Iridoidní a acyklické monoterpenové glykosidy, kankanosidy L, M, N, O a P z Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WSVĚTLO(Orobanchaceae) je vytrvalá parazitická rostlina rostoucí na kořenechSalvadoraneboCalotropisdruh, rozšířený v severní Africe, Arábii a asijských zemích.1) Stonky této rostliny (japonsky Kanka-nikujuyou) se tradičně používají proléčba impotence, sterility, lumbago a tělesné slabostia také jako prostředek podporující krevní oběh.1,2) Během našich studií o bioaktivních složkách ze stonkůC. tubulosa, 3-6) dříve jsme uvedli dvacet čtyři fenylethanoidových aminoglykosidů včetně kankanosidů H1, H2, I, J1, J2, K1a K2a dva acylované oligocukry z čerstvých stonkůC. tubulosa. 5,6) Navíc ředitelfenylethanoidové glykosidy, echinakosid, akteosid a isoakteosidbylo zjištěno, že inhibují zvýšení hladin sérové ​​aspartátaminotransferázy (AST) a alaninaminotransferázy (sůl) v poraněných játrech myší vyvolanéD- galaktosamin (D-GalN)/ lipopolysacharid v dávkách 25-100 mg/kgper os(p.o.). Byly také objasněny strukturální požadavky fenylethanoidových glykosidů na hepatoprotektivní aktivitu.5) V této pokračující studii o složkách v čerstvých stoncíchC. tubulosadále jsme izolovali jedenáct iridoidních glykosidů včetně kankanosidů L (1), M (2) a N (3), sedm acyklických monoterpenových glykosidů včetně kankanosidů O (4) a P (5), tři fenylpropanoidy a čtyři lignany. Tento článek se zabývá izolací a objasněním struktury pěti nových sloučenin (1-5).

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PRO ZLEPŠENÍ SEXUÁLNÍ DYSFUNKCE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Čerstvé stonky C. tubulosa (kultivované v Urumqi, provincie Xinjiang, Čína) byly extrahovány methanolem pod zpětným chladičem za získání methanolového extraktu (8,36 % z čerstvých stonků). Z methanolického extraktu byly frakce eluované H2O a MeOH (5,63 % a 2,73 %, v tomto pořadí) získány sloupcovou chromatografií Diaion HP-20 (H2O→MeOH), jak bylo popsáno dříve.5) Frakce eluovaná MeOH byla podrobeny SiO2 a ODS kolonové chromatografii a nakonec HPLC, aby byly získány kankanosidy L (1, 0.0026 %), M (2, 0.{{27 }}001 %), N (3, 0.00{{60}}7 %), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) a P (5, 0 .0002 %), 6-deoxycatalpol3,7) (6, 0,197 %), bartsioside3,7) (7, { {147}}.0583 %), glurosid3,7) (8, 0,0443 %), kankanoiside A3) (9, 22,3 mg, 0,0010 %), kyselina mussaenosidová3,7) ( 10, 0,0056 %), 8- kyselina epiloganová3,8) (11, 0,0023 %), 8-kyselina epideoxyloganová3,7) (12, 0,0004 %), kyselina geniposidová3,7) (13, 0,0040 % ), kankanosid E3) (14, 0,0026 %), (2E,6Z)-8-bD-glukopyranosyloxy-2,6-dimethyl-2,6-oktadienová kyselina3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 %), (2E,6E)-3,7-dimethyl-8-hydroxyoktadién-1-yl-ObD-glukopyranosid10) (16, 0,0082 %), 8-hydroxygeraniol 8-O-bD-glukopyranosid11) (17, 0,0044 %), betulalbusid A12) (18, 0,0004 %), koniferin13) (19, 0,0002 %), syring 20, 0,0015 %), sinapový aldehyd 4-ObD-glukopyranosid14) (21, 0,0001 %), ( )-pinoresinol ObD-glukopyranosid4,8,15) (22, 0,0010 %), eucommin A16) (23,000,26) %), isoeucommin A17) (24, 0,0010 %) a ( )-syringaresinol ObD-glukopyranosid4,8,18) (25, 0,0044 %).

Struktury kankanosidů L (1), M (2) a N (3)

Kankanosid L (1) byl získán jako bílý prášek s negativní optickou rotací ([a]D 26 - 45,7 v MeOH). Jeho IR spektrum ukázalo silný absorpční pás při 3433 a 1{{20}}}80 cm- 1, což naznačuje glykosidovou skupinu. Bombardování rychlými atomy (FAB)-MS 1 běhu v pozitivním a negativním iontovém módu ukázalo kvazimolekulární iontové píky při m/z 371 [M Na] a 347 [M-H]-, v daném pořadí a molekulární vzorec byl stanoveno jako C15H24O9 měřením FABMS s vysokým rozlišením. Kyselá hydrolýza 1 s 1,0 M kyselinou chlorovodíkovou (HCl) uvolnila D-glukózu, která byla identifikována HPLC analýzou s použitím optického rotačního detektoru.3-6) 'H- a 13C-NMR spektra 1 (CD3OD, tabulky 1, 2), které byly přiřazeny různými NMR experimenty,19) vykazovaly signály přiřaditelné čtyřem methylenům [d 1,43 (1H, br dd, J= cca 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= cca 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= cca 8. , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=

ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H každý, oba d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], dva methiny [d 2,15 (1H, dd, J=7,2, 8,9 Hz, 9-H) a 2,23 (1H, m, 5-H)] a acetalová skupina [d 4,81 (1H, d, J{{28 }},9 Hz, 1-H)] spolu s b-glukopyranosylovou skupinou [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Jak je znázorněno na obr. 1, experiment 1H–1H korelační spektroskopie (1H–1H COSY) na obr. 1 ukázal přítomnost dílčích struktur napsaných tučně. V experimentu s korelací heteronukleárních vícenásobných vazeb (HMBC) na 1 byly pozorovány korelace na dlouhé vzdálenosti mezi následujícími protony a uhlíky (1-H a 3-C, 8-C; {{ 49}}H a 1-C; 7-H a 8-C, 9-C; }}H2 a 7-C, 8-C; 1 -H a 1-C), jak je znázorněno na obr. 1. Dále byla relativní stereostruktura 1 charakterizována fázově citlivou nukleární Overhauserův experiment zesílení spektroskopie (fázově citlivá NOESY), který ukázal korelace NOE mezi následujícími protonovými páry (1-H a 3aH; 3a-H a 4a-H; 3b-H a 4b-H; 4b-H a 5-H, 5-H a 6b-H, 9-H a 7-H; a 10-H2), jak je znázorněno na obr. 1. 'H- a 13C-NMR spektra 1 byla superponovatelná se spektry hlavní iridoidní složky 6-deoxykatalpolu (6), s výjimkou signálů způsobených na nasycenou d-laktolovou skupinu. Nakonec hydrogenace 6 poskytla 1, takže stereostruktura kankanosidu L byla objasněna jako 3,4- dihydro-6-deoxykatalpol (1).

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PRO ZLEPŠENÍ PORUCHY VZBUZENÍ POŠTY PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanosid M (2) byl získán jako bílý prášek s negativní optickou rotací ([a]D 26 - 18,7 v MeOH). IR spektrum 2 ukázalo absorpční pásy při 3433, 1736, 1655 a 1076 cm- 1, které lze připsat hydroxylovým, d-laktonovým, olefinovým a etherovým skupinám. FAB-MS spektrum kladných iontů 2 ukázalo kvazimolekulární iontový pík při m/z 353 [M Na] a molekulární vzorec byl stanoven jako C15H22O8 měřením kladných iontů FAB-MS s vysokým rozlišením. Kyselá hydrolýza 2 s 1,0 M HCl uvolnila D-glukózu. 'H- a 13CNMR spektra 2 (CD3OD, tabulky 1, 2) ukázala signály přiřaditelné čtyřem methylenům [d 1,66, 2,11 (1H každý, oba m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H každý, oba m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2,8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (po 1H, oba d, J{{61 }},1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J= 3,1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], dva methiny [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], olefin [d 5,94 (1H, m, 7-H)] a nasycená laktonová skupina (d C 174,9) spolu s bD-glukopyranosylovou skupinou [d 4,32 (1H, d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Jak je znázorněno na obr. 1, experiment 1 H–1 H COZY na obrázku 2 ukázal přítomnost dílčích struktur napsaných tučně a v experimentu HMBC byly pozorovány korelace na dlouhé vzdálenosti mezi následujícími protonovými a uhlíkovými páry ({{ 103}}H a 1-C; 7-C;9-C; }}H2 a 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H a 10-C); Relativní stereostruktura 2 byla charakterizována fázově citlivým NOESY experimentem, který ukázal NOE korelace mezi následujícími protonovými páry (3a-H a 4a-H; 3b-H a 4b-H; 4b-H a 5- H;

Kankanosid N (3) byl izolován jako bílý prášek s negativní optickou rotací ([a]D 25 - 24,6 v MeOH). V FAB-MS s kladným iontem 3 byl pozorován kvazimolekulární iontový pík při m/z 371 [M Na]. Molekulární vzorec C16H28O8 byl stanoven měřením FAB-MS s vysokým rozlišením. Kyselá hydrolýza 3 s 1,{14}} M HCl uvolňující D-glukózu. 'H- a 13C-NMR data (CD3OD, tabulky 1, 2) ukázala signály přiřaditelné k methylu [d 1.07 (3H, d, J= 7,2 Hz, {{ 28}}H3)], čtyři methyleny {d 1,37, 1,87 (každý 1H, oba m, 7-H2), 1,65, 1,81 (každý 1H, oba m, 6-H2), [3,65 ( 1H, dd, J= 9,1, 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J= 5,9, 9,8 Hz), 11-H2] a [3,70 (1H, dd, J= 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, čtyři methiny [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)] a poloacetalová skupina [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] spolu s bD-glukopyranosylovou skupinou [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Hz, {{101 }}H)]. Iridoidní struktura 3 byla objasněna experimenty 1 H–1 H COSY a HMBC a relativní stereostruktura byla charakterizována fázově citlivým NOESY experimentem, jak je znázorněno na obr. 1. Následně byla objasněna sterostruktura 3, jak je znázorněno.

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PRO ŘEŠENÍ SEXUÁLNÍHO PROBLÉMU PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Struktury kankanosidů O (4) a P (5)

Kankanosidy O (4) a P (5), C16H26O8, byly také získány jako bílé prášky s negativní optickou rotací (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7 oba v MeOH). IR spektra 4 a 5 ukázala absorpční pásy při 3433, 1696, 1647 a 1076 cm- 1 pro 4 a 3434, 1701, 1647 a 1{ {95}}76 cm- 1 pro 5, které lze připsat glykosidickým, karboxylovým a olefinovým funkcím. Jejich UV spektra vykazovala společné absorpční maximum při 217 nm, což ukazuje na přítomnost skupiny a,b-nenasycené karboxylové kyseliny v obou z nich. Kyselá hydrolýza 4 a 5 uvolnila D-glukózu, zatímco enzymatickou hydrolýzou s glukosidázou poskytly 4 a 5 (2E,6E)-8-hydroxy-2,6-dimethyl{{37} },6-kyselina oktadienová20) (4a) a (2E,6E)-8-hydroxy-3,7-dimethyl-2,{{ 47}}kyselina oktadienová21) (5a). 'H- a 13C-NMR data 4 (CD3OD, tabulky 2, 3) ukázala signály přiřaditelné dvěma methylům [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}},0 Hz, 9-H3)], tři methyleny {d 2,19 (2H, br t, J= cca 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1H, dd, J= 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J= 6,2, 12,0 Hz), { {96}}H2]} a dva trisubstituované olefiny [d 5,41 (1H, ddd, J= 1,2, 6,2, 7,6 Hz, 7-H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}},2, 1,0 Hz, 3-H)] spolu s b-Dglukopyranosylovou částí [d 4,34 (d, J= 7,8 Hz, 1 -H)]. Porovnáním uhlíkových signálů v 13C-NMR spektru 4

s těmi z 4a byl pozorován glykosylační posun v poloze 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Poloha glukosidové vazby byla také potvrzena experimenty HMBC, jak je znázorněno na obr. 2. Následně byla stereostruktura 4 vyjasněna na (2E,6E)-8-bD-glukopyranosyloxy-2,{{ 16}}dimethyl-2,6-oktadienová kyselina. Na druhé straně 1H- a 13C-NMR data 5 (CD3OD, tabulky 2, 3) indikovala přítomnost (2E,6E)-8-hydroxy{{30}} ,7-dimethyl-2,6-skupina kyseliny oktadienové [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (každý 1H, oba br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7,1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] spolu s bD-glukopyranosylovou částí [d 4,23 (d, J= 7,7 Hz, 1 -H)]. Konektivita bD-glukopyranosylové skupiny v 5 byla objasněna na základě experimentů HMBC, jak je ukázáno na obr. 2. Dále byl pozorován typický glykosylační posun pro signály v poloze 8- (d C 5: 75,6; 5a: 68,8). na základě výše uvedených důkazů byla stereostruktura 5 určena jako (2E,6E)-8-bD-glukopyranosyloxy7-,{101}}dimethyl{102}},{103 }}kyselina oktadienová.

Účinky složek na cytotoxicitu indukovanou faktorem nekrózy nádorů-a (TNF-a) v buňkách L929

Je známo, že TNF-a zprostředkovává různá poškození orgánů prostřednictvím indukce buněčné apoptózy. V případě jater se biologické účinky TNF-a podílejí na poškození jater vyvolaném jaterními toxiny, ischemií/reperfuzí, virovou hepatitidou a alkoholem.22-24) Proto je TNF-a považován za důležitý cíl pro objevování protizánětlivých a hepatoprotektivních látek. Na základě výše uvedeného konceptu jsme zkoumali ochranné složky z přirozeně se vyskytujících produktů na TNF-a-indukovanou buněčnou smrt v L929 buňkách, TNF-a-senzitivní buněčné linii.25) Již dříve jsme uvedli

že u několika složek z Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) a Sapindus rarak, 36-38) byly zjištěny inhibiční účinky TNF-a-indukované cytotoxicity v L929 buňkách. Vzhledem k tomu, že fenylethanoidové složky C. tubulosa (napřechinakosid, akteosid a isoakteosidatd.) 5) také inhiboval tuto cytotoxicitu, dále jsme zkoumali složky iridoidu, fenylpropanoidu a lignanu, jak je uvedeno v tabulce 4. Výsledkem bylo, že kankanosid A (9, inhibice: 16,3±2.0% při 1 00 mM), kyselina mussaenosidová (10, 44,7 ± 8,7 %), 8-kyselina epigamová (11, 10,7 ± 0,4 %), 8-hydroxy geraniol 8-ObD- glukopyranosid (17, 21,3 ± 2,4 %) a ( )-pinoresinol ObD-glukopyranosid (22, 22,3 ± 1,6 %) vykazují významnou aktivitu. Přestože jejich aktivity byly slabší než u echinakosidu (IC50= 31.1 mM), akteosidu (17,8 mM) a isoaceteosidu (22,7 mM), hlavních fenylethanoidních složek.5)

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PRO ZLEPŠENÍ SEXUÁLNÍ FUNKCE PHGS75% ECH 30% ACT 12%