Účinky odvaru Jianpi Bushen Yiqi na imunitní funkci a neuromuskulární spojení u myší EAMG

2.3 Histomorfologické srovnání brzlíku a lymfatických uzlin v každé skupině myší

Jak je uvedeno vObrázek 1, kůra brzlíku a dřeň vprázdná kontrolní skupinamyši byly jasně ohraničené, s uspořádaně uspořádanými buňkami. Na rozdíl od toho,modelová kontrolní skupinavykazovaly nejasné kortikálně-medulární hranice a řídkou distribuci buněk. Ve srovnání s modelovou skupinou byly myši vskupina prednisonuaskupiny odvarů Jianpi Bushen Yiqi s nízkou, střední a vysokou dávkouvykazovaly relativně jasné kortikálně-medulární hranice a husté, dobře organizované buňky.

Obrázek 2ukazuje, že buňky lymfatických uzlin ve slepé kontrolní skupině vykazovaly kompletní strukturu a řádné uspořádání. Primární lymfoidní folikuly byly viditelné v kortexu, bez sekundárních folikulů nebo zárodečných center. V modelové skupině byla buněčná struktura dezorganizovaná, s proliferovanými primárními folikuly a viditelnými sekundárními folikuly a germinálními centry. Skupiny prednisonu a Jianpi Bushen Yiqi vykazovaly sníženou hyperplazii lymfoidních folikulů.

Tabulka 3ukazuje, že ve srovnání s kontrolní skupinou na slepo měla modelová skupina snížený poměr plochy kůry k dřeni v brzlíku a zvýšená zárodečná centra v lymfatických uzlinách (P < 0,05 nebo P < 0,01). Ve srovnání s modelovou skupinou jeprednisonavysoké dávky Jianpi

 

 

 

Obrázek 1 Porovnání histopatologické morfologie tkáně brzlíku mezi různými skupinami myší (HE barvení)

 

Tabulka 3. Srovnání poměru kortikální a medulární oblasti thymu a počtu zárodečných center lymfatických uzlin v každé skupině myší

Jednotka: (x̄ ± s)

Skupina	n	Poměr plochy thymické kůry/dřeně	Číslo zárodečného centra (za LN)
Blank Control	3	3.62 ± 0.18	0.00 ± 0.00
Ovládání modelu	3	1.74 ± 0.11 ᵃ	6.47 ± 1.51 ᵃ
Prednison	3	4.62 ± 1.41 ᵇ ᶜ	3.52 ± 0.35 ᵇ ᶜ
Odvar nízká dávka	3	2.91 ± 0.42 ᶜ	5.77 ± 0.66 ᶜ
Odvar střední dávka	3	3.41 ± 1.05 ᶜ	4.12 ± 0.25 ᶜ
Odvar vysoká dávka	3	4.60 ± 0.55 ᵇ ᶜ	3.00 ± 0.71 ᶜ

Poznámky:

ᵃ: P < 0,01 vs. Blank Control

ᵇ: P < 0,05 vs. Model Control

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

Bushen Yiqiskupiny vykazovaly vyšší poměr kortexu k ploše dřeně. Všechny intervenční skupiny, včetně prednisonu a všech tří dávek odvaru, významně snížily počet germinálních center (P < 0,01). Ve srovnání se skupinou prednisonu odvarskupiny s nízkou a střední dávkoustále vykazoval o něco více zárodečných center, zatímcoskupina s vysokou dávkouneměl žádný významný rozdíl.

Poznámka: Černé šipky ukazují na lymfatické folikuly a červené šipky na zárodečná centra.

Obrázek 2 Srovnání histopatologické morfologie tkání lymfatických uzlin mezi různými skupinami myší (HE barvení)

 

 

 

 

2.4 Porovnání procenta Th1, Th2, Th17, Treg a Tfh buněk v suspenzích slezinných buněk

Jak je uvedeno vTabulka 4ve srovnání s prázdnou kontrolní skupinou,modelová skupinaukázaly zvýšené procento buněk Th1, Th2, Th17 a Tfh a snížené procento Treg (P < 0,05 nebo P < 0,01). Ve srovnání s modelovou skupinou,střední a vysoké dávky odvarových skupinměla snížená procenta Th1 a zvýšená procenta Treg; všechny tři odvarové skupiny vykazovaly snížená procenta Th17 a Tfh. Zejména,skupina prednisonusnížené procento Treg, což vyvolává obavy z jeho potenciálu narušit imunitní homeostázu.

Ve srovnání se skupinou s prednisonem všechny dekokční skupiny vykazovaly snížení Th2, Th17 a Tfh buněk. Theskupiny se střední a vysokou dávkoudále snížil Th1 a zvýšil Treg buňky (P < 0,05 nebo P < 0,01), což ukazuje na vyváženější imunoregulaci.

 

 

 

Poznámka: NMJ, neuromuskulární spojení; AChR, acetylcholinový receptor.

Obrázek 3 Porovnání morfologie AChR na neuromuskulárních spojeních svalových skupin mezi různými skupinami myší
(imunofluorescenční barvení, ×100)

 

Tabulka 4. Srovnání procenta buněk Th1, Th2, Th17, Treg a Tfh v suspenzích slezinných buněk mezi různými skupinami myší

Jednotka: (% , x̄ ± s)

Skupina	n	Th1	Th2	Th17	Treg	Tfh
Blank Control	6	0.05 ± 0.04	0.03 ± 0.02	0.11 ± 0.06	16.42 ± 2.59	9.45 ± 3.29
Ovládání modelu	7	3.43 ± 1.11 ᵃ	0.82 ± 0.22 ᵃ	1.64 ± 0.65 ᵇ	7.99 ± 3.26 ᵃ	18.27 ± 4.21 ᵃ
Prednison	7	1.84 ± 0.26	0.84 ± 0.47	1.03 ± 0.71	5.02 ± 1.58 ᵃ	15.32 ± 3.84
Odvar nízká dávka	7	1.42 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.60 ± 0.16 ᶜ ᶠ	0.73 ± 0.24 ᶜ ᶠ	14.97 ± 2.11 ᶠ	10.35 ± 3.72 ᶜ ᶠ
Odvar střední dávka	7	1.08 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.47 ± 0.14 ᶜ ᶠ	0.45 ± 0.20 ᶜ ᶠ	13.82 ± 2.21 ᶠ	9.87 ± 3.65 ᶜ ᶠ
Odvar vysoká dávka	7	1.23 ± 0.62 ᶜ ᵉ	0.32 ± 0.14 ᶠ	0.34 ± 0.22 ᶜ ᶠ	13.50 ± 2.47 ᶠ	7.97 ± 3.60 ᶜ ᶠ

Poznámky:

ᵃ: P < 0,01 vs. Blank Control

ᵇ: P < 0,05 vs. Blank Control

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,05 vs. Model Control

ᵉ: P < 0,05 vs. prednison

ᶠ: P < 0,01 vs. Prednison

 

 

2.5 Srovnání morfologie AChR na NMJ v každé svalové skupině

Obrázek 3ukazuje, že NMJ AChR ve slepé kontrolní skupině byly strukturálně intaktní a vypadaly jako kompaktní, preclíkovité útvary. V modelové skupině se NMJ v okulárním, sternocleidomastoideu, deltovém svalu a musculus tibialis anterior zdály fragmentované a deformované, zatímco žvýkací, mezižeberní a brániční svaly vykazovaly vážně narušené struktury. Všechny intervenční skupiny vykazovaly různé stupně zlepšení morfologie AChR.

Jak je uvedeno vTabulka 5ve srovnání se slepou kontrolní skupinou měla modelová skupina významně snížené poměry ploch AChR ve více svalech (P < 0,05 nebo P < 0,01). Ve srovnání s modelovou skupinou jeprednisonaodvar střední dávkyskupiny vykazovaly zvýšenou plochu AChR v očních svalech. Thenízkodávková odvarová skupinazlepšené oblasti AChR v deltu a tibialis anterior. Theskupina s vysokou dávkou improved AChR areas in the ocular, sternocleidomastoid, deltoid, and tibialis anterior muscles.

Ve srovnání s prednisonem jeskupina s nízkou dávkouimproved AChR areas in the ocular and masticatory muscles; askupina se střední dávkouv žvýkacím svalu; askupina s vysokou dávkouu sternocleidomastoideus a tibialis anterior (P < 0,05 nebo P < 0,01).

Tabulka 5. Srovnání plochy AChR na nervosvalovém spojení v každé skupině svalových skupin myší

Jednotka: (% , x̄ ± s)

Skupina	n	Oční sval	Žvýkací sval	Sternocleidomastoideus	Deltoidní sval	Mezižeberní sval	Membrána	Přední tibialis
Blank Control	3	3.83 ± 0.28	4.28 ± 0.29	4.48 ± 0.77	3.79 ± 0.12	3.78 ± 0.22	4.80 ± 0.26	3.60 ± 0.32
Ovládání modelu	3	2.58 ± 0.34 ᵃ	2.55 ± 0.45 ᵃ	2.15 ± 0.31 ᵇ	2.33 ± 0.15	2.55 ± 0.33	2.98 ± 0.34ᵇ	2.95 ± 0.49
Prednison	3	3.33 ± 0.49ᶜ	2.67 ± 0.55	3.83 ± 0.54	3.49 ± 0.38	3.60 ± 0.16	3.45 ± 0.67	3.02 ± 0.40
Odvar nízká dávka	3	2.76 ± 0.49ᵉ	3.05 ± 0.37ᵉ	3.77 ± 0.64	2.77 ± 0.44ᶜ	3.03 ± 0.25	3.33 ± 0.33	3.44 ± 0.71ᶜ
Odvar střední dávka	3	3.32 ± 0.40ᶜ	3.27 ± 0.75ᵉ	3.98 ± 0.43	3.27 ± 0.65	3.50 ± 0.28	3.85 ± 0.42	3.56 ± 0.52
Odvar vysoká dávka	3	3.46 ± 0.37ᶜ	3.34 ± 0.23ᵉ	4.54 ± 0.67ᶜ	3.69 ± 0.39	3.75 ± 0.36	3.75 ± 0.35	3.84 ± 0.52ᶜ

Poznámky:

ᵃ: P < 0,05 vs. Blank Control

ᵇ: P < 0,01 vs. Blank Control

ᶜ: P < 0,05 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵉ: P < 0,05 vs. prednison

 

Tabulka 6. Srovnání sérových hladin AChR-Ab, IL-6 a TNF- mezi různými skupinami myší

Jednotka: (x̄ ± s)

Skupina	n	AChR-Ab (P⁻¹)	IL-6 (pg·ml⁻¹)	TNF- (pg·ml⁻¹)
Blank Control	12	1.00 ± 0.13	110.66 ± 30.75	25.84 ± 9.71
Ovládání modelu	12	3.13 ± 0.97 ᵃ	327.91 ± 38.71 ᵃ	124.15 ± 37.61 ᵃ
Prednison	11	2.05 ± 0.29 ᵇ ᶜ	487.21 ± 124.09 ᵇ	78.76 ± 22.35 ᵇ ᶜ
Odvar nízká dávka	13	2.50 ± 0.49ᵉ	306.42 ± 93.91ᶜ	89.14 ± 25.90 ᶜ
Odvar střední dávka	13	1.98 ± 0.34 ᶜ	278.60 ± 63.97ᶜ	80.36 ± 21.95ᶜ
Odvar vysoká dávka	13	1.42 ± 0.33 ᶜ	224.43 ± 49.03ᶜ	84.26 ± 36.60ᶜ

Poznámky:

ᵃ: P < 0,01 vs. Blank Control

ᵇ: P < 0,01 vs. Model Control

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,05 vs. Prednison

ᵉ: P < 0,01 vs. Prednison

2.6 Porovnání sérových hladin AChR-Ab, IL-6 a TNF-

Tabulka 6ilustruje, že ve srovnání s prázdnou kontrolní skupinou,modelová skupinaměl významně zvýšené hladiny AChR-Ab, IL-6 a TNF- (P < 0,01). Ve srovnání s modelovou skupinou jeprednisonastřední a vysoké dávky odvarových skupinvýznamně redukoval AChR-Ab. Však,prednison zvýšen IL-6, zatímcoskupina s vysokou dávkou odvaru se snížila IL-6. Jak prednison, tak iskupiny se střední a vysokou dávkousnížený TNF- (P < 0,05 nebo P < 0,01).

Ve srovnání s prednisonem jenízkodávková odvarová skupinaměl vyšší hladinu AChR-Ab, alevšechny odvarové skupinysnížena IL-6, čímž se zabrání prozánětlivým účinkům prednisonu.

3. Diskuse

Klinicky se MG dělí na oční myasthenia gravis (oMG) a generalizovanou MG (gMG). oMG se primárně projevuje jako ptóza a diplopie a může přejít do gMG, charakterizované systémovou slabostí kosterního svalstva [1]. Teorie tradiční čínské medicíny (TCM) připisuje patogenezi MG dysfunkcím vslezina a ledviny. Slezina řídí svaly a končetiny, je postnatálním kořenem a zdrojem Qi a krve. Ledviny ukládají esenci a řídí kosti a dřeň. Deficit obou vede ke svalové slabosti, jak je vidět u MG [15–16].

Na základě principu TCM „léčba kořene“,tonizující slezinu a ledvinyse stává centrální. TheOdvar Jianpi Bushen Yiqitento přístup ztělesňuje. Jeho hlavní složkou,Astragalus membranaceus, zvyšuje Qi sleziny a zvedá Yang.Lepidlo na želví skořápkyalepidlo na jelení parohobohacuje ledvinovou esenci a jang, posiluje svaly a kosti.Codonopsis, Angelica sinensis, Bupleurum, Cimicifugaamedově smažená lékořicesynergicky působí na výživu krve, zvýšení Yang a harmonizaci receptury.

Klíčovým doplňkem této formulace jeCistanche deserticola, proslulá bylina protonizující jang ledvin a doplnění vitální esence. Bylo prokázáno, že Cistanche zvyšuje imunitní modulaci a zlepšuje odolnost proti únavě, takže je ideální pro stavy, jako je MG. Podle XJCistanche extrakt Cistanche podporujenervovou a svalovou vitalitu, propagujerovnováhu neurotransmiterůa zlepšujeimunitní homeostáza-mechanismy přímo související s patofyziologií MG.

Tato studie použila EAMG myší model k vyhodnocení účinků odvaru napříč behaviorálními, imunitními a strukturálními dimenzemi NMJ. Výsledky to ukázalyprednisonzlepšila síla úchopu a Lennonovy skóre, ale způsobily významnéhubnutív souladu se známými vedlejšími účinky glukokortikoidů [19]. Naproti tomu všechny odvarové dávkyzvýšená tělesná hmotnost, což naznačuje lepší bezpečnost.

Terapeutická účinnost bylazávislý na dávce, sskupina s vysokou dávkoudosažení srovnatelného zlepšení síly úchopu a Lennonova skóre s prednisonem, který nabízí obojíúčinnost a bezpečnost.

Indexy imunitních orgánů ukázaly, že prednison snižuje index thymu a způsobuje kortikálně-medulární atrofii, což zhoršuje centrální toleranci [20]. Odvar však zachoval nebo zlepšil strukturu brzlíku, zejména při vysokých dávkách. Slezinné indexy následovaly advoufázový regulační vzors nízkými a středními dávkami potlačujícími abnormální imunitní proliferaci, zatímco vysoké dávky udržovaly rovnováhu.

Všechny odvarové skupiny snižovaly hyperplazii folikulů lymfatických uzlin, i když pouze vysoká dávka odpovídala prednisonu v supresi zárodečných center, což naznačuje lepší regulaci centrální i periferní imunity vysokými dávkami.

Protože nerovnováha CD4⁺ T-buněk je základem EAMG [4], schopnost odvarurebalance Th1/Th2/Th17/Tfh a Tregbuňky je stěžejní. Na rozdíl od prednisonu, který snižoval Treg, odvar (zejména střední a vysoké dávky)vylepšený Trega potlačené prozánětlivé podskupiny. Tentoimunitní modulacemísto potlačování imunity lépe odpovídá potřebám autoimunitních onemocnění, jako je MG.

Pro integritu NMJ decoction decoctionoprava multisvalového AChR, překonávající prednison v několika svalových skupinách. Navíc účinně redukovalAChR-Ab, IL-6 a TNF-, přičemž vysoká dávka vykazuje nejkomplexnější protizánětlivý účinek – bez zvýšení IL-6 prednisonu.

 

Závěr

TheOdvar Jianpi Bushen Yiqi, obohacený oCistanche deserticola, uplatňuje vícecílové terapeutické účinky u EAMG myší. To:

Vyrovnává osu Th/Treg a potlačuje aktivaci B buněk zprostředkovanou Tfh

Snižuje patogenní protilátky a zánětlivé cytokiny

Opravuje struktury NMJ a obnovuje funkci svalů

Ve srovnání s prednisonem nabízí lepšíbezpečnost, obnovení imunityavícesvalové cílení, zdůrazňující její potenciál jako aklinická alternativanebodoplňková terapiepro MG.

Budoucí studie by ji měly prozkoumatbioaktivní sloučeniny, metabolické dráhyamolekulární cíle, možná přessíťová farmakologieaproteomika, aby se urychlil jeho vývoj jako nového terapeutika založeného na TCM.