Intervenční výzkum fenylethylalkoholových glykosidů v Cistanche na zvířecím modelu perimenopauzálního syndromu Ⅱ

Experiment 1 Příprava fenylethanoidového glykosidu Cistanche 1 Zdroj léčivých materiálů

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, číslo šarže: 20130501.

2 činidla

95% ethanol (lékařská kvalita); AB-8 makroporézní adsorpční pryskyřice, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, číslo šarže: 20130618.

Referenční látka echinakosidu, poskytnutá Čínským institutem pro kontrolu farmaceutických a biologických produktů, číslo šarže: 111670-200503.3

JAK DLOUHO TRVÁ, NEŽ CISTANCHE PŮSOBÍ?

Způsob přípravy

Byl učiněn odkaz na metodu z literatury [19] a byla provedena pod vedením profesora Feng Suxianga z oddělení analýzy léčiv Henan College of Traditional Chinese Medicine.Grind Cistanchedo hrubého prášku, přidejte 10násobek množství 70% ethanolu k varu pod zpětným chladičem a dvakrát extrahujte, pokaždé 1,5 hodiny, spojte dva alkoholové extrakty, koncentrujte za sníženého tlaku, dokud není cítit alkohol, a dispergujte s destilovanou vodou (koncentrace je 0,5 g léčivého materiálu/ml) jako roztokem vzorku. Projděte přes AB-8 pryskyřici (sloupec lék:pryskyřice je 1:10), vložte vzorek do proudu a nechte jej stát 5 hodin, dokud se plně neadsorbuje. Nejprve promyjte 10násobným objemem kolony destilovanou vodou, vodu zlikvidujte a poté použijte 10násobek objemu kolony. K odstranění nečistot použijte 10% ethanol a nakonec eluujte 7násobkem objemu kolony 60% ethanolu. Eluát se shromáždí a odpaří se do sucha, čímž se získá prášek. 4 Volba vlnové délky měření

Přesně odměřte {{0}},5 ml referenčního roztoku, přidejte 1 ml 5% roztoku dusitanu sodného, ​​dobře protřepejte a nechte 6 minut stát; přidejte 1 ml 10% roztoku dusičnanu hlinitého, dobře protřepejte a nechte stát 6 minut; přidejte 10% roztok hydroxidu sodného 10 ml, zřeďte na 25 ml vodou, dobře protřepejte a nechte 18 minut stát, aby sloužil jako referenční roztok. 0,5 mlCystanche fenylethanolglykosidRoztok byl připraven stejným způsobem jako testovací roztok. Použijte paralelní vzorek bez přidání referenční látky a testujte roztok jako slepý vzorek a stejným způsobem připravte slepý roztok. Na UV spektrofotometru proveďte sken v plné vlnové délce výše uvedených tří roztoků v rozsahu vlnových délek 200-800 nm. Jak referenční látka, tak testovaný roztok mají maximální absorpční píky při 507 nm, takže jako vlnová délka absorpce je stanoveno 507 nm.

Po vyvinutí barvy vzorku fenylethanolglykosidu Cistanche + vytvoření barvy referenční látky Echinacea tangerine (překrývající se srovnání), viz obrázek 1.

Obrázek 1 Po vyvinutí barvy vzorku fenylethanoidového glykosidu Cistanche + po vytvoření barvy referenční látky mandarinka Echinacea Obrázek 5 Metoda detekce obsahu

Přesně odměřte 1 ml testovaného roztoku, přidejte 1 ml 5% roztoku dusitanu sodného, ​​dobře protřepejte a nechte 6 minut stát; přidejte 1 ml 10% roztoku dusičnanu hlinitého, dobře protřepejte a nechte stát 6 minut; přidat 10% hydroxid sodný Roztok je 10 ml, zředit na 25 ml vodou, dobře protřepat a nechat stát 18 minut. Použijte paralelní vzorek bez přidání roztoku vzorku jako slepý vzorek a připravte slepý roztok stejným způsobem. Měřeno pomocí UV spektrofotometru při 507 nm. 6 Metodický přehled

6.1 Příprava referenčního roztoku a roztoku vzorku

Příprava referenčního roztoku: Přesně odvažte 3.{4}}6 mg echinakosidového referenčního standardu, který byl vysušen do konstantní hmotnosti, vložte jej do 25ml odměrné baňky, přidejte 70% roztok k rozpuštění a nařeďte po značku, dobře protřepejte a dejte stranou. Standardní koncentrace je 0,1224 mg/ml.

Příprava roztoku vzorku: Navažte přesně 5 mgCystanche fenylethanoidový glykosid výpisdo odměrné baňky o objemu 10 ml, rozpustit v 70% ethanolu a zředit na objem.

6.2 Příprava standardní křivky

Přesně nakreslete {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5,0 , 6,0 ml porovnávacího roztoku, vyviňte barvu a zřeďte na objem podle metody v 4.2 a změřte hodnotu absorbance při 507 nm. Při použití koncentrace versus absorbance k vytvoření regresní křivky je regresní rovnice: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994) a lineární rozsah je 4.{{{101} 23}},4 ug/ml.

6.3 Zkouška přesnosti

Vezměte roztok vzorku a změřte jej šestkrát paralelně podle položky "Metoda stanovení obsahu". Vypočítejte relativní směrodatnou odchylku absorbance. Absorbance jsou {{0}},299, 0,299, 0,298, 0,297, 0,297, resp. 0,297. Průměrná absorbance=0,298, RSD=0,330 % (n =6).

6.4 Zkouška stability

Odeberte přiměřené množství roztoku vzorku a podle položky "Metoda stanovení obsahu" změřte hodnoty absorbance při {{0}}, 15, 30, 50 a 60 minut poté, co je roztok zcela vybarven, a vypočítejte relativní směrodatnou odchylku. Absorbance jsou 0,304, 0,303, 0,300, respektive 0,296. , 0,295, 0,295, průměrná absorbance=0,299, RSD=1,362 % (n=5).

6.5 Zkouška opakovatelnosti

Odeberte vzorek, připravte 6 roztoků vzorků podle položky „Příprava roztoku vzorku“ a změřte hodnotu absorbance podle položky „Metoda stanovení obsahu“ a vypočítejte obsah. Obsahy jsou 65,2 %, 65,6 %, 66,7 %, 67,2 % a 66,5 %. , 65,8 %, průměrný obsah 66,2 %, RSD=1,142 % (n=6).

6.6 Test obnovy vzorku

Přesně odeberte 0,5 ml roztoku vzorku se známým obsahem, celkem 9 dílů, a přidejte 200, 250 a 300 ul standardního roztoku. Změřte a vypočítejte rychlost výtěžnosti a relativní směrodatnou odchylku fenylethanolového glykosidu Cistanche. Míra výtěžnosti je 101,45 % a 99,26 %. , 98,94 %, 101,83 %, 99,05 %, 99,47 %, 98,72 %, 99,17 %, 100,64 %, průměrná míra obnovení je 99,84 %, RSD=1,164 % (n=9).

7 Stanovení obsahu vzorku

Tabulka 1 Výsledky stanovení obsahu fenylethanoidových glykosidů v Cistanche