Zkoumání účinků fenylethanoidových glykosidů Cistanche na nealkoholické ztučnění jater na základě farmakologie sítě a buněčných experimentů

 

Abstraktní

Objektivní: Zkoumat zlepšující účinky fenylethanoidových glykosidů Cistanche na nealkoholické ztučnění jater (NAFLD).

Metody: Síťová farmakologie byla použita k predikci potenciálních mechanismů fenylethanoidových glykosidů Cistanche proti NAFLD. In vitro model NAFLD byl vytvořen indukcí buněk HepG2 volnými mastnými kyselinami (FFA). Životaschopnost buněk byla hodnocena pomocí testu CCK-8; K pozorování akumulace lipidů bylo použito barvení Oil Red O; hladiny triglyceridů (TG) a celkového cholesterolu (TC) byly měřeny pomocí testovacích souprav; K hodnocení potenciálu mitochondriální membrány bylo použito barvení JC-1; intracelulární hladiny ROS byly hodnoceny fluorescenční sondou DCFH-DA; apoptóza byla detekována pomocí barvení Hoechst 33342; a exprese proteinů TNF-, PI3K, Akt a Bax byla měřena pomocí Western blotu.

Výsledky: Bylo identifikováno deset aktivních sloučenin a 77 potenciálních cílů souvisejících s účinky proti NAFLD, s hlavními cíli včetně TNF, NFKB1 a TLR4. Sloučeniny vykazovaly dobrou vazebnou afinitu k cílům, zejména TNF. Ve srovnání s modelovou skupinou fenylethanoidové glykosidy Cistanche významně snížily akumulaci lipidů indukovanou FFA v buňkách HepG2 (P < 0,01), snížily intracelulární hladiny TG, TC a ROS (P < 0,01), obnovily potenciál mitochondriální membrány, zmírnily poškození mitochondrií, snížily expresi apoptózy (snížily TP50.0, snížení proteinu). Exprese proteinu PI3K a Akt (P < 0,05, P < 0,01).

Závěr: Cystanche fenylethanoidové glykosidy vykazují anti-NAFLD účinky zlepšením akumulace lipidů vyvolané FFA, mitochondriální dysfunkce, oxidačního stresu a apoptózy v buňkách HepG2. Tyto účinky mohou být spojeny se signální dráhou TNF/PI3K/Akt.

Klíčová slova: Cystanche fenylethanoidové glykosidy; nealkoholické ztučnění jater (NAFLD); metabolismus lipidů; oxidační stres;apoptóza; TNF/PI3K/Akt signalizační dráha; síťová farmakologie; buněčný experiment

 

Cystanche fenylethanoidové glykosidy

 

 

 

Prodám extrakt z cistanche s vysokým obsahem

Kontaktujte nás koupit nyní

 

 

1. Úvod

Nealkoholické ztučnění jater (NAFLD) je chronické onemocnění jater charakterizované steatózou jater bez nadměrné konzumace alkoholu. Prevalence v Číně dosáhla 32,9 %. Jeho patogeneze zahrnuje více mechanismů, včetně inzulínové rezistence, oxidačního stresu a nerovnováhy střevní mikroflóry. Klinické příznaky zahrnují únavu, nepohodlí v oblasti jater a bolest břicha a v těžkých případech může přejít do nealkoholické steatohepatitidy (NASH).

V současné době jsou primární léčbou NAFLD intervence v oblasti životního stylu. Ačkoli FDA schválila první lék pro NAFLD, Resmetirom (Rezdiffra), v roce 2024, má potenciální nepříznivé účinky, jako je poškození jater a kardiovaskulární rizika. Proto existuje naléhavá potřeba najít bezpečnou a účinnou léčbu NAFLD.

Tradiční čínská medicína (TCM) se svými vlastnostmi více složek, více cílů a více cest dobře zapadá do komplexní patogeneze NAFLD a nabízí jedinečné výhody při její léčbě.

Cistanche pouštníaCistanche tubulosajsou léčivé rostliny z čeledi Orobanchaceae, uvedené vShennong Bencao Jing. Jejich masité stonky bohaté na šupiny se tradičně používají k tonizaci jater a ledvin, doplnění esence a krve a zvlhčení střev. Primární aktivní složky – fenylethanoidové glykosidy – mají protizánětlivé, lipidové a hepatoprotektivní vlastnosti. Systematické studie o jejich účincích proti NAFLD však stále chybí.

Tato studie si klade za cíl analyzovat farmakologický základ a potenciální mechanismy fenylethanoidových glykosidů Cistanche při léčbě NAFLD pomocí síťové farmakologie a dále prozkoumat jejich mechanismy prostřednictvím buněčných experimentů, které poskytují teoretický základ pro vývoj nových léků.

 

2. Materiály

2.1 Nástroje síťové farmakologie

TCMSP: https://tcmspw.com/tcmsp.php

CNKI: https://www.cnki.net/

PubMed: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/

PubChem: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/

SwissTargetPrediction: http://www.swisstargetprediction.ch/

NetInfer: http://lmmd.ecust.edu.cn/netinfer/

SuperPred: https://prediction.charite.de/subpages/target_prediction.php

GeneCards: https://www.genecards.org/

DisGeNET: http://www.disgenet.org/

STRING: https://string-db.org/

Bioinformatika: https://www.bioinformatics.com.cn/

UniProt: https://www.uniprot.org/

RCSB PDB: https://www.rcsb.org/

Cytoscape 3.9.1: https://cytoscape.org/

R 4.3.3: https://www.r-project.org/

AutoDock Vina 1.5.7: https://vina.scripps.edu/

2.2 Buněčná linie

HepG2 buňky lidské rakoviny jater, zakoupené od Wuhan Procell Life Science & Technology Co., Ltd.

2.3 Reagencie a léky

Fenylethanoidové glykosidy Cistanche (číslo šarže . 201610, čistota větší nebo rovna 80 %, obsahující 44,5 % echinakosidu a 16,1 % verbascosidu), zakoupené od Hotan Dechen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. Zásobní roztok připravený při 6,40 mg/ml při –20 stupních, filtrován a skladován.

Mezi další činidla patří:

Fetální bovinní sérum (FBS), médium DMEM, penicilin-streptomycin, barvicí souprava Oil Red O, souprava BCA, detekční souprava ROS, Hoechst 33342, BSA-V, oleát sodný, palmitát sodný, soupravy pro stanovení TG a TC, CCK-8 test, JC-1 p8, mitochondriální TPINF-potenciál, souprava membránového potenciálu Ak3, kit Bax, -aktin a sekundární HRP-konjugované protilátky.

2.4 Nástroje

CO₂ inkubátor (Forma 371)

Skříň biologické bezpečnosti (HERASAFE KS18)

Čtečka mikrodestiček (Multikan GO)

Invertovaný mikroskop (Nikon TS2-S-SM)

Vodní lázeň, centrifuga (H1750R), analytická váha, chemiluminiscenční zobrazovací systém (Azure 600), fluorescenční mikroskop (Leica DMi8)