Rozdíly ve složení a léčivé účinnosti syrových produktů a vína Produkty zpracované v páře od Cistanches Herba Ⅱ
Sep 10, 2024
2.3.3 Detekce tělesné hmotnosti a tělesné teploty
Potkani byli krmeni adaptivně po dobu 1 týdne, zaznamenán jako 0 den, a byla zaznamenávána tělesná hmotnost a rektální teplota; poté, co byla injekce hydrokortison sukcinátu sodného nepřetržitě podávána po dobu 14 dnů, bylo zaznamenáno 14 dnů a byla zaznamenána tělesná hmotnost a rektální teplota; po úspěšném modelování byla léčba lékem prováděna podle dávkovacího schématu po dobu 30 dnů, zaznamenaných jako 44 dnů, a byla zaznamenávána tělesná hmotnost a rektální teplota.
2.3.4 Detekce frekvence spontánní aktivity
Počet aktivit krys během 5 minut byl zaznamenáván pomocí multifunkčního zapisovače spontánní aktivity krys. Krysy byly umístěny do přístroje pro spontánní aktivitu, první 3 minuty byly adaptační období a počet spontánních aktivit potkanů byl počítán zapisovačem v posledních 5 minutách. V místnosti by mělo být ticho, teplota v místnosti by měla být udržována na 18-22 stupních a vlhkost by měla být udržována na 45 %-65 %. Byl zaznamenán počet spontánních aktivit v 0, 14 a 44 dnech.
2.3.5 Detekce sérového indexu
Po anestezii potkanů byla odebrána krev z břišní aorty, umístěna do koagulační zkumavky a centrifugována při 2,{1}} ot./min po dobu 15 minut, aby se detekoval obsah T, E2, CREA a BUN v sérum.

VYSOCE KVALITNÍ CISTANCHE PRO NEMOCI LEDVIN
Podpůrná služba Wecistanche
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
2.3.6 Výpočet orgánového indexu
Po anestetizaci krys a odběru krve byly ledviny, varlata, nadvarlata, semenné váčky a prostata vyjmuty, otřeny do sucha filtračním papírem a hmota byla ihned zvážena. Orgánový index byl vypočten na základě hmotnosti potkana.
Orgánový index=orgánová hmota/tělesná hmota
2.3.7 Detekce tkání
Poté, co byla krysí varlata vyjmuta, byla hmota zvážena a okamžitě umístěna do chladničky -80 stupňů k zmrazení. Před měřením byly vyjmuty, rozmraženy a byl přidán předem vychlazený fyziologický roztok, aby se vytvořil tkáňový homogenát za podmínek ledové lázně, a byl připraven 10% tkáňový homogenát. Homogenát byl okamžitě centrifugován při 5,{4}} r/min po dobu 10 minut a supernatant byl odebrán k použití. Podle požadavků kitu byla pro stanovení obsahu SOD v tkáni varlete použita metoda hydroxylaminu a pro stanovení obsahu MDA ve tkáni varlete metoda TBA.

Obr. 2 Diagram celkového iontového proudu Cistanches Herba a Cistanches Herba dušeného vína v režimu záporných iontů Obr.
3 Výsledky
3.1 Rozdíly ve složení Cistanche deserticola před a po zpracování
3.1.1 Celkový diagram toku iontů
V této studii detektor hmotnostního spektrometru využíval zdroj ionizace elektrosprejem v režimu záporných iontů (ESI−). Obrázek 2 ukazuje celkový diagram toku iontů surového Cistanche deserticola a produktů dušených na víně v režimu záporných iontů. Je vidět, že složení vzorků Cistanche deserticola je velmi složité a mezi syrovou Cistanche deserticola a produkty dušenými na víně jsou zřejmé rozdíly. Kromě toho bylo prohledáním existující databáze a konzultací relevantní literatury pro elementární složení a shodu sloučenin identifikováno celkem 45 sloučenin, jak je uvedeno v tabulce 3.
Tabulka 3 Identifikované sloučeniny ve vzorcích Cistanches Herba
3.1.2 Výsledky PCA
PCA diagramy syrové Cistanche deserticola a produktů dušených na víně jsou zobrazeny na obrázku 3, které lze seskupit samostatně. Lze určit, že musí existovat rozdíly ve složení Cistanche deserticola před a po zpracování.
3.1.3 Výsledky OPLS-DA
Po zpracování OPLS-DA je diagram S-Plot zobrazen na obrázku 4. Dva konce křivky ve tvaru písmene S na obrázku představují charakteristické znaky s největším přínosem v každé skupině. Analýzou dat fragmentových iontů s hodnotami VIP většími než 1 na obou koncích křivky ve tvaru S a porovnáním s kontrolou byly identifikovány čtyři rozdílné složky: echinakosid (tR=8,39 min, m/z 785. 250 9), verbaskosid (tR=11,51 min, m/z
623.198 1), isoverbaskosid (tR=13,38 min, m/z623.198 1) a tubulosid B (tR=18,41 min, m/z 665. 208 7).

VYSOCE KVALITNÍ CISTANCHE LIQUER PRO NEMOCI LEDVIN
3.2 Výsledky pokusů na zvířatech
3.2.1 Obecné sledování stavu
Po modelování krysy vykazovaly řadu příznaků, jako je milování tepla a strach z chladu, kroucení a prohýbání zad, netečnost, matná a rozcuchaná srst, studené končetiny, snížená chuť k jídlu, snížená tělesná hmotnost a čistá moč. Po podání se výše uvedené symptomy v každé skupině významně zlepšily.
3.2.2 Změny stravy a dobrovolné aktivity potkanů po modelování
Po kontinuální injekci hydrokortison sukcinátu sodného po dobu 14 dnů byla měřena tělesná hmotnost, počet dobrovolných aktivit během 5 minut a příjem potravy, příjem vody a výdej moči u potkanů v každé skupině, aby se určilo, zda model nedostatku yang hydrokortizonu ledvin byla úspěšně založena. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 4. Jak ukazuje tabulka 4, po 14 dnech podávání hydrokortizonu ve srovnání s normální skupinou všechny skupiny vykazovaly snížení tělesné hmotnosti, snížení příjmu potravy, zvýšení příjmu vody, zvýšení výdeje moči a snížení dobrovolné aktivity a byly zjištěny významné rozdíly (P < 0,05). Podle popisu některých syndromů nedostatečnosti jangu ledvin v klinické diagnostice a léčebné terminologii tradiční čínské medicíny: „strach z chladu a studených končetin, zejména pod pasem a koleny, bledá nebo tmavá pleť, čistá a dlouhá moč, časté močení při noc, světlý jazyk s bílou srstí, slabý puls atd." V kombinaci s pozorováním celkového stavu po modelování byly symptomy po modelování v souladu s popisem deficitu jangu ledvin, což naznačuje, že modelování bylo úspěšné.
| Žádný. | Sloučenina | t/min | Ionizační režim | Molekulární vzorec | Teoretická hodnota (m/z) | Experimentální hodnota (m/z) | Chyba (×10⁻⁶) | Informace o fragmentu (m/z) |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Hroznový cukr | 0.79 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 179.055 | 179.055 | 0.20 | 97, 89 |
| 2 | Tanin z hroznů | 0.81 | [M–H] | C₁₅H₁₄O₈ | 331.139 | 331.139 | 1.53 | 295, 313, 311 |
| 3 | Sorbitol | 0.88 | [M–H] | C₁₂H₂₂O₁₁ | 341.108 | 341.108 | 1.50 | 179, 161, 143, 131 |
| 4 | Polovina mléčného cukru | 1.10 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 181.071 | 181.071 | 2.68 | 163, 101 |
| 5 | Živina rostlinného původu C | 1.20 | [M–H] | C₂₈H₄₃O₁₂ | 561.197 | 561.197 | -0.01 | 543, 461, 399 |
| 6 | Borovicový cukr | 1.21 | [M–H] | C₁₆H₂₀O₈ | 341.123 | 341.124 | 1.63 | 179, 161, 143, 131, 119 |
| 7 | Kyselina jantarová | 1.52 | [M–H] | C₄H₄O₄ | 117.018 | 117.019 | 3.40 | 99, 73 |
| 8 | Živina na rostlinné bázi B | 2.04 | [M–H] | C₂₈H₃₃O₁₃ | 577.192 | 577.192 | -0.03 | 297, 208, 183, 178, 171, 153 |
| 9 | Čajové flavonoidy | 2.20 | [M–H] | C₇H₆O₆N₂ | 164.071 | 164.072 | 1.00 | 103 |
| 10 | Výtažek z pekingské hrušky | 3.73 | [M–H] | C₁₄H₁₂O₁₁ | 373.113 | 373.115 | 5.48 | 355, 327, 297 |
| 11 | Extrakt z Goji Berry | 4.28 | [M–H] | C₂₀H₂₄O₁₈ | 461.169 | 461.169 | 0.00 | 485, 293, 215, 197, 167 |
| 12 | Extrakt z listů ananasu | 4.74 | [M–H] | C₁₁H₁₂O₇ | 487.145 | 487.146 | 0.88 | 389, 179 |
| 13 | Extrakt z květu ibišku | 4.63 | [M–H] | C₂₄H₂₈O₁₀ | 537.197 | 537.197 | 0.00 | 501, 415, 375, 357 |
| 14 | 8- -Hydroxylakton | 5.27 | [M–H] | C₁₂H₂₀O₈ | 241.096 | 241.097 | 0.04 | 213, 189 |
| 15 | Rhizoma Dioscoreae | 6.10 | [M–H] | C₁₈H₂₄O₈ | 361.115 | 361.113 | 2.20 | 309, 163, 137 |
| 16 | Výtažek ze slámy | 6.82 | [M–H] | C₁₅H₂₁O₁₀ | 327.108 | 327.109 | 1.00 | 307, 195 |
| 17 | Včelí pyl | 7.20 | [M–H] | C₁₄H₂₈O₈ | 437.472 | 437.472 | 0.00 | 393, 373, 355 |
| 18 | -Karoten | 7.53 | [M–H] | C₂₉H₄₆O₁₆ | 629.192 | 629.192 | 0.00 | 617, 479, 459, 315, 221 |
| 19 | Fialový sladký brambor | 7.70 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 20 | Výtažek z pekingské hrušky | 8.02 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 21 | Výtažek z broskvového květu | 8.09 | [M–H] | C₂₈H₄₀O₁₂ | 561.197 | 561.197 | 0.00 | 543, 461, 399 |
| 22 | Ženšenový extrakt | 10.39 | [M–H] | C₈H₁₈O₈ | 799.266 | 799.266 | 0.03 | 417, 439, 543, 561 |
| 23 | Oolong čajový extrakt | 10.63 | [M–H] | C₂₄H₃₄O₁₆ | 539.149 | 539.149 | 0.10 | 637, 621, 471, 473 |
| 24 | Extrakt z lotosových listů | 11.51 | [M–H] | C₂₇H₃₄O₁₂ | 549.197 | 549.197 | 0.00 | 197, 153, 135 |
| 25 | Extrakt z chlupatých květů | 11.51 | [M–H] | C₂₉H₄₈O₁₆ | 623.197 | 623.196 | -0.21 | 387, 531 |
| 26 | Extrakt z bambusových výhonků | 11.51 | [M–H] | C₃₇H₄₈O₂₁ | 827.261 | 827.259 | -1.92 | 461, 315, 135, 297, 161 |
| 27 | Chryzantémový extrakt | 11.60 | [M–H] | C₂₁H₃₀O₉ | 429.118 | 429.118 | 0.00 | 663, 625, 413 |
| 28 | 6-Acetyl Flavon | 12.32 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₆ | 345.118 | 345.119 | 0.02 | 301, 281 |
| 29 | Extrakt z ovoce Longan | 13.41 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₈ | 417.154 | 417.159 | -0.11 | 165, 119, 327, 129, 27 |

Obr. 3 Schéma analýzy hlavních složek CistanchesHerba (1) a Cistanches Herba (2) dušené ve víně.

Obr. 4 S-Plot cistanches Herba a vinné dušenéCistanches Herba
Tabulka 4 Změny ve stravě a autonomní aktivitě potkanů po modelování (xs ± , n=10)
| Skupina | Tělesná hmotnost (g) | Příjem potravy za 24 hodin (g) | Příjem vody za 24 hodin (ml) | 24h výdej moči (ml) | 5 min Počet spontánních aktivit |
|---|---|---|---|---|---|
| Normální | 285.14 ± 9.26 | 15.81 ± 2.19 | 20.86 ± 3.59 | 11.09 ± 2.57 | 100.4 ± 14.7 |
| Model | 226.67 ± 12.14* | 11.92 ± 3.69* | 32.53 ± 4.65* | 15.58 ± 6.38* | 72.7 ± 11.6* |
| PR | 222.89 ± 9.87* | 10.65 ± 4.20* | 31.54 ± 3.55* | 19.36 ± 5.20* | 68.9 ± 18.0* |
| ZAJATEC | 219.16 ± 10.75* | 12.37 ± 3.42* | 29.11 ± 4.78* | 16.01 ± 3.96* | 62.8 ± 14.9* |
| JK | 230.02 ± 7.95* | 10.22 ± 2.26* | 34.57 ± 5.36* | 19.13 ± 7.57* | 69.3 ± 11.3* |
Poznámky:
Srovnání s normální skupinou: *P < 0.05.
*P < 0.05 vs. normální skupina.
Tabulka 5 Změny tělesné hmotnosti potkanů během dávkovacího cyklu (xs ± , n=10)
| Skupina | Tělesná hmotnost (g) | 0 d | 14 d | 44 d |
|---|---|---|---|---|
| Normální | 192.12 ± 5.48 | 285.14 ± 9.26 | 430.02 ± 6.14 | |
| Model | 187.24 ± 4.56* | 226.67 ± 12.14* | 328.33 ± 14.77* | |
| PR | 185.07 ± 5.11 | 222.89 ± 9.87* | 345.25 ± 8.22*# | |
| ZAJATEC | 183.48 ± 6.44 | 219.16 ± 10.75* | 362.17 ± 7.82*#Δ | |
| JK | 194.13 ± 5.90 | 230.02 ± 7.95* | 356.94 ± 7.47*# |
Poznámky:
*P < 0.05 vs. normální skupina.
*P<{{0}}.05 vs. normální skupina; #P<0,05 vs. modelová skupina; △P<0,05 vs. PRgroup. Stejné jako níže.
3.2.3 Změny tělesné hmotnosti potkanů
Na základě trojnásobných změn tělesné hmotnosti v 0, 14 a 44 dnech byl analyzován účinek im injekce hydrokortison sukcinátu sodného na tělesnou hmotnost krys a zotavení tělesné hmotnosti krys po intervenční léčbě. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 5.
Z tabulky 5 je vidět, že po 1 týdnu adaptivního krmení se tělesná hmotnost potkanů zvýšila a byla relativně vyrovnaná. Tělesné hmotnosti všech krys byly (200 ± 20) g. Mezi skupinami nebyl žádný významný rozdíl, což naznačuje, že krmné prostředí a dietní podmínky jsou vhodné pro přežití potkanů. Po 14 dnech podávání hydrokortizonu ve srovnání s normální skupinou bylo zvýšení tělesné hmotnosti krys v modelové skupině a každé lékové skupině sníženo a byl zde významný rozdíl (P<0.05). The body weight of the rats in the normal group was

3.2.4 Změny tělesné teploty potkanů
Na základě trojnásobných změn tělesné teploty v 0, 14 a 44 dnech byl analyzován účinek intramuskulární injekce injekce hydrokortison sukcinátu sodného na tělesnou teplotu krys a obnovení tělesné teploty krys po lékové intervenci . Výsledky jsou uvedeny v tabulce 6.
3.2.5 Změny spontánních aktivit potkanů
Na základě změn v počtu spontánních aktivit za 3 dny v 0, 14 a 44 dnech účinek im injekce hydrokortison sukcinátu sodného na počet spontánních aktivit u potkanů a obnovení počtu spontánních byly analyzovány aktivity u potkanů po intervenční léčbě. Výsledky Viz tabulka 7.
Z tabulky 7 je vidět, že 14 dní po injekci hydrokortizonu se ve srovnání s normální skupinou počet spontánních aktivit během 5 minut u každé druhé skupiny významně snížil a byl zde významný rozdíl (P<0.05). One month after administration, compared with the model group, the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group increased (P<0.05); compared with the normal group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group; Compared with the JK group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities among the Cistanche deserticola administration groups. It shows that Cistanche deserticola extract can increase the number of spontaneous activities in rats with kidney-yang deficiency, and after 30 days of treatment, the number of spontaneous activities is close to that of normal rats.
3.2.6 Orgánový index
Po 30 dnech nepřetržitého podávání byly krysy 12 hodin nalačno a utraceny. Byla měřena kvalita orgánů. Účinky modelu deficitu jangu ledvin indukovaného hydrokortisonem na orgány krys a podávání různých extraktů z Cistanche deserticola byly pozorovány z orgánové úrovně. Obnova orgánů potkana po užití léku. Po podání hydrokortizonu se tělesná hmotnost potkanů velmi měnila a výrazně se změnila i tělesná hmota. Tento experiment používal orgánový index jako ukazatel, který je třeba zvážit
Účinky na orgány byly pozorovány před a po podání. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 8.
Z tabulky 8 je vidět, že ve srovnání s normální skupinou se po intramuskulární injekci hydrokortison sukcinátu sodného u potkanů orgánové indexy ledvin, varlat, nadvarlat a prostaty v modelové skupině všechny snížily (P<0.05), indicating that hydrocortisone-induced The kidney-yang deficiency model in rats will cause changes in the indexes of the kidneys, testicles, epididymis and prostate, but has little effect on the seminal vesicles.
Celkově se ve srovnání s modelovou skupinou zlepšily orgánové indexy každé podávané skupiny, což naznačuje, že syrová Cistanche deserticola, víno Cistanche deserticola a Jingui Shenqi Pills by mohly zmírnit pokles indexu orgánů v modelu deficitu ledvin a yangu.
Z pohledu každého orgánu ve srovnání s modelovou skupinou může skupina vína Cistanche deserticola významně zvýšit orgánový index ledvin (P<0.05). Comparing different drug administration groups, the wine Cistanche deserticola group is better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). ; From the perspective of testicular index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the testis (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group has a significant advantage over the raw Cistanche deserticola group. (P < 0.05); from the perspective of epididymal index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the epididymis (P < 0.05); from the perspective of seminal vesicle index, compared with the model group , the wine Cistanche deserticola group can significantly improve the organ index of the seminal vesicles (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group is significantly better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05); from the perspective of the prostate, compared with the model group In comparison, the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group could significantly increase the prostate organ index (P<0.05).
3.2.7 Detekce ukazatelů renálních funkcí
BUN a CREA odrážejí funkci ledvin. CREA v séru je konečným produktem organické hmoty obsahující dusík a BUN v séru je hlavním konečným produktem metabolismu bílkovin. Oba jsou vylučovány hlavně glomerulární filtrací [10-11]. Při poškození funkce ledvin se snižuje funkce glomerulární filtrace a zvyšují se koncentrace obou. Hladiny BUN a CREA v krvi odrážejí stav funkce ledvin: čím vyšší jsou jejich hladiny, tím závažnější je poškození funkce ledvin. V tomto experimentu byly detekovány obsahy BUN a CREA v krysím séru, aby se vyhodnotily účinky každé podávané skupiny na renální funkci u krys s hydrokortisonem indukovaným nedostatkem jangu ledvin.
Jak je vidět z tabulky 9, ve srovnání s normální skupinou byly obsahy BUN a CREA v modelové skupině zvýšeny a byl zde významný rozdíl (P<0.05), indicating that hydrocortisone caused kidney damage to rats. Compared with the model group, the wine Cistanche deserticola and raw Cistanche deserticola groups can reduce the content of CREA (P<0.05), thereby alleviating kidney damage to a certain extent.

3.2.8 Detekce indikátoru pohlavního hormonu
Ledviny jsou základem vrozenosti a hrají důležitou roli v lidském růstu, vývoji a životních procesech. Tradiční čínská medicína věří, že ledviny řídí reprodukci a vztah mezi ledvinami a reprodukčním systémem je velmi úzký. Stále více vědců zjišťuje, že pacienti s nedostatkem jangu a ledvin mají významné změny v ose hypotalamus-hypofýza-gonáda, často doprovázené symptomy snížení pohlavních hormonů, jako jsou T a E2 [12]. V tomto experimentu byly měřeny obsahy T a E2 v séru, aby se stanovily účinky každé podávané skupiny na pohlavní hormony u potkanů s hydrokortisonem indukovaným nedostatkem jangu ledvin.
Jak je vidět z tabulky 10, ve srovnání s normální skupinou se obsah T a E2 v modelové skupině snížil (P<0.05), indicating that hydrocortisone can cause a decrease in rat sex hormone levels. Compared with the model group, each administration group was able to significantly increase the levels of T and E2 in serum (P<0.05) and improve the decrease in sex hormones induced by hydrocortisone. Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group was better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). Generally speaking, wine Cistanche deserticola has obvious performance in increasing T and E2 in the serum of rats with kidney yang deficiency, which is consistent with literature reports that phenylethanol glycosides, the main components of wine Cistanche deserticola, have hormone-like effects [13].
3.2.9 Detekce antioxidačního indexu
SOD je antioxidant, který odráží schopnost těla vychytávat volné radikály, zatímco MDA je konečným produktem reakce oxidativního stresu a může odrážet stupeň oxidačního poškození organismu. V tomto experimentu byly měřeny obsahy SOD a MDA ve varlatech, aby se stanovila antioxidační aktivita každé skupiny, které byla podávána, proti modelu deficitu jangu ledvin vyvolaného hydrokortisonem.
Jak je vidět z tabulky 11, ve srovnání s normální skupinou se obsah SOD v modelové skupině snížil (P<0.05). After 1 month of administration, compared with the model group, the SOD content in the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group increased. Compared with the normal group, the MDA content in the model group increased (P<0.05), indicating that the testicular tissue of rats with kidney-yang deficiency induced by hydrocortisone was oxidatively damaged. After being given Cistanche deserticola extract or Jingui Shenqi Pill positive medicine, each administration group was able to significantly reduce the content of MDA in testicular tissue and alleviate the oxidative damage caused by hydrocortisone. Taken together, both raw Cistanche deserticola and wine Cistanche deserticola can improve the body's ability to resist oxidative damage and alleviate oxidative damage caused by hydrocortisone.
(1) Seskupení: Krysy dostaly volný přístup k vodě a stravě. Po 1 týdnu adaptivního krmení byli náhodně rozděleni do 5 skupin (tabulka 2), v každé skupině bylo 10 potkanů, jmenovitě normální skupina, modelová skupina, syrová skupina Cistanche deserticola (PR), skupina Cistanche deserticola s dušeným vínem (PW) a pozitivní kontrolní skupina Jinkui Shenqi Pill (JK). (2) Modelování: S výjimkou normální skupiny byly všechny další čtyři skupiny injikovány injekcí hydrokortison sukcinátu sodného im, s dávkou 20 mg/kg, po dobu 14 po sobě jdoucích dnů. Normální skupině byla injikována stejná dávka normálního fyziologického roztoku. Obecný stav krys v každé skupině byl sledován, aby se zjistilo, zda vykazují příznaky, jako je strach z chladu, preference tepla, studené končetiny, čistá a dlouhá moč, stočená a klenutá záda, matná a rozcuchaná srst a duševní deprese. Současně byla měřena tělesná hmotnost, počet spontánních aktivit, příjem potravy, příjem vody, výdej moči a další ukazatele potkanů v každé skupině.






