Účinky Cistanche na funkci proti stárnutí a imunitní funkci stárnoucích modelových potkanů před a po zpracování
Mar 08, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Abstraktní: Cíl: Prozkoumat různé zpracované produktyCistanchesherba in D - galaktózová funkce proti stárnutí u potkanů a účinky funkce imunitních orgánů. Metody: Extrahovali jsme různé zpracované produkty Cistanches herba. SD potkani byli náhodně rozděleni do slepé kontrolní skupiny, stárnoucí modelové skupiny, skupiny vitaminu E, skupiny s vysokou, střední a nízkou dávkou cistanche, skupiny s vysokou, střední a nízkou dávkou cistanche. S D-galaktózovým modelem stárnutí potkana byl vytvořen, po léčbě jsme detekovali obsah MDA, SOD a NO v séru každé skupiny potkanů a spočítali index sleziny a index brzlíku; a poté sledovali patologické morfologické změny tkání sleziny a mtDNA v mozku. Výsledky: MDA a NO v séru stárnoucích modelových potkanů se významně zvýšily (P<0. 01)="" and="" sod="" decreased="" significantly="" (fvo.="" 01).="" the="" model="" group="" had="" a="" tendency="" to="" decrease,="" thymus="" and="" spleen="" coefficient="" had="" obvious="" pathological="" spleen="" injury,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" was="" missing.="" different="" processed="" products="" of="">Cistanchesherba může významně snížit MDA a NO(P<0. 01="" or="" p=""><0. 05).="" sod="" had="" a="" rising="" trend,="" improving="" the="" spleen="" in dex="" and="" thymus="" index,="" improving="" the="" pathological="" injury="" of="" the="" spleen.="" the="" mtdna="" in="" the="" brain="" of="" the="" high="" dose="" group="" and="" positive="" medicine="" group="" did="" not="" miss.="" and="" processing="" products="" were="" better="" than="" the="" raw="" cistanches="" herba.="" the="" high="" dose="" group="" was="" better="" than="" the="" low="" dose="" group.="" conclusion:="" different="" processing="" products="" of="" cistanches="" herbs="" have="" different="" anti-aging="" effects="" and="" immune="">
Klíčová slova: Cistanches herba; zpracovává se; stárnutí; imunní
Tradiční čínská medicínaCistanche deserticolaYC Ma neboCistanche deserticolaYC Ma nebo C. tubulosa (Schenk) Wight je suchý, šupinatý masitý stonekCistanche deserticola(Schenk) Wight. Je teplé povahy, sladké a slané chuti a je v meridiánu ledvin a tlustého střeva. Je nezbytný pro posílení ledvin a posílení jangu Medicína se nazývá „pouštní ženšen“ (2). Cistanche byl poprvé publikován v „Shen Nong's Materia Medica“. Je uveden jako nejvyšší stupeň. Má účinky vyplňující esenci a vyživuje dřeň, vyživuje ledviny a posiluje jang, příjemnou barvu a prodlužuje život, vyživuje krev a zvlhčuje suchost atd. Dokáže léčit ženskou neplodnost, mužskou impotenci, suchou zácpu, studený pas a kolena . Nemoci jako bolest, zachycení, krevní kolaps atd.! 3_5]o Vydání „Lékopisu Čínské lidové republiky“ z roku 2010 obsahujeCistanche tubulosaaCistanche E.
Jak tělo stárne, dojde k určité degradaci jak fyziologických funkcí, tak morfologické struktury. Tomu často říkáme „stárnutí“. Jejími projevy jsou především zhoršování orgánů, tkání a buněk, jako je snížení elasticity tkání, atrofie orgánů a snížení počtu buněk, což způsobí postupný útlum mnoha funkcí organismu. Experimenty to potvrdilyCistanchemá účinky proti stárnutí "I", ale srovnávací studie o účincích proti stárnutíCistanchepřed a po zpracování nebyly dosud hlášeny. Tento experiment studuje předevšímúčinky proti stárnutízCistanchepřed a po zpracování a poskytuje vědecký základ pro studium mechanismu stárnutí.
Echinakosid
1 Experimentální materiál
1.1 Pokusná zvířata
SD potkani o hmotnosti 180-220 g. SPF poskytla společnost Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., číslo licence: SCXK (Liao) 2015-0001.
1.2 Léky a činidla
Cistanchebyl zakoupen z popela z divokého masa Alashan ve Vnitřním Mongolsku a byl identifikován jako suchý masitý stonek se šupinovými listyCistanche deserticolaYC Ma profesorem Zhai Yanjunem z naší nemocnice; způsob přípravy každé skupiny testovaných látek je následující, surová cistanche: surová cistanche se vaří v páře 2 hodiny, nakrájí se na plátky o tloušťce 6 mm a suší se při 70 P. Vezměte plátky Cistanche a extrahujte 3x ve vodě, poté odvar spojte a zakoncentrujte na určitou koncentraci. Příprava cistanche: surovou cistanche vezměte a namočte na 8 hodin do žlutého vína, přidejte 1:1, 16 hodin napařte, nakrájejte na 6 mm silné plátky a sušte při 70 T. vezměte plátky cistanche a 3x extrahujte vodou, pak odvar spojte a zakoncentrujte na určitou koncentraci. Vitamin E měkké tobolky (číslo šarže 1407061, Shenyang Hongqi Pharmaceutical Co., Ltd.); D-galaktóza (číslo šarže 710B055, Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.); souprava pro oxid dusnatý (NO) (číslo šarže: BPE30262); Malondialdehyd (číslo šarže: BPE30262) MDA) kit (číslo šarže BPE30527); souprava superoxiddismutázy (SOD) (číslo šarže: BPE3O387); vše poskytuje Shanghai Langdon Biotechnology Co., Ltd.; souprava pro extrakci zvířecí mitochondriální DNA sloupcového typu (zakoupená od Beijing Lab Technology Co., Ltd.); PCR kit (zakoupen od TIANGEN Reagent Company); ostatní činidla jsou domácí čistá.
1.3 Experimentální zařízení
Gene cycler (Hangzhou Longkey Scientific Instrument Co., Ltd.); Čtečka mikrodestiček (Thermo Fisher Technology Co., Ltd., USA); Komora s konstantní teplotou a vlhkostí (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); Typ TGL-16C informuje stolní centrifugu Machine (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Vortex Mixer (Shanghai Qingpu Huxi Instrument Factory); Elektronické váhy (Shanghai Yousheng Weighing Apparatus Co., Ltd.); Vortex Mixer (Shanghai Qingpu Huxi Instrument Factory).
2 Experimentální metoda
2.1 Zvířecí model a seskupení
Po 1 týdnu adaptivního krmení byly krysy náhodně rozděleny do slepé skupiny, modelové skupiny, kontrolní skupiny,Cistancheskupina s vysokou, střední a nízkou dávkou a B. striata: skupiny s vysokou, střední a nízkou dávkou, z nichž každá byla 9 skupin po 8 kusech. Kromě slepé skupiny byla ostatním skupinám ráno subkutánně injikována D-galaktóza 167,5 mg/kg; slepé skupině byl injikován stejný objem normálního fyziologického roztoku; odpoledne byly podány vysoké, střední a nízké dávky popela z masa a vína 5,48 a 2. 74, 1,37 g/kg roztoku testovaného produktu, pozitivní kontrolní skupině bylo podáno 2,75 mg/ml vitaminu E, slepé skupině a modelové skupině byl intragastrickým podáním podán stejný objem normálního fyziologického roztoku. Po dobu 6 po sobě jdoucích týdnů byli nakonec usmrceni a byly měřeny různé ukazatele.
2.2 Stanovení obsahu SOD, MDA a NO v krysím séru
Krev byla odebrána z břišní aorty krysy, centrifugována při 3000 ot./min po dobu 15 minut, aby se oddělilo krevní sérum, a uložena při -20 Y pro pozdější použití. Stanovení obsahu MDA.SOD.NO se provádí v souladu s pokyny testovací soupravy.
2.3 Vliv na hmotnost imunitních orgánů u stárnoucích modelových krys
Krysy v každé skupině byly zváženy a po odebrání krve usmrceny. Slezina a brzlík byly odebrány, promyty fyziologickým roztokem, vysušeny a zváženy a byly vypočteny koeficienty sleziny a brzlíku.
2.4 Pozorování morfologie tkáně sleziny
Zvážené sleziny byly fixovány 4% paraformaldehydem, zality v parafínu, nařezány a obarveny HE. Změny v patologických řezech sleziny v každé skupině byly pozorovány pod mikroskopem.
2.5 Statistické metody
Použijte software SPSS k provedení jednosměrné analýzy rozptylu a LSD-t-testu pro párové srovnání.
2.6 Detekce mutací mtDNA v mozku
Mozková tkáň potkana byla umístěna do hmoždíře s kapalným dusíkem, rychle rozemleta na prášek a poté odkázána na metodu z literatury podle instrukcí soupravy pro extrakci mtDNA mozkové tkáně.
PCR amplifikace detekuje deleci fragmentu mtDNA4834: primery odkazují na kompletní sekvenci genomu krysí mtDNA popsané Gada-leta et al. (1898) a primery jsou syntetizovány společností Shanghai Shengang Industrial Co., Ltd. Pl: 5'-GCGAAGCTTAGAGCGTTAAC-3'P2: 5'AGTGAGATAAGGAAGCCTGC -3' P3: 5'-AG-GACTTAACCAGACCCAAAGACG{ {13}}, P4: 5'-CCTCTTTTCTGATAGGCGGG-3,
PCR reakční systém: DNA templát 1 |xL, 2 x Taq PCR MasterMix 25 |xL, ddH2O 20 jiL, každý 2 primery. Podmínky amplifikace: první 95Y denaturace po dobu 5 minut; 95 T denaturace 30 s, 56 T žíhání 30 s, 72 T extenze 45 s, celkem 35 cyklů; posledních 72 T prodloužení na 7 minut. Amplifikované produkty byly podrobeny elektroforéze na 1,5% agarózovém gelu.
Akteosid
3 Výsledky a analýza
3.1 ÚčinekCistanchena fyzické známky stárnutí krys
Ve srovnání s prázdnou skupinou vykazovali stárnoucí krysy tmavou a žlutou srst, volnou a matnou kůži, volnou kůži, ztrátu srsti, ztrátu chuti k jídlu, sníženou spontánní aktivitu, pomalý pohyb, vyboulení páteře, netečnost, pomalou reakci a další projevy stárnutí. Čím delší je doba injekce, tím jsou příznaky zjevnější. Ve srovnání se stárnoucí skupinou se duševní stav potkanů, barva srsti, chuť k jídlu, tvar těla a reakční citlivost zlepšily s prodloužením doby podávání v každé skupině, které byla podávánaCistanche. Mezi nimi nebyl v podstatě žádný rozdíl mezi skupinou vysokodávkovaných přípravků a kontrolní skupinou.
3.2 ÚčinekCistanchena obsahu MDA, SOD a NO v séru stárnoucích modelových krys
Výsledky jsou uvedeny v tabulce I. Ve srovnání se slepou skupinou byla modelová skupina mda.no významně zvýšena (P<0.01), and="" sod="" was="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" each="" treatment="" group="" mda.no="" was="" significantly="" lower=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" but="" it="" is="" not="" statistically="" significant;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="">Cistanche, MDA.N0 skupiny střední a nízké dávky Cistanche byla významně snížena (F<0.05 ),="" sod="" tends="" to="" increase;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="" cistanche,="" the="" mda.no="" of="" the="" middle="" and="" low-dose="" groups="" of="" cistanche="" rose="" significantly="" (p=""><0.01 or="" p=""><0.05), and="" the="" sod="" tended="" to="" decrease;="" compared="" with="" the="" jiu="" nvrong="" gao="" dose="" group,="" the="" mda.no="" of="" the="" high-dose="" eggplant="" paste="" group="" increased="" significantly="" (p=""><0.01), and="" sod="" tended="" to="" decrease.="" this="" result="" shows="" that="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group="" compared="" with="" different="" dose="" groups,="" and="" the="" treatment="" effect="" of="" the="" product="" group="" is="" better="" than="" that="" of="" the="" raw="" product="" group="" compared="" with="" the="" same="" dose="" group.="">
3.3účinek Cistanchena imunitní funkci stárnoucích modelových krys Chi
3.3.1 Účinek Cistanche na index sleziny a index brzlíku stárnoucích modelových krys
Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2. Ve srovnání se slepou skupinou je koeficient brzlíku a sleziny v modelové skupině g
Existuje klesající trend, ale není statisticky významný. Ve srovnání s modelovou skupinou byly koeficienty brzlíku a sleziny u každé léčebné skupiny významně zvýšeny (F<0.05); compared="" with="" the="" high-dose="" cistanche="">
Skupinové srovnání, brzlík a slezina u skupin se střední a nízkou dávkouCistanchemají tendenci klesat
Potenciál; ve srovnání s vysokou dávkouCistanche deserticolaskupina s vysokou dávkou, brzlík a slezina střední a nízké dávky dívčích past na víno
Viscerální koeficient má klesající tendenci; ve srovnání s vysokou dávkouCistanche deserticolaskupiny s vysokou dávkou, koeficienty brzlíku a sleziny u vysoké dávkycistanche deserticolaskupiny s vysokou dávkou mají klesající tendenci. Tento výsledek ukazuje, že skupina s vysokou dávkou je lepší než skupina s nízkou dávkou ve srovnání se skupinami s různými dávkami a léčebný účinek skupiny produktů je lepší než u skupiny se syrovým produktem ve srovnání se skupinou se stejnou dávkou.
Tabulka 1 Srovnání obsahu SOD.MDA.NO v krvi krys v každé skupině (n. =8,x ±s)
Poznámka:. Ve srovnání s modelovou skupinou I, P<005.><001; j="" air-day="" group="" comparison.=""><[)01; tlilll="" high-dose="" ether="" group="" jqi="" [i_low-dose="" group="" comparison.=""><005.><(). ()1;="" the="" high-dose="" product="" group="" is="" compared="" with="" the="" product="" tl="" and="" ff="" [journal="" f="" group.="" })=""><0.05.1l><(1o1; product="" high="" yanlian="" group="" q.="" pindaoli="" {group="" comparison.=""><005.><>
3.3.2 Vliv patologických změn na slezině oCistanchestárnoucí model krys. Slepá skupina má tenké a jednotné pouzdro sleziny, čiré slezinné trámce bez otoku, zřetelné oddělení červené a bílé dřeně, více uzlíků sleziny a stejnou velikost ve středu sleziny Počet buněk v lymfatické pochvě kolem arterioly je hustá. V modelové skupině byla slezina ztluštělá, trabekula a kůra zduřelé, červená a bílá dřeň nejasná, bílá dřeň byla výrazně snížena, počet lymfocytů byl snížen, velké množství zánětlivých buněk bylo infiltrováno, morfologická struktura byla poškozena. Ačkoli velikost uzlin ve slezině v každé léčené skupině byla odlišná, hranice bílé a červené pulpy byly jasné. Počet buněk v lymfatické pochvě kolem centrální malé tepny sleziny byl hustý a morfologie a struktura byly obnoveny. Navíc skupina destilátorů s vysokými dávkami byla schopna zlepšit patologické změny. Je lepší než skupina vitaminu E, ve které seCistancheprodukt je lepší než skupina surových produktů a skupina s vysokou dávkou je lepší než skupina s nízkou dávkou. Viz vložka X-XI vložka.1-10 je mtDNA v mozcích potkanů ve slepé skupině, modelové skupině, kontrolní skupině a zvýšené skupině. mtDNA Obrázek 3 Výsledky elektroforézy produktů amplifikace mtDNA PCR v mozku potkana (primer PI.P2)
3.4 Delece a mutace mtDNA v mozku
Podle primerů P3 a P4 lze získat konzervativní fragment mtDNA o velikosti přibližně 770 bp. Z obrázku 2 můžeme vidět, že cílové fragmenty byly amplifikovány ve všech 9 drahách, což ukazuje, že všech 9 skupin mtDNA bylo úspěšně extrahováno.
Determination of mtDNA4834 bp deletion mutation: If there is a rat mtDNA4834 bp deletion, primers P1 and P2 will amplify the 4834 bp loss and break the fusion gene fragment with a length of 597 bp. As shown in Figure 3, there is a clear DNA band between 500 l>p a 750 bp v drahách 2, 4, 5, 7, 9 a 10. Fragmenty byly získány a odeslány do Hangzhou Baocheng Biotechnology Company pro sekvenování. Ve srovnání se sekvencí uvedenou Gadatetou et al. (1989), dokázal, že dochází k deleci fragmentů mtDNA o velikosti přibližně 4000-5000 bp. Ukazuje tedy, že v mozku modelové skupiny existuje asi 4834 bp delece mtDNA. Dráhy 1, 3 a 8 neobsahují žádné fragmenty, což naznačuje, že v 1, 3 a 8 nejsou žádné delece mitochondriálních fragmentů. Výsledky ukázaly, že ve skupině kvasinek z vysokodávkového destilátoru nebyly žádné chybějící fragmenty, ve skupině s pozitivním lékem, a slepá skupina, což naznačuje, že skupina kvasinek z vysokodávkovaného destilátoru může mít účinky proti stárnutí. Viz obrázek 2~obrázek 3.
1-10 je mtDNA v mozcích potkanů ve slepé skupině, modelové skupině, kontrolní skupině a zvýšené skupině. mtDNA Obrázek 3 Výsledky elektroforézy produktů amplifikace mtDNA PCR v mozku potkana (primer PI.P2)
Cistanche: proti stárnutí
4. Diskuze
Model stárnutí způsobený intragastrickým podáním D-galaktózy je v současnosti běžněji používaným modelem stárnutí. Model především snižuje aktivitu různých antioxidačních enzymů, takže při metabolismu těla vzniká velké množství volných radikálů, což vede ke stárnutí organismu. Změny v morfologii tkání jsou podobné změnám přirozeného stárnutí ⑻. Velké množství experimentů ukázalo, že D-galaktózou indukované abnormální zvýšení obsahu NO v mozku a cerebelární kůře a krvi stárnoucích myší. Výsledky této studie potvrdily, že obsah krve stárnoucích potkanů byl významně vyšší než u normální skupiny, což bylo podobné výsledkům uváděným v literatuře „-m.
V tomto experimentu, anti-aging efekt stárnutí modelu krys před a po zpracováníCistanchebyl studován. Výsledky ukázaly sérové MDA a N u stárnoucího modelu potkanů. Výrazně zvýšené (P<0.01), sod="" significantly="" decreased="" (p=""><0.01), the="" model="" group="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" have="" a="" tendency="" to="" decrease,="" the="" spleen="" has="" obvious="" pathological="" damage,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" is="" also="" missing.="" different="" processed="" meat="" ash="" can="" significantly="" reduce="" the="" levels="" of="" mda="" and="" no="" (/=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" increase="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improve="" spleen="" pathological="" damage,="" and="" high="" mtdna="" in="" the="" brain="" the="" dose="" group="" and="" the="" positive="" drug="" group="" also="" did="" not="" appear="" to="" be="" missing.="" and="" the="" prepared="" meat="" puree="" is="" better="" than="" the="" raw="" meat="" puree,="" and="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group.="" research="" in="" recent="" years="" believes="" that="" aging="" is="" also="" related="" to="" the="" lipid="" peroxidation="" of="" biological="" membranes="" caused="" by="" free="" radicals.="" sod="" "'-e="" is="" an="" enzyme="" that="" scavenges="" superoxide="" free="" radicals.="" the="" older="" the="" body,="" the="" weaker="" the="" body's="" sod="" activity="" and="" the="" fewer="" antioxidants.="" this="" will="" increase="" the="" free="" radical="" damage="" factor="" mda,,4~,7],="" and="" eventually="" accelerate="" aging.="" in="" addition,="" the="" results="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" of="" aging="" model="" rats="" indicate="" that="" roujing="" rong="" can="" delay="" aging="" by="" improving="" the="" immune="" function="" of="" the="" body.="" the="" results="" of="" the="" study="" hope="" to="" provide="" a="" scientific="" basis="" for="" the="" clinical="" application="" of="">Cistanche.
