Neutralizace autoprotilátek zlepšuje kapilární poškození a příznaky únavy po infekci COVID{0}}
Jun 13, 2022
Klinické příznaky onemocnění Coronavirus 2019 (COVID-19) jsou způsobeny koronavirem těžkého akutního respiračního syndromu-2 (SARS-CoV-2). Léčba akutních infekcí je podstatným problémem zdravotní péče a rozvoj syndromu long-Covid (LCS) je pro pacienty a lékaře extrémně náročný. Je spojena s řadou charakteristik, jako je narušená kapilární mikrocirkulace,chronický únavový syndrom(CFS),prozánětlivé cytokinya funkční autoprotilátky zacílené na receptory spojené s G-proteinem (GPCR-AAbs). Zde uvádíme kazuistiku úspěšného vyléčení LCS pomocí BC 007 (Berlin Cures, Berlín, Německo), léku na aptamery DNA s vysokou afinitou ke GPCR-AAbs, který tyto AAbs neutralizuje. Pacient s prokázanou anamnézou glaukomu, který se zotavil z lehkého COVID-19, ale stále trpělCFSztráta chuti a zhoršená kapilární mikrocirkulace v makule a peripapilární oblasti. Byl pozitivně testován na různé cílené GPCR-AAbs. Během 48 hodin po jediném ošetření BC 007 byly GPCR-AAbs funkčně inaktivovány a zůstaly neaktivní během období pozorování 4 týdnů. Toto pozorování bylo doprovázeno neustálým zlepšovánímpříznaky únavypacienta, chuti a retinální kapilární mikrocirkulace. Proto by mohlo dojít k odstranění GPCR-AAbzlepšitvlastnostiCFS, jako je poškození kapilár, ztráta chuti aCFS.
Pro více informací o léčbě CFS
ÚVOD
Koronavirus 2 těžkého akutního respiračního syndromu (SARS-CoV-2) způsobil pandemii s globálními zdravotními problémy. Příznaky během akutní infekce a dokonce i po onemocnění Coronavirus 2019 (COVID-19) a dlouhodobém Covid-syndromu (LCS) jsou výzvou pro každého lékaře. Dokonce i klinický rys LCS shrnuje širokou škálu symptomů; lze předpokládat, že různorodost molekulárních mechanismů je základem pro různé klinické charakteristiky LCS (např. plicní restrikce, endokarditida, malátnost, ztráta chuti a kognitivní poruchy). Jedna z těchto klinických jednotek může být indukována autoimunitními mechanismy, o kterých se předpokládá, že se účastní infekce a poté (1). Protože ne každý pacient s onemocněním COVID{0}} bude následně trpět LCS, může být základem hyperstimulace imunitního systému genetická náchylnost (2). V této komplexní imunitní a autoimunitní souhře může docházet k aktivaci žírných buněk, uvolňování prozánětlivých cytokinů, tvorbě neutrofilních extracelulárních pastí (NETóza) a tvorbě autoprotilátek (AAbs).3–8). Zejména AAbs zaměřené na receptory spojené s G-proteinem (GPCR-AAbs) byly pozorovány v séru pacientů, kteří se zotavili z akutního COVID-19, se zjevnou souvislostí s krevní mikrocirkulací (8). Nedávné studie neinvazivní angiografie optické koherentní tomografie (OCT A) naznačovaly, že i měsíce po COVID-19 je narušena oční kapilární mikrocirkulace (9, 36). Navrhujeme, že kapilární poškození může být částečně indukováno agonistickým GPCR-AAb zaměřeným na ß2-adrenergní receptor (ß2-AR). Tato souvislost již byla prokázána v klinických studiích u pacientů s glaukomem (37), které nyní slouží jako základ pro identifikaci GPCR-AAbs jako potenciálního terapeutického cíle u pacientů s poruchou kapilární mikrocirkulace po COVID-19. Zde uvádíme kazuistiku pacienta s vysokými hladinami GPCR-AAbs, poruchou retinální kapilární mikrocirkulace a odpovídajícími klinickými příznaky LCS. Pacient byl sledován před a po neutralizaci GPCR-AAb lékem DNA aptamer s vysokou afinitou k GPCR-AAb, konkrétně BC 007.
VÝSLEDKY Případová zpráva
59-letý muž s 17letou anamnézou glaukomu prodělal infekci COVID-19 dvakrát. Během obou infekcí COVID-19 nebyly sledovány žádné závažné příznaky týkající se nutnosti hospitalizace. První nákaza COVID-19 se vyskytla 04.04.2020. Poté pacient nezaznamenal žádné příznaky. Po chirurgické obnově kvůli spánkové apnoe (září 2020) došlo ke ztrátě chuti, která se během dalších měsíců zlepšila, ale nedosáhla normálu. Předpokládalo se, že pacient trpěl 2. infekcí COVID{10}} na přelomu roku se zhoršením ztráty chuti a progresivním únavovým syndromem od ledna 2021. O dva měsíce později se objevily neurologické příznaky (mozková mlha nedostatek koncentrace a nerovnováha). V květnu 2021 bylo pozorováno, že kanadská kritéria byla 11, Chalderova stupnice únavy 27 a Bell skóre 70, což omezovalo každodenní aktivity pacienta. Navíc diastolická krevtlak se zvýšil (Obrázek 1). Být účastníkem registru Erlanger Glaucoma Registry (EGR, ISSN 2191-5008, CS-2011; NTC00494923) Oftalmologické kliniky Univerzity Erlangen-Nürnberg, séropozitivita AAb zaměřená na ß2-AAb je známo, že existuje již 12 let. Po 1. infekci COVID-19 přetrvával již existující vzorec AAb u pacienta a další AAb cílily na receptor angiotenzinu-1 (AT-1-AAb), 1-adrenergní receptor ( {{0}}AAb), MAS receptor (MAS-AAb) a muskarinový2-receptor (M2-AAb) byly monitorovány v biotestu na kardiomyocytech. Bylo zjištěno, že nejlépe korigovaná zraková ostrost (BCVA) je 0,8 (desítková, pravé oko, RE) a 0,6 (desítková, levé oko, LE). Nitrooční tlak (IOP) byl pod lokálními antiglaukomatózními očními kapkami (Taflfluprost 15) zjištěn 13 mm Hg (RE) a 13 mm Hg (LE).µg/ml; jednou
den). Kromě toho již byla na LE provedena Nd:YAG iridotomie, trabekulektomie a operace katarakty. Optický disk vykazoval glaukomové změny [RE: I, LE: II, klasifikováno po Jonasovi (10, 11)]. Průměrná vada byla zjištěna 5,6 dB (RE) a 7.0 dB (LE). Optická koherentní tomografie – angiografie (OCT-A) (Spectralis II OCT-A, Heidelberg Engineering, Heidelberg, Německo) prokázala ve srovnání s normativními údaji zhoršenou kapilární mikrocirkulaci v makule a peripapilární oblasti (Obrázky 2A–D). Před léčbou BC 007 nebylo provedeno žádné očkování proti SARS-CoV-2. Vzhledem k séropozitivitě ß2-AAb, AT-1-AAb, 1-AAb, MAS-AAb a M2-AAb a jejich potenciální souvislost s narušenou retinální mikrovaskulaturou jsme se společně s pacientem rozhodli provést pokus o vyléčení aptamerem BC 007 (Berlin Cures GmbH, Berlín, Německo). Cílem bylo (1) eliminovat AAb proti GPCR-AAbs a (2) zlepšit narušenou kapilární mikrocirkulaci měřenou pomocí OCT-A. Kromě toho jsme zamýšleli zlepšit syndrom chronické únavy (CFS). Po a během infuze BC 007 (1350 mg v NaCl; po dobu 75 minut v poloze na zádech) nebyly pozorovány žádné závažné vedlejší účinky. Séropozitivita pro ß2-AAb, AT-1-AAb, 1-AAb, MAS AAb a M2-AAb byly vyhodnoceny (Obrázek 3). Retinální kapilární mikrocirkulace byla měřena pomocí OCT-A, protože hustota retinálních cév slouží jako korelát pro systémovou mikrocirkulaci (Obrázky 2A–D). Symptomy chronické únavy byly hodnoceny třemi standardizovanými skóre (kanadská kritéria, škála Chalderovy únavy a Bell skóre;Obrázek 4). Již 2 hodiny po infuzi BC 007 se aktivita ß2-AAb, AT-1-AAb, 1-AAb, MAS AAb a M2-AAb byly sníženy a hustota makuly a peripapilárních cév se zvýšila. Jeden den po infuzi BC 007 bylo pozorováno, že GPCR-AAb jsou na hranici a po 2 dnech nebyla pozorována žádná funkční aktivita pro všechny AAbs v biotestu na kardiomyocytech (12). Pacient zůstal séronegativní na ß2-AAb, AT-1-AAb, 1-AAb, MAS-AAb a M2-AAb po dobu 4 týdnů po infuzi BC 007 (Obrázek 3). Zlepšení retinální mikrocirkulace, pozorované krátce po infuzi BC 007, se kontinuálně zvyšovalo ve dnech 1 a 2 a zůstalo na trvale zvýšené úrovni v ex ante srovnání během období pozorování 4 týdnů (Obrázky 2A–D).
OBRÁZEK 2 |Měření očních parametrů (kapilární mikrocirkulace,A–D; nitrooční tlak,E): Kapilární mikrocirkulace makuly a peripapilární oblasti, snímaná optickou koherentní tomografií-angiografií (OCT-A): byla sledována hustota cév (VD) ve třech vrstvách makuly (superficial vascular plexus, SVP,A; intermediární kapilární plexus, ICP,B; hluboký kapilární plexus, DCP,C) a peripapilární oblasti(D). Hustota cév makuly byla po infekci COVID-19 snížena ve srovnání s předchozími údaji z roku 2018. Po léčbě BC 007 se VD zvýšila ve všech třech vrstvách makuly a peripapilární oblasti a byla stabilní alespoň po dobu období pozorování 4 týdny (šedá: rozsah VD u normálních očí, tečkovaná čára: referenční úroveň VD po infekci COVID-19). Data levého oka jsou ukázána, protože kvalita OCT-A skenů pravého oka nebyla využitelná kvůli ztížené fixaci pacienta přítomností katarakty.(E) Nitrooční tlak (IOP, mmHg; měřeno Goldmannovou aplanační tonometrií) byl sledován před a po léčbě BC 007; byly uvedeny referenční údaje z roku 2018 (EGR, ISSN 2191-5008, CS-2011; NTC00494923): NOT byl po léčbě BC 007 snížen, protože hladina NOT byla stabilní, ale bez očních kapek snižujících NOT (antiglaukomatózní oči kapka před léčbou BC 007: Taflfluprost 15µg/ml, jednou denně; po léčbě BC 007: bez lokální terapie snižující IOP); w-týden; 1. infekce COVID-19: 04/2020; předpokládaná 2. infekce COVID-19: přelom roku 2021.
OBRÁZEK 3 |Autoprotilátky (AAbs) proti receptorům spojeným s G-proteinem (ß2-AAb, AT-1-AAb, 1-AAb, MAS-AAb a M2-AAb) před (v den infuze, před léčbou, jedna hvězdička) a po léčbě BC 007 [po 2 h (dvojitá hvězdička), 1 den, 2 dny a 1–4 týdny]: funkční aktivita pozitivního a negativního chronotropního účinku různých AAbs byla snížena i po 2 hodinách a funkčně neaktivní alespoň po dobu sledování 4 týdnů (mezní hodnota 1,8 tepu /15 s); w-týden.
OBRÁZEK 4 |Chronický únavový syndrom (CFS) byl hodnocen kanadskými kritérii, škálou Chalder Fatigue Scale a Bellovým skóre před a po léčbě BC 007: CFS byl snížen po léčbě BC {{8} }07, chybí po 4 týdnech; nižší je kanadská kritéria a stupnice únavy Chaldera, nižší je CFS; čím vyšší je Bell skóre, tím nižší je CFS; w, týden; rozsah skóre – skóre kanadských kritérií: 0 (nejlepší)–34 (nejhorší): Stupnice únavy Chaldera: 0 (nejlepší)–33 (nejhorší); Bell skóre: 100 (nejlepší)–0 (nejhorší).
V souladu se zvýšenou retinální kapilární mikrocirkulací se symptomy únavy pacienta neustále zlepšovaly (Obrázek 4). Mozková mlha, nedostatek koncentrace a nerovnováha se neustále zlepšovaly a po 4 týdnech chyběly. Ztráta chuti rozpuštěna. Jako pozitivní vedlejší účinek jsme pozorovali snížení nitroočního tlaku (IOP) v obou očích (Obrázek 2E). NOT prokázal stabilní sledování, nyní bez preexistující lokální terapie glaukomu. Ve skutečnosti během období sledování 4 týdnů byl pacient zbaven antiglaukomatózní medikace. Kromě toho byl snížen dříve zvýšený diastolický krevní tlak (Obrázek 1).
DISKUSE
Infekce Corona Virus Disease 2019 byla v roce 2020 hodnocena jako pandemický problém zdravotní péče. Kromě klinických příznaků během akutní infekce SARS-CoV-2 (např. plicní komplikace, vaskulitida a tromboembolismus) pacienti po uzdravení často trpí LCS . Nedávné studie diskutovaly o zapojení autoimunity během infekce COVID- 19 a po ní. Mikrotrombóza (imunitní trombóza) a samotný zánět jsou spouštěny v této složité patofyziologii (13–15), potenciálně zprostředkované několika vzájemně se ovlivňujícími faktory (např. IL-1 zprostředkované uvolňování tromboxanu B2, IL-6, aktivace endoteliálních buněk, formace neutrofilní extracelulární pasti (NET) (7, 16– 18). V séru pacientů s COVID-19 byly pozorovány různé funkční aktivní a neaktivní AAbs zaměřené na 52 a 60 kDa SSA/Ro (19) a interferon- (20).
Funkčně aktivní (tj. agonistické) AA jsou velmi zajímavé s ohledem na jejich škodlivý potenciál a byly pozorovány v sérech pacientů po COVID-19 (8). Překvapivě každý z těchto GPCR-AAb (ß2-AAb, AT-1-AAb, 1-AAb, MAS-AAb a M2-AAb) cílí na vazoaktivní receptory. Vazba ß2-AAb na retinální mikrovaskulaturu byla nedávno pozorována u pacientů s glaukomem (37). Pacienti s agonistickým ß2-AAb vykazovali poškozenou foveální avaskulární zónu (FAZ, skenováno pomocí OCT-A) se zaměřením na intermediální kapilární plexus. U živého člověka existují pouze dvě oblasti, ve kterých lze skenovat a monitorovat kapilární mikrocévy, a kvantifikováno neinvazivně: (1) záhyb nehtu mikroskopií, (2) sítnice pomocí OCT-A. OCT-A je nová technika, která umožňuje neinvazivní skenování kapilárního systému sítnice s vysokým rozlišením (nízkýmµrozsah m). Doposud je k dispozici pouze jeden přístroj OCT A (Spectralis II OCT-A), který skenuje zájmovou oblast ve třech mikrovaskulárních vrstvách. Tyto mikrovaskulární OCT-A skeny dobře korelují s lidskou anatomií (21). Předchozí studie ukázala, že zejména v intermediálním kapilárním plexu (ICP) a peripapilární oblasti byla po COVID-19 pozorována významně snížená hustota cév (VD) ve srovnání se zdravými očima (36). V případech těžkého COVID-19 během akutní infekce byly narušeny i sousední retinální mikrovaskulární vrstvy (SVP, DCP). Kromě toho byly tyto retinální nálezy spojeny s markery klinické závažnosti (např. nejvyšší hladina D-dimeru a nejvyšší hladina glutamát-pyruváttransaminázy).
Předpokládáme tedy, že narušená retinální a peripapilární mikrocirkulace může sloužit jako korelát pro stav systémového kapilárního postižení s možná odlišnou fokální expresí po infekci SARS-CoV-2. Předpokládáme, že funkční vazoaktivní GPCR-AAbs přispívají k poškození mikrocirkulace. Navíc, vzhledem k úloze ß-adrenergních receptorů při stimulaci produkce IL-6 (22), je pravděpodobné, že neutralizace GPCR-AAbs může dodatečně snížit reziduální zánět zprostředkovaný IL-6-, pokud je přítomen. Tato molekulární cesta rozhodně není specifická pro COVID- 19. Je známo, že pacienti s glaukomem vykazují agonistické ß2-AAb, které jsou spojeny se zvýšeným IOP (23, 24) jako nespecifická imunoaferéza eliminuje funkční aktivní ß2-AAb doprovázenou poklesem NOT a/nebo množstvím antiglaukomových očních kapek (23). AT-1-AAb byly dříve hlášeny v sérech pacientů s maligní hypertenzí nebo preeklampsií (25, 26). ß2-AAb a M2-AAb již byly pozorovány u pacientů s CFS, nezávisle na COVID-19 (27). Předpokládáme tedy, že existují různé spouštěče, které stimulují imunitní systém (např. zánět a ischemii) za účelem vytvoření GPCR-AAb.
Tyto koexistující faktory by mohly být vytvořeny jako začarovaný kruh, protože bylo pozorováno, že GPCR-AAb působí zejména v ischemických nebo zánětlivých oblastech (28). Vazba a neutralizace GPCR-AAb by byla skvělou možností, jak eliminovat jejich funkční aktivitu u onemocnění se séropozitivitou GPCR AAb (23). BC 007 je aptamer, který váže a neutralizuje různé GPCR-AAb. Je to nemodifikovaný 15-mer DNA oligonukleotid (aptamer), který se skládá z devíti guanosinových (purinový nukleosid) a šesti thymidinových (pyrimidinový nukleosid) nukleosidů následující sekvence 5′ –GGT TGG TGT GGT TGG-3′ . Bylo zjištěno, že neutralizuje široké spektrum patogenních GPCR-AAbs (29, 30). BC 007 je v současné době ve fázi-2 klinické studie pro léčbu srdečního selhání u pacientů, kteří jsou séropozitivní na ß1-AAb. BC 007 má příznivý bezpečnostní profil a je dobře snášen jako intravenózní infuze až 1900 mg iv po dobu 75 minut, jak bylo testováno ve studii zaměřené na zjištění dávky. Očekávanou vedlejší reakcí byl přechodný antikoagulační účinek (mírné až střední zvýšení PTT, PT a INR), který se normalizuje ihned po ukončení infuze. Pokus o vyléčení pomocí BC 007 byl proveden, když se závažnost LCS během 5 měsíců po 2. infekci COVID{13}} (tj. 13 měsíců po 1. infekci COVID{16}}) zvýšila. Předpokládáme tedy, že snížení LCS je způsobeno účinkem neutralizace GPCR-AAbs zprostředkované BC 007-, a nikoli kvůli vyřešení infekce. Předchozíin vitroexperimenty naznačovaly, že BC 007 se neváže a neneutralizuje specifické protilátky anti-SARS CoV-2 (31). Vzhledem k tomu, že pacient uvedený v tomto rukopisu byl před léčbou BC 007 séronegativní na specifické protilátky anti-SARS CoV-2, nemůžeme tento problém řešit. Na závěr zde uvádíme pozoruhodný obrat LCS s různými charakteristikami u pacienta se séropozitivitou na GPRC-AAbs neutralizací těchto GPCR-AAb pomocí aptameru BC 007. Specifická neutralizace posledně jmenovaného zlepšila retinální kapilární mikrocirkulace a symptomy chronické únavy, které vznikly z LCS. Paralelně zmizela ztráta chuti, nerovnováha a mozková mlha a IOP a krevní tlak (diastolický) mohly být sníženy.
METODY Biotest na kardiomyocytech
Pro detekci GPCR-AAb byl použit zavedený citlivý biologický test, protože ELISA poskytla vysokou specificitu ve zvířecích vzorcích, ale ne ve vzorcích lidí (32). Spontánně byly tlučící krysí kardiomyocyty kultivovány po dobu 4 dnů a poté použity pro experimenty, jak je podrobně popsáno (33). Rychlost tepování byla počítána na šesti vybraných polích kultivační baňky umístěné na vyhřívaném stolku inverzního mikroskopu (37◦C) po dobu 15 sekund. Preparát IgG obsahující AAb v séru pacientů byl použit v ředění 1:50. Biotest na kardiomyocytech byl inkubován se sérem pacienta (po dobu 60 minut; ředění 1:40). Bylo zjištěno, že cut-off je 1,8 tepu/15 s.
Skóre chronické únavy
Skóre chronické únavy (CF) bylo použito následovně: Kanadská kritéria, Chalderova stupnice únavy a Bell skóre. Čím více je pokles kanadských kritérií a škály Chalderovy únavy, tím veselejší jsou symptomy CF u pacienta. Čím více je zvýšení Bell skóre, tím veselejší jsou příznaky CFS.
Optická koherenční tomografie–angiografie
Hustota cév sítnice (VD) byla skenována přístrojem Heidelberg Spectralis II (Heidelberg Engineering, Heidelberg, Německo). Byly sledovány dvě anatomické oblasti oka (úhel snímání: 15◦ × 15◦; velikost skenu: 2.9× 2,9 mm; celková velikost skenu: 8,41 mm2; průměr vnitřního kroužku: 0.8 mm; průměr vnějšího prstence: 2,9 mm): makula a peripapilární oblast. Skenováním oblasti makuly lze provést rozdělení oblasti do tří mikrovaskulárních vrstev: povrchový vaskulární plexus (SVP, tloušťka: 80µm), intermediální kapilární plexus (ICP, tloušťka: 50µm) a hluboký kapilární plexus (DCP, tloušťka: 40µm).
V jednom celku byly skenovány peripapilární mikrocévy vrstva, kterou poskytuje společnost. Skenování bylo provedeno v nejvyšším komerčně dostupném laterálním rozlišení 5,7µm/pixel. Po ruční kontrole správné segmentace nebo artefaktů byla analýza skenů provedena nástrojem Erlangen-Angio Tool (EA-Tool; verze 3.0; Matlab, The MathWorks, Inc., R2017b), který umožňuje kvantifikaci VD s vysokou reprodukovatelností a spolehlivostí (34). EA-Tool (verze 3.0) je pokročilý software, který implementuje Anatomický polohovací systém (APS, součást Glaucoma Module Premium Edition [GMPE], Heidelberg Engineering, Německo). Modul APS umožňuje přesné zarovnání OCT-A skenů k individuální ose Fovea-to Bruch's Membrane Opening-Center (FoBMOC) každého pacienta ("APS-ify"). Pokročilý nástroj EA-Tool (verze 3.0) navíc implementuje možnost analyzovat peripapilární VD podle orientačních bodů BMO (peripapilární VD na bázi BMO), které představují přesnou hranici terče zrakového nervu. Souřadnice BMO a APS byly exportovány softwarem SPX1902 (prototypový software, Heidelberg Engineering, Heidelberg, Německo) (35).
NAJDĚTE NEJLEPŠÍ BOTANICKÉ HOLISTICKÉ LÉČBY PRO chronický únavový syndrom CFS
Naše pečlivě ručně vyrobená receptura Neuro Regen obsahuje ty nejlépe prozkoumané bylinky. Každý ukazuje úžasný potenciál proÚleva STRESUmanagement plus celková podpora nervů a neuronů.
Zahrnuje:
Cistanche-
Cistancheje nejčastěji používaná bylina v receptech tradiční čínské medicíny pro zmírnění fyzické únavy, zejména po prodělaném nějakém závažném onemocnění. Ve skutečnosti,Cistancheje druh potravinářského materiálu. Na teoretickém základě tradiční medicíny provedla moderní medicína také mnoho výzkumůúčinek proti únavě zCistanche. Experimenty prokázaly, žeprotiúnavový účinek přípravku Cistancheje způsobeno zlepšením tělesných orgánůCistanche. Cistanche umízlepšit funkci ledvin a jater, čímž se dosáhne anúčinek proti únavě. Následuje přehled toho, jak Cistanche umízmírnit únavu.
S rozvojem společnosti je život lidí stále rychlejší. Od chvíle, kdy vyjde slunce, jako součást „živého stroje“ musí každý spěchat na svá stanoviště. Ať už jste technik stojící v dílně, obchodník s akciemi sedící u počítače nebo dokonce student hrající si na hřišti...musíte čelit nespočtu tlaků. Práce lidí jsou různé, ale všechny mají jeden společný problém – únavu. Únava je jako šváb schovaný v rohu kuchyně. Nemá žádnou podstatnou škodu, ale vždy sužoval lidi.
Pokud máte nějaké návrhy a dotazy týkající se cistanche, jsem tu, abych vám pomohl s jakýmkoli zmatkem!
