanci kontrolní skupiny (Acontrola _ \ Text {Control} Acontrol) a destilovaná voda byla použita k nahrazení vzorku pro absorbance skupiny (Ablanka _ \ text {prázdný} Ablank). Hodnoty absorbance byly měřeny při 550 nm a rychlost vychytávání hydroxylu byla vypočtena pomocí rovnice (4):

Rychlost úklidu hydroxylu (%)

=[(Acontrol−Asample)(Acontrol−Ablank)]×100%= \left[ \frac{(A_\text{control} - A_\text{sample})}{(A_\text{control} - A _ \ Text {Blank})} \ Right] \ Times 100 \%= [(ACONTOL −Ablank) (Acontrol -ASample)] × 100%

Kde:

Asamplea _ \ text {sample} asample je absorbance skupiny vzorků,

Acontrola _ \ Text {Control} Acontrol je absorbance kontrolní skupiny,

Ablanka _ \ Text {Blank} Ablank je absorbance prázdné skupiny.

 

(4) Stanovení ABTS kationtové radikální vychytávání schopnostiCiStanche DeserticolaPolysacharidy

Podle metody popsané v literatuře [24] a pokyny ABTS kationtové radikální vychytávací testovací soupravy, 1. 0 mg/ml polysacharidů před a po odbarvení byly připraveny. Vzorek 10 ul byl smíchán s 20 ul roztoku pracovního roztoku činidla čtyři a 170 ul pracovního roztoku ABT, důkladně smíchaný a ponechán reagovat ve tmě při teplotě místnosti po dobu 6 minut. Deionizovaná voda byla použita jako prázdná kontrola. Absorbance byla měřena při 405 nm a rychlost vychytávání radikálu ABTS byla vypočtena pomocí rovnice (5):

Míra vychytávání radikálů ABTS (%)

= [(bblank --brample) bblank] × 100%= \ Left [\ frac {(B _ \ Text {BLANK} - B _ \ Text {Sample})} {B _ \ TEXT] 100 \%= [BBlank (BBlank −bsAmple)] × 100%

Kde:

Bblankb _ \ Text {Blank} Bblank je absorbance reakce mezi roztokem destilované vody a ABTS,

BSampleb _ \ text {Sample} BSample je absorbance reakce mezi vzorem a řešením ABTS.

 

1.3 Zpracování dat

Pro vykreslování byl použit software SigmaPlot 12.5 a pro analýzu dat byl použit software 6 0. 6 Software.