Isoastilbin inhibuje neuronální apoptózu a oxidační stres u Aratova modelu ischemicko-reperfuzního poranění v mozku: Zapojení SIRT1/3/6

Pro více informací Emailtina.xiang@wecistanche.com

Abstraktní

Pozadí.Bylo prokázáno, že isoastilbin (IAB).antioxidačnía antiapoptotické funkce. Nedávná studie zjistila, že IAB může snížitoxidačnístres u Alzheimerovy choroby. Zda je však antioxidační funkce IAB protektivní i u jiných mozkových onemocnění, zůstává neznámé.
Cíle.Prozkoumat role a základní mechanismy IAB v reperfuzi uzávěru střední mozkové tepny (MCAO/R) u potkanů.
Materiály a metody.Samci potkanů ​​Wistar byli náhodně rozděleni do 5 skupin: falešná skupina, skupina MCAO/R a 3 skupiny MCAO/R, kterým byla podávána IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg nebo 80 mg/kg) jednou denně po dobu 3 dnů. Velikost infarktu, upravené skóre neurologické závažnosti (mNSS),oxidačnístresK testování funkce IAB byly použity markery neuronální apoptózy.
Výsledek.Ve srovnání se skupinou MCAO/R podávání IAB snížilo velikost infarktu a skóre mNSS u MCAO/R potkanů. Isoastilbin také snížil hladinu malondialdehydu (MDA) a zvýšil aktivitu katalázy (CAT), superoxiddismutázy (SOD) a glutathionperoxidázy (GSH-PX). Léčba isoastilbinem zeslabila neurony indukované MCAO/Rapoptózave srovnání se skupinou MCAO/R, jak ukazují výsledky testů X-dUTP nick-end zprostředkovaných terminální deoxynukleotid transferázou (TUNEL) a western blot. Isoastilbin také zvrátil MCAO/R-indukovanou downregulaci exprese proteinu SIRT1/3/6.
Závěry.Tato pozorování naznačují, že IAB chrání předoxidačnístres a neuronální apoptóza u krys po cerebrálním ischemicko-reperfuzním (I/R) poškození prostřednictvím upregulace SIRT1/3/6, což naznačuje, že IAB by mohla být slibným terapeutickým činidlem pro cerebrální I/R poškození.
klíčová slova:apoptóza, oxidační stres, isoastilbin, fokální cerebrální ischemicko-reperfuzní poškození

Pozadí

Ischemická a hemoragická cévní mozková příhoda patří mezi hlavní příčiny invalidity a smrti na celém světě.1,2Ischemická cévní mozková příhoda je způsobena překážkami v krevních cévách, čímž jsou cílové orgány vystaveny riziku buněčné smrti.3Ačkoli nejúčinnější léčbou mozkové ischemie je rychlé obnovit krevní zásobení, trombolytická terapie může zvětšit rozsah infarktu a zhoršit ischemicko-reperfuzní (I/R) poranění v mozku.1,4 Proto je naléhavá potřeba vyvinout nová léčiva pro léčbu mozkových I/R poranění.

Ischemicko-reperfuzní poškození v mozku zahrnuje komplexní patofyziologii, včetně výskytuoxidačnístres, apoptóza a deplece adenosintrifosfátu (ATP), z nichž všechny mohou vést k poškození neuronů.5 Reaktivní formy kyslíku (ROS) jsou produkovány během ischemie, což vede k neuronálníapoptózaa neurologická dysfunkce.6 Konkrétně NADPH oxidázy generují ROS během I/R poranění, což způsobujeoxidačnístres. Tento stres se vyznačuje zvýšenou peroxidací lipidů, sníženou aktivitou katalázy (CAT) a superoxiddismutázy (SOD) a sníženou hladinou glutathionu (GSH).7–11 Vysoké hladiny ROS aoxidačnístresbude následně spouštět buněčnou smrt mitochondriální apoptotickou cestou po cerebrálním I/R poškození.12 Přechodové póry mitochondriální permeability se mohou otevřít jako důsledek nadbytečné akumulace ROS, což má za následek nižší mitochondriální transmembránový potenciál a zvýšenou produkci aktivátorů kaspáz, např. jako cytochrom c, který nakonec iniciuje kaspázovou kaskádu a vede k buněčné smrti.12 Geng et al. navrhli, že apoptóza neuronových buněk je alespoň částečně zprostředkována mitochondriální apoptózou při cerebrálním I/R poškození.13 V důsledku toho jsou inhibice nebo reverze oxidačního stresu a neuronální apoptóza slibnými novými metodami pro zmírnění cerebrálního I/R poškození.

Abychom prozkoumali mechanismus, kterým IAB zmírňuje I/R-indukovaná poškození, zaměřili jsme se na signalizační kaskádu SIRT. Nedávné studie prokázaly ochrannou roli SIRT1/3/6 u různých onemocnění, včetně neurální degenerace v mozku, zánětu krevních cév a akumulace tuku v těle. Zjistili jsme, že léčba IAB zvyšuje hladinu exprese SIRT během I/R poranění, což naznačuje, že IAB může chránitapoptózaupregulací exprese SIRT. Celkově naše výsledky naznačují, že IAB je potenciálně užitečná léčba klinického I/R poranění mozku.

Cíle

Naším celkovým cílem bylo prozkoumat účinky a základní mechanismy IAB při poranění I/R pomocí zvířecího modelu MCAO/R.

Materiály a metody

Zvířata

Samci krys Wistar byli získáni od Shanghai Laboratory Animal Company (Shanghai, Čína). Krysy ve věku 60–90 dní s normální tělesnou hmotností (200–250 g) byly krmeny ad libitum potravou a vodou a udržovány v konzistentním prostředí (25 ± 2 stupně, relativní vlhkost 40 ± 10 procent a cyklus světlo/tma 12 hodin). . Se zvířaty bylo zacházeno podle pokynů pro péči a použití laboratorních zvířat Jiamusi College, Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Čína. Institucionální výbor pro péči o zvířata a jejich použití na Jiamusi College, Heilongjiang University of Chinese Medicine schválil postupy pro zvířata (č. schválení 20190815).

Zřízení poranění MCAO/R a léčba IAB

Toxicita IAB byla stanovena, jak bylo popsáno dříve.15 Isoastilbin (Chengdu Purechem-Standard Co., Ltd., Chengdu, Čína) byl zředěn na konečné koncentrace 20 mg/kg, 40 mg/kg a 80 mg/kg ve fosfátu. -pufrovaný roztok (PBS). Zvířata byla náhodně rozdělena do 5 skupin: 1. simulace; 2. MCAO/R; 3. MCAO/R následovaný 20 mg/kg IAB; 4. MCAO/R následovaný 40 mg/kg IAB; a 5. MCAO/R následovaný 80 mg/kg IAB.

Potkani byli anestetizováni intraperitoneální (ip.) injekcí 50 mg/kg pentobarbitalu sodného (Sinopharm Chemical Reagent, Beijing, Čína). Pro zavedení MCAO/R jsme exponovali krční tepny, jmenovitě zevní krkavice (ECA), pravou společnou krkavicí tepnu (CCA) a vnitřní krkavicí tepnu (ICA). ECA a CCA byly proximálně ligovány. ICA byla podvázána pomocí 0,285 mm monofilního stehu, vloženého do lumen ICA na asi 18 mm přes pahýl ECA, aby se ucpala střední cerebrální arterie (MCA). LaserDoppler (USCN KIT INC., Wuhan, Čína) byl použit k potvrzení, že průtok krve byl snížen na méně než 20 procent normální úrovně. Falešná skupina podstoupila stejnou operaci; tepny však nebyly podvázány. Po 2 hodinách okluze byly podvázané tepny reperfundovány a krysám byla poté podávána sondou IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg nebo 80 mg/kg) nebo PBS denně po 3 po sobě jdoucí dny. Nakonec, 72 hodin po MCAO/R, byla hodnocena neurologická kapacita krys.

Vyhodnocení objemu infarktu mozku potkana

Po léčbě IAB byly mozky rychle zváženy, aby se změřila jejich vlhká hmotnost. Následně byly mozky dehydratovány při 100 stupních po dobu 24 hodin, aby se vyhodnotila jejich suchá hmotnost. Koncentrace vody v mozku byla vypočtena jako: ((vlhká hmotnost ‒ suchá hmotnost)/vlhká hmotnost) × 100 procent.

Modifikované skóre neurologické závažnosti (mNSS)

Senzorické, motorické, rovnovážné a reflexní neurologické funkce byly hodnoceny 72 hodin po operaci MCAO pomocí mNSS.17 Závažnost neurologických deficitů byla hodnocena na stupnici od 0 do 10, přičemž vyšší skóre indikovalo závažnější poškození nervový systém.

Měření superoxiddismutázy (SOD), malondialdehydu (MDA), katalázy (CAT) a glutathionperoxidázy (GSH-PX)

Po ošetření IAB byl obsah proteinu stanoven z mozkových tkání. Koncentrace proteinu kortikálních homogenátů byla stanovena pomocí BCA souprav (Beyotime, Shanghai, Čína). SOD, MDA, CAT a GSH-PX byly detekovány pomocí odpovídajících souprav (katalogové č. A003-1, A001-3, A007 a A005; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Čína). Stručně, supernatant kortikálního homogenátu byl odebrán. Pro SOD byly vzorky inkubovány s pracovním roztokem WST-8/enzym při 37 stupních po dobu 30 minut. Absorpce byla měřena při vlnové délce 450 nm. Jedna SOD jednotka enzymatické aktivity (U) byla definována jako množství vzorku potřebné k dosažení 50procentní míry inhibice WST-8 formazanového barviva. Pro MDA byly vzorky smíchány s pracovním roztokem a poté zahřívány na 100 stupňů po dobu 15 minut. Absorpce supernatantu byla měřena při vlnové délce 532 nm. Pro CAT byly vzorky smíchány s detekčním pufrem CAT a roztokem peroxidu vodíku a poté inkubovány při 25 stupních po dobu 5 minut. Absorpce byla detekována při vlnové délce 520 nm. Pro GSH-PX byly vzorky smíchány s GSH při 37 stupních po dobu 5 minut. Absorpce supernatantu byla měřena při vlnové délce 412 nm. Jedna jednotka (U) enzymové aktivity byla definována jako množství GSH-PX v 1 mg proteinu, které katalyzovalo spotřebu 1 μmol/L GSH při odečtení vlivu neenzymové reakce.

Terminální deoxynukleotidyltransferáza dUTP značení konce nick (TUNEL).

Mozkové tkáně ipsilaterální hemisféry byly izolovány, fixovány ve 4% paraformaldehydu a zalité v parafínu. Tkáně byly poté nařezány na 5-μm řezy a vystaveny antigenu po 10 minutách mikrovlnného zahřívání v citrátovém pufru. Neuronální apoptóza byla hodnocena pomocí testu TUNEL (In situ Cell Death Detection Kit; Roche, Penzberg, Německo), podle pokynů výrobce. Stručně řečeno, řezy mozku byly umístěny do ledově studeného 4% paraformaldehydu na 30 minut a poté byly inkubovány ve tmě s reakční směsí TUNEL při 37 stupních po dobu 1 hodiny. Následně byla jádra obarvena 6-diamidino-2-fenylindolem (DAPI; Sigma-Aldrich). Vzorky byly zobrazeny a index apoptózy byl vypočten jako počet TUNEL-pozitivních buněk dělený celkovým počtem buněk.

Western blot

Mozkové tkáně potkana byly lyžovány pomocí pufru pro radioimunoprecipitační test (RIPA) (Beyotime, Dalian, Čína). Proteiny byly podrobeny elektroforéze na 12–15% dodecylsulfát-polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE) a poté přeneseny na membrány z polyvinylidenfluoridu (PVDF) (Millipore, Billerica, USA). Membrány byly blokovány pomocí 5% mléka bez tuku a inkubovány s primárními protilátkami při 4 stupních přes noc. Sekundární protilátky konjugované s křenovou peroxidázou (HRP) byly následně inkubovány při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Specifické signály značených proteinů byly detekovány pomocí chemiluminiscenčního systému. -Aktin byl použit k normalizaci hladin proteinové exprese Bcl-2, Bax a Sirtuin (SIRT1/3/6). Obrázky byly analyzovány pomocí softwaru ImageJ.

Statistické analýzy

Data jsou prezentována jako průměr ± standardní odchylka (SD) ze 3 nezávislých experimentů. Pomocí Shapiro–Wilkova testu bylo potvrzeno, že data z každé skupiny odpovídají normální distribuci. Rozdíly mezi skupinami byly analyzovány pomocí jednosměrné analýzy rozptylu (ANOVA), následované Tukeyho post hoc testem pomocí softwaru Prism v. 8 (GraphPad Software, San Diego, USA). Hodnota p< 0.05 indicated="" statistical="" significance.="" a post="" hoc="" power="" analysis="" was="" performed="" using="" g*power="" 3.1.9.7="" software="" (heinrich="" heine="" university,="" düsseldorf,="">

Výsledek

Isoastilbin chrání neurony před poškozením vyvolaným MCAO/R

Abychom prozkoumali, zda IAB chráněné neurony vystavené cerebrálnímu I/R, byly analyzovány koncentrace vody v mozku a objem infarktu. U kontrolních zvířat nedošlo k infarktu a koncentrace vody byla relativně nízká (obr. 1B, C; falešná skupina). Po operaci MCAO/R jsme pozorovali významné zvýšení velikosti infarktu a koncentrace vody (obr. 1B, C). Infarkt a ischemický edém ukazují, že náš přístup úspěšně vytvořil I/R model u potkanů. Je zajímavé, že když jsme aplikovali různé koncentrace IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg a 80 mg/kg) bezprostředně po poranění, pozorovali jsme na dávce závislé zotavení infarktu a ischemického cerebrálního edému (obr. 1B,C). Tento výsledek naznačuje, že IAB chrání před poškozením mozku vyvolaným ischemií. Dále jsme zkoumali buňkuapoptózapomocí testu mNSS. Jak je ukázáno na obr. ID, falešně operovaní krysy nevykazovaly žádné zjevné neurologické deficity, zatímco MCAO/R krysy vykazovaly významně zvýšené skóre mNSS. V souladu s morfologickými změnami ukázanými na obr. 1B a obr. 1C léčba IAB významně snížila skóre mNSS u MCAO/R potkanů ​​(obr. 1D). Celkově vzato tyto výsledky poskytují důkaz, že IAB má neuroprotektivní funkci ve Vivo modelu cerebrálního I/R poranění hlodavců. Vzhledem k tomu, že vyšší koncentrace IAB měla lepší ochranné účinky bez zjevných vedlejších účinků, použili jsme pro následující experimenty 80 mg/kg.

Isoastilbin zmírňuje oxidační stres u MCAO/R potkanů

Posoudit vliv IAB naoxidační stresbyly po léčbě IAB hodnoceny hladiny GHS-PX, MDA, SOD a CAT. V důsledku zvýšeného oxidačního stresu měly krysy vystavené MCAO/R vyšší hladiny MDA ve srovnání s falešnými krysami. Tento účinek byl oslaben léčbou IAB (obr. 2A). Kromě toho se hladiny CAT, SOD a GHS-PX u MCAO/R krys snížily ve srovnání s falešnými krysami (obr. 2B, D). Léčba pomocí IAB zvýšila hladiny CAT, SOD a GHS-PX u MCAO/R potkanů ​​(obr. 2B, D), což naznačuje, že IAB chránila proti cerebrálnímu I/R poškození zmírněním oxidačního stresu.

Isoastilbin inhibuje neuronální apoptózu u MCAO/R potkanů

Dále jsme použili test TUNEL k posouzení neuronůapoptózapo I/R poranění mozku. Jak je znázorněno na obr. 3A, u potkanů ​​MCAO/R byl zvýšený počet buněk pozitivních na TUNEL, který byl snížen léčbou IAB (obr. 3A). Abychom prozkoumali základní mechanismy ochrany IAB, zkoumali jsme expresi apoptózových proteinů Bax a Bcl-2 pomocí western blotu. U potkanů ​​podrobených MCAO/R byla exprese Bax (proapoptotický marker) upregulována, zatímco exprese Bcl-2 (antiapoptotický marker) byla downregulována, ve srovnání s falešnou skupinou (obr. 3B, C ). Léčba IAB však zabránila změnám vyvolaným MCAO/R (obr. 3B, C). Tyto výsledky naznačují, že IAB inhibovala neuronální apoptózu u MCAO/R potkanů.

Isoastilbin upreguluje expresi SIRT

Dále jsme se snažili prozkoumat, jak IAB chrání neurony předoxidační stres. Bylo zjištěno, že SIRT, NAD plus-dependentní deacetyláza lokalizovaná hlavně v mitochondriích, souvisí s přežitím buněk a apoptózou, buněčným metabolismem a reakcí na stres. SIRT může aktivovat mitochondriální signály a dráhy k podpoře proliferace mitochondrií a tvorby ATP. Podílí se také na zánětu, a to tak, že snížení SIRT vede ke zvýšení chronických zánětlivých faktorů, jako je aktivita NFκB a RelA/p65.18–20 Je zajímavé, že několik studií zjistilo, že SIRT má nervový ochranný účinek a zeslabuje oxidační stres v patofyziologii cerebrálního poranění I/R.21 Zde jsme zkoumali mozkovou expresi SIRT1/3/6 u potkanů ​​podrobených MCAO/R. Zjistili jsme, že poškození MCAO/R snížilo hladiny proteinu SIRT1/3/6, zatímco léčba IAB tyto účinky zmírnila (obr. 4A–D). Tato data naznačují, že IAB může být protektivní u MCAO/R potkanů ​​upregulací exprese SIRT1/3/6 při ochraně proti oxidativnímu stresu.

Diskuse

Koncentrace ROS stoupá k vrcholu, který může potenciálně vyvolat apoptózu nebo nekrózu buněk.25–28 Existuje několik dobře zavedených markerů oxidačního stresu. Například MDA, cytotoxická sloučenina produkovaná peroxidací lipidů,29 je zvýšena v potkaních kardiomyocytech po poškození I/R.30 Antioxidační enzymy SOD, CAT a GHS-PX hrají důležitou roli při odstraňování superoxidů a prevenci oxidačního poškození.31, 32 Navíc změny v aktivitě těchto enzymů souvisejí také s oxidačním stresem. Zmírnění oxidačního stresu je potenciální způsob ochrany tkání před poškozením I/R.

Nedávná studie ukázala, že neuroprotektivní účinek IAB může být způsoben modulací oxidačního stresu. Konkrétně studie zjistila, že IAB inhibovala tvorbu ROS a indukovala SOD a GSH-PX ke zmírnění oxidačního poškození u myšího modelu AD.15 Nicméně, zda a jak IAB chrání před poškozením I/R v mozku, není dosud známo. V této studii jsme prokázali, že IAB úspěšně zmírňuje cerebrální I/R poranění snížením objemu infarktu a neurologických deficitů po poranění MCAO/R. Abychom otestovali, zda jsou účinky IAB způsobeny útlumem druhů ROS, měřili jsme několik markerů oxidačního stresu. Bylo zjištěno, že léčba isoastilbinem po MCAO/R snižuje hladiny MDA, ale zvyšuje aktivitu CAT, SOD a GSH-PX. Tyto výsledky naznačují, že základním mechanismem neuroprotekce zprostředkované IAB proti poškození I/R je snížení oxidačního stresu.

Mozkové I/R jsou skutečně schopny vyvolat apoptózu neuronů.33,34 K aktivaci proapoptotických proteinů (Bax a Bak) a paralelní inaktivaci antiapoptotických proteinů (jako je Bcl-2) došlo během mozkové činnosti. I/R zranění. Bcl-2 i Bax se nacházejí ve vnější části mitochondriální membrány a účastní se modulace buněčné apoptózy.35–37 Předchozí studie ukázaly, že nadměrná exprese Bcl{8}} blokuje neuronální smrt in vitro a in vivo. 38Erfani et al. zjistili, že poměr Bax/Bcl-2 byl zvýšen během cerebrálního I/R poškození, což přispělo k neuronální apoptóze.39 Navíc byla v mozcích myší vystavených MCAO/R zjištěna zvýšená regulace Bax a snížená regulace Bcl{12}}. 40 Navíc bylo zjištěno, že IAB moduluje hladiny proteinové exprese Bcl-2 i Bax, aby zlepšil redox systém u myší s AD, což ukazuje na antiapoptotickou roli IAB v tomto stavu.15 V současnosti studie, ukázali jsme, že podávání IAB snížilo I/R-indukovanou neuronální apoptózu in vivo snížením regulace Bax a zvýšením regulace Bcl-2. Tato zjištění naznačují, že neuroprotektivní schopnost IAB je závislá na její antiapoptotické aktivitě u krys. I/R však může také vést k nekróze, která není zprostředkována oxidačním stresem.25–28 Je velmi zajímavé prozkoumat, zda IAB může také fungovat inhibicí nekrózy za účelem zmírnění I/R poranění.

Abychom prozkoumali mechanismus, kterým IAB zmírňuje oxidační stres, zaměřili jsme se na proteiny SIRT. Předchozí zpráva zjistila, že nadměrná exprese SIRT3 inhibovala mitochondriální štěpení, aby chránila před mozkovým I/R poškozením. Kromě toho může SIRT6 chránit mozek před poškozením I/R potlačením oxidačního stresu.2 Zde jsme zjistili, že SIRT1/3/ 6 byla významně snížena u MCAO/R potkanů, zatímco podávání IAB zvýšilo expresi SIRTl/3/6. Pokud je nám známo, tato studie je první, která prokázala, že IAB může zvýšit expresi proteinu SIRT1/3/6 za účelem zmírnění oxidačního stresu a neuronální apoptózy indukované cerebrálním I/R poškozením.

Omezení

Existuje mnoho různých ochranných cest proti oxidativnímu stresu. Zde jsme ukázali, že signalizační mechanismus ochrany IAB je prostřednictvím SIRT 1/3/6. Měly by však být dále objasněny další mechanismy proti oxidativnímu stresu nebo cerebrálnímu I/R poškození. Během I/R poranění se účastní jak apoptóza, tak nekróza; my jsme se však zaměřili pouze na apoptózu. K úplnému vysvětlení ochranné funkce IAB během I/R poranění bude tedy nezbytný další výzkum role IAB při nekróze.

Závěry

Zde jsme prokázali, že IAB může zmírnit oxidační stres a apoptózu neuronů u potkanů ​​vystavených cerebrálním I/R. Navíc antioxidační stres a antiapoptotické funkce IAB mohou vznikat prostřednictvím regulace exprese SIRT1/3/6. Celkově vzato, naše data naznačují, že IAB je kandidátem na léčbu poranění mozku I/R.

ORCID iDs Lifeng An  https://orcid.org/0000-0002-4835-1817 Dandan Zhu  https://orcid.org/0000-0001-9119-9956 Xin Zhang  https://orcid.org/0000-0002-9496-1691 Jingwen Huang  https://orcid.org/0000-0001-6449-5362 Guangbao Lu https://orcid.org/0000-0002-2465-8996

Lifeng An1,B,D, Dandan Zhu2,B, Xin Zhang2,C, Jingwen Huang1,C, Guangbao Lu1,A,F

1 Jiamusi College, Univerzita čínské medicíny Heilongjiang, Čína

2 Graduate School, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Jiamusi, Čína

A – koncepce a design výzkumu; B – sběr a/nebo shromažďování dat; C – analýza a interpretace dat;

D – psaní článku; E – kritická revize článku; F – konečné schválení článku

Reference

1. Rossi DJ, Brady JD, Mohr C. Metabolismus a signalizace astrocytů při ischemii mozku. Nat Neurosci. 2007;10(11):1377–1386. doi:10.1038/ nn2004
2. Ribeiro PW, Cola PC, Gatto AR a kol. Vztah mezi dysfagií, skóre stupnice mrtvice National Institutes Of Health a prediktory pneumonie po ischemické mrtvici. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2015; 24(9):2088–2094. doi:10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2015.05.009
3. Hu X, De Silva TM, Chen J, Faraci FM. Cévní onemocnění mozku a neurovaskulární poškození při ischemické cévní mozkové příhodě. Circ Res. 2017;120(3):449–471. doi:10.1161/circresaha.116.308427
4. Tabassum R, Vaibhav K, Shrivastava P, et al. Perillylalkohol zlepšuje funkční a histologické výsledky proti ischemicko-reperfuznímu poškození zmírněním oxidačního stresu a represí COX-2, NOS-2 a NF-κB u potkanů ​​s uzávěrem střední mozkové tepny. Eur J Pharmacol. 2015;747:190–199. doi:10.1016/j.ejphar.2014.09.015
5. Woodruff TM, Thundyil J, Tang SC, Sobey CG, Taylor SM, Arumugam TV. Patofyziologie, léčba a zvířecí a buněčné modely lidské ischemické cévní mozkové příhody. Mol Neurodegener. 2011;6(1):11. doi:10.1186/1750- 1326-6-11
6. Gonzalez-Rodriguez PJ, Xiong F, Li Y, Zhou J, Zhang L. Fetální hypoxie zvyšuje vulnerabilitu hypoxicko-ischemického poškození mozku u novorozených potkanů: Role glukokortikoidních receptorů. Neurobiol Dis. 2014;65:172–179. doi:10.1016/j.nbd.2014.01.020
7. Rodrigo R., Fernández-Gajardo R., Gutiérrez R. a kol. Oxidační stres a patofyziologie ischemické cévní mozkové příhody: Nové terapeutické možnosti. CNS Neurol Disord Drug Targets.2013;12(5):698–714. doi:10.2174/ 1871527311312050015
8. Zhang C, Ling CL, Pang L a kol. Přímé podávání makromolekulárního léčiva do oblasti mozkové ischemie pomocí nanočástic zprostředkovaných neutrofily. Teranostika. 2017;7(13):3260–3275. doi:10.7150/thno.19979
9. Kahles T, Luedike P, Endres M, et al. NADPH oxidáza hraje ústřední roli při poškození hematoencefalické bariéry při experimentální mrtvici. Mrtvice. 2007;38(11):3000–3006. doi:10.1161/strokeaha.107.489765
10. Chen H, Song YS, Chan PH. Inhibice NADPH oxidázy je po ischemicko-reperfuzi neuroprotektivní. J Cereb Blood Flow Metab. 2009; 29(7):1262–1272. doi:10.1038/jcbfm.2009.47
11. Kapoor M, Sharma N, Sandhir R, Nehru B. Účinek inhibitoru NADPH oxidázy apocyninu na ischemicko-reperfuzní poškození hippocampu v mozku potkana. Biomed Pharmacother. 2018;97:458–472. doi:10.1016/j. biopha.2017.10.123
12. Yu S, Wang C, Cheng Q, a kol. Aktivní složka polypeptidů Achyranthes bidentata poskytuje neuroprotekci prostřednictvím inhibice mitochondriálně závislé apoptotické dráhy v kultivovaných neuronech a ve zvířecích modelech mozkové ischemie. PLoS One. 2014; 9(10):e109923. doi:10.1371/journal.pone.0109923
13. Geng HX, Li RP, Li YG a kol. 14,15-EET potlačuje neuronální apoptózu při ischemické reperfuzi prostřednictvím mitochondriální dráhy. Neurochem Res.2017;42(10):2841–2849. doi:10.1007/s11064-017-2297-6
14. Du Q, Li L, Jerz G. Purifikace astilbinu a isoastilbinu v extraktu z oddenku smilax glabra vysokorychlostní protiproudovou chromatografií. J Chromatogr A. 2005;1077(1):98–101. doi:10.1016/j.chroma. 2005.04.072
15. Yu H, Yuan B, Chu Q, Wang C, Bi H. Ochranné role isoastilbinu proti Alzheimerově chorobě prostřednictvím Nrf2-zprostředkované antioxidace a antiapoptózy. Int J Mol Med.2019;43(3):1406–1416. doi: 10,3892/ijmm. 2019,4058
16. Zhou X, Xu Q, Li JX, Chen T. Strukturální revize dvou flavanonolových glykosidů ze Smilax glabra. Planta Med. 2009;75(6):654–655. doi: 10. 1055/s-0029-1185360
17. Morimoto J, Yasuhara T, Kameda M, et al. Elektrická stimulace zvyšuje migrační schopnost transplantovaných stromálních buněk kostní dřeně v modelu ischemické mrtvice hlodavců. Cell Physiol Biochem. 2018; 46(1):57–68. doi:10.1159/000488409
18. Torrens-Mas M, Pons DG, Sastre-Serra J, Oliver J, Roca P. Umlčení SIRT3 senzibilizuje buňky rakoviny prsu k cytotoxické léčbě prostřednictvím zvýšení produkce ROS. J Cell Biochem. 2017;118(2):397–406. doi:10.1002/jcb.25653
19. Nassir F, Arndt JJ, Johnson SA, Ibdah JA. Regulace mitochondriálního trifunkčního proteinu moduluje nealkoholické ztučnění jater u myší. J Lipid Res. 2018;59(6):967–973. doi:10.1194/jlr.M080952
20. Torrens-Mas M, Hernández-López R, Oliver J, Roca P, Sastre-Serra J. Umlčení sirtuinu 3 zlepšuje účinnost oxaliplatiny prostřednictvím acetylace MnSOD u rakoviny tlustého střeva. J Cell Physiol. 2018;233(8):6067–6076. doi:10.1002/jcp.26443
21. Hernández-Jiménez M, Hurtado O, Cuartero MI, et al. Tichý informační regulátor 1 chrání mozek před cerebrálním ischemickým poškozením. Mrtvice. 2013;44(8):2333–2337. doi:10.1161/strokeaha.113.001715
22. Chen GY, Nuñez G. Sterilní zánět: snímání a reakce na poškození. Nat Rev Immunol. 2010;10(12):826–837. doi:10.1038/nri2873
23. Eltzschig HK, Eckle T. Ischémie a reperfuze: Od mechanismu k translaci. Nat Med. 2011;17(11):1391–1401. doi:10,1038/nm.2507
24. Dziedzic T. Systémový zánět jako terapeutický cíl u akutní ischemické cévní mozkové příhody. Expert Rev Neurother.2015;15(5):523–531. doi:10.1586/ 14737175.2015.1035712
25. Yemisci M, Gursoy-Ozdemir Y, Vural A, Can A, Topalkara K, Dalkara T. Kontrakce pericytu vyvolaná oxidačně-nitračním stresem narušuje kapilární přetočení navzdory úspěšnému otevření ucpané mozkové tepny. Nat Med. 2009;15(9):1031–1037. doi:10.1038/nm.2022
26. Chen H, Yoshioka H, ​​Kim GS, a kol. Oxidační stres při ischemickém poškození mozku: Mechanismy buněčné smrti a potenciální molekulární cíle pro neuroprotekci. Antioxidační redoxní signál. 2011;14(8):1505–1517. doi:10.1089/ars.2010.3576
27. Olmez I, Ozyurt H. Reaktivní formy kyslíku a ischemická cerebrovaskulární choroba. Neurochem Int. 2012;60(2):208–212. doi:10.1016/j. neuint.2011.11.009
28. Guo J, Cheng C, Chen CS, a kol. Nadměrná exprese Fibulinu-5 zmírňuje ischemické/reperfuzní poškození po okluzi střední cerebrální tepny u potkanů. Mol Neurobiol. 2016;53(5):3154–3167. doi:10.1007/s12035- 015-9222-2
29. Qiang M, Xu Y, Lu Y a kol. Autofluorescence MDA-modifikovaných proteinů jako in vitro a in vivo sonda v analýze oxidačního stresu. Proteinová buňka. 2014;5(6):484–487. doi:10.1007/s13238-014-0052-1
30. Hou S, Zhao MM, Shen PP, a kol. Neuroprotektivní účinek kyselin salvianových proti mozkové ischemii/reperfuznímu poškození. Int J Mol Sci. 2016;17(7). doi:10.3390/ijms17071190
31. Adibhatla RM, Hatcher JF. Oxidace a peroxidace lipidů ve zdraví a nemoci CNS: Od molekulárních mechanismů k terapeutickým příležitostem. Antioxidační redoxní signál. 2010;12(1):125–169. doi:10.1089/ ars.2009.2668
32. Staroń A, Mąkosa G, Koter-Michalak M. Oxidační stres v erytrocytech u pacientů s revmatoidní artritidou. Rheumatol Int. 2012; 32(2):331–334. doi:10.1007/s00296-010-1611-2
33. Aşcı S, Demirci S, Aşcı H, Doğuç DK, Onaran İ. Neuroprotektivní účinky pregabalinu na cerebrální ischemii a reperfuzi. Balkan Med J. 2016;33(2):221–227. doi:10.5152/balkanmedj.2015.15742
34. Tao T, Li CL, Yang WC, a kol. Ochranné účinky propofolu proti celé mozkové ischemii/reperfuznímu poškození u potkanů ​​prostřednictvím inhibice dráhy faktoru indukujícího apoptózu. Brain Res.2016;1644: 9–14. doi:10.1016/j.brainres.2016.05.006
35. Martinou JC, Youle RJ. Mitochondrie v apoptóze: členové rodiny Bcl{1}} a mitochondriální dynamika. Dev Cell. 2011;21(1):92–101. doi:10.1016/j.devcel.2011.06.017
36. Borner C, Andrews DW. Apoptotický pór na mitochondriích: Prorazili jsme nebo jsme stále uvízli? Cell Death Differ. 2014;21(2):187–191. doi:10.1038/cdd.2013.169
37. Siddiqui WA, Ahad A, Ahsan H. Záhada rodiny BCL2: Bcl-2 proteiny a apoptóza. Aktualizace. Arch Toxicol. 2015;89(3):289–317. doi:10.1007/s{10}}
38. Maes ME, Schlamp CL, Nickells RW. BAX k základům: Jak genová rodina BCL2 řídí smrt gangliových buněk sítnice. Prog Retin Eye Res. 2017;57:1–25. doi:10.1016/j.preteyeres.2017.01.002
39. Erfani S, Khaksari M, Oryan S, Shamsaei N, Aboutaleb N, Nikbakht F. Nampt/PBEF/visfatin má neuroprotektivní účinky proti ischemickému/reperfuznímu poškození prostřednictvím modulace poměru Bax/Bcl-2 a prevence kaspázy{ {2}} aktivace. J Mol Neurosci. 2015;56(1):237–243. doi:10.1007/s{10}}

40. Chen L, Cao J, Cao D, et al. Ochranný účinek dexmedetomidinu

proti diabetické hyperglykémii exacerbované cerebrální ischemii/reperfuznímu poškození: Studie in vivo a in vitro, Life Sdi, 2019:235:116553.doi; 10.1016/ilfs.2019116553

41. Zhao H, Luo Y, Chen L a kol. Sirt3 inhibuje cerebrální ischemicko-reperfuzní poškození prostřednictvím normalizace Wnt/-kateninové dráhy a blokováním mitochondriálního štěpení. Chaperones buněčného stresu. 2018;23(5):1079–1092. doi:10.1007/s{11}}r

42. Zhang W, Wei R, Zhang L, Tan Y, Qian C. Sirtuin 6 chrání mozek před cerebrální ischemií/reperfuzním poškozením prostřednictvím aktivace NRF2. Neurověda.2017;366:95–104. doi:10.1016/j.neuroscience.2017.09.035