Účinky celkových glykosidů Cistanche Deserticola na poškození oxidativním stresem a buněčnou apoptózu u potkanů s cerebrální ischemií-reperfuzí Ⅰ
Mar 15, 2024
Abstracovat
Cíl: Prozkoumat účinky a možné mechanismyCelkové glykosidy Cistanche deserticola(GC) na poškození oxidativním stresem a apoptózu nervových buněk u potkanů s mozkemischemické reperfuzní poškození(CIRI).
Metody: Model okluze střední cerebrální arterie (MCAO) byl zkonstruován u modelu potkanů metodou embolizace suturou. Poté, co byl model úspěšně vytvořen, byla krysám v lékové skupině (GC) podávána GC 50 mg/(kg·d) žaludeční sondou po dobu 14 po sobě jdoucích dnů; krysám ve skupině s falešnou operací (Sham) a v modelové skupině (Model) byl podáván stejný objem normálního fyziologického roztoku. Ústní podání. Po podání byla k hodnocení neurologického deficitu použita metoda Longa skóre; krysy byly poté usmrceny a bylo provedeno barvení TTC pro výpočet procenta plochy mozkového infarktu; K detekci séra byla použita metoda ELISAmalondialdehydobsah (MDA),superoxiddismutáza(SOD) aGlutathionperoxidáza (GSH-Px)aktivita; Western blot k detekci jaderného faktoru E2-faktoru 2 (Nrf2), hemové oxygenázy-1 (HO-1) a B v mozkové tkániBuněčný lymfom/leukémie-2 (Bcl-2), Bcl-2-asociovaný X protein (Bax) a kaspáza-3 (kaspáza-3).
Výsledky: Ve srovnání se skupinou Sham měla modelová skupina zvýšené skóre neurologického deficitu, zvýšené procento plochy mozkového infarktu,zvýšený obsah MDA, snížené aktivity SOD a GSH-Px a snížená hladina proteinové exprese Nrf 2, HO -1 a Bcl-2 Hladiny proteinové exprese Bax a kaspázy-3 se zvýšily; ve srovnání s modelovou skupinou se skóre neurologického deficitu u potkanů ve skupině GCs snížilo, procento plochy mozkového infarktu se snížilo,Obsah MDA se snížil, aktivita SOD a GS H-Px se zvyšuje, hladiny proteinové exprese Nrf 2, HO -1 a Bcl - 2 se zvýšily a hladiny proteinové exprese Bax a kaspázy - 3 se snížily. Závěr: GC mohou účinně redukovat cerebrální ischemicko-reperfuzní poškození a jeho mechanismus může souviset s aktivací dráhy Nrf 2 / HO - 1, čímž se snižuje hladina oxidačního stresu a inhibuje apoptóza nervových buněk.
[klíčová slova]Celkové glykosidy Cistanche deserticola; cerebrální ischemicko-reperfuzní poškození; oxidační stres; apoptóza buněk
PŘÍRODNÍ BIO EXTRAKT CISTANCHE
Kliknutím získáte další podrobnosti
Supporting Service Of Wecistanche-Největší vývozce cistanche v Číně:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Nakupujte pro další specifikace Podrobnosti:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
cerebrální ischemie-reperfuze,
CIS je onemocnění s extrémněvysoká nemocnost, postiženíaúmrtnosti. Mozkové buňky jsou extrémně citlivé na ischemii a hypoxii, takže rekanalizace mozkových cév co nejdříve je nejúčinnějším způsobem, jak se vypořádat s akutní ischemickou cévní mozkovou příhodou. Intravenózní trombolýza a mechanická trombektomie jsou v současné době široce používané metody, ale vzhledem k jejich relativně
Z důvodu úzkého časového okna a dalších neovlivnitelných faktorů pouze<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Reperfuze mozkové ischemieCIRI je typ zotavení mozkových cév ze stenózy Překrývající se patologické poškození, ke kterému dochází během průtoku krve. V současné době se má za to, že jeho patologický mechanismus může souviset s toxicitou excitačních aminokyselin, přetížením vápníkem, uvolňováním zánětlivých faktorů a akumulací volných kyslíkových radikálů způsobených poškozením mitochondrií [1], což nakonec vede k destrukci hematoencefalické bariéry, poruchám mikrocirkulace , apoptóza nervových buněk a nekróza [1] 2] a řada reakcí, čímž se dále zhoršují neurologické deficity.
Celkové glykosidy Cistanche deserticola (glykosidy cistanche, GC) jsou odvozeny z tradiční čínské medicíny Herba Cistanche Hlavní účinná látka se získává ze stonků a kořenů palic. Předchozí studie ukázaly, že GC mohou účinně inhibovat peroxidaci lipidů, zlepšovat mitochondriální funkci, vychytávat přebytečné volné radikály kyslíku, inhibovat uvolňování zánětlivých cytokinů, snižovat cytotoxicitu, proti agregaci krevních destiček, inhibovat buněčnou proliferaci, inhibovat apoptózu neuronů a snižovat hladiny hormonů, čímž působí proti stárnutí, proti nádorům, proti depresi, posiluje imunitu, zlepšuje ischemická kardiovaskulární a cerebrovaskulární onemocnění, zlepšuje schopnosti učení a paměti a kognitivní funkce a zlepšuje reprodukci [3].
Studie ukázaly, že GC mohou snižovat oxidační poškození buněk a udržovat integritu hematoencefalické bariéry.
[4]; GC mohou účinně zlepšit životaschopnost buněk a blokovat zánět a apoptózu indukovanou po ischemicko-reperfuzi [5]; Nrf 2 hraje důležitou roli v protizánětlivých a antioxidačních procesech [6]. Na základě výše uvedeného je cílem tohoto článku dále studovat účinky a možné dráhy GC na oxidační stres a apoptózu po CIRI replikací modelu CIRI.
1 Materiály a metody
1. 1 Léčiva a činidla GC (SN-5692, čistota 98 %, západní
Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), 2% roztok barviva trifenyltetrazoliumchlorid (TTC) (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), souprava ELISA (Beijing Boosen Co., Ltd.), souprava pro kvantitativní analýzu proteinu BCA (USA Cell Signaling Technology Company), králičí anti-myší protilátka Bcl-2, Bax, Caspas Antibodies jako e-3, Nrf 2, HO-1 a kozí anti-králičí sekundární protilátky byly zakoupeny od Proteintech Company ze Spojených států.
1. 2 nástroje
Centrifuga (Model: TDL-40B, Shanghai Anheng Scientific Instrument Factory), čtečka mikrodestiček (model: Max-M5, American Molecular Devices Company), elektroforéza SDS-PAGE (model: DYY-7C, Společnost Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), gelový skener (model: 4466611, US BIO-RAD Company).
1. 3 zvířata
Samci potkanů Wistar [SCXK (Peking) 2019-0010], čistý stupeň, stáří 8 týdnů, tělesná hmotnost 250-280 g.
1. 3 způsoby
1. 3. 1 Seskupování a modelování
Potkani byli rozděleni do falešné skupiny (Sham), modelové skupiny (Model) a lékové skupiny (GC) pomocí jednoduché randomizační metody. V každé skupině bylo 15 krys. Byly adaptivně vychovány po dobu 1 týdne a poté modelovány. Striktně nalačno a nalačno 12 hodin před operací, skupina Model a skupina GCs použily metodu embolizace suturou [7] k vytvoření uzávěru střední mozkové tepny (okluze střední mozkové tepny). okluze, MCAO) krysí model, odstranění embolu bylo provedeno po 2 hodinách ischemie k dosažení reperfuze. , zaznamenejte čas zahájení reperfuze. Rána byla sešita, kůže byla dezinfikována jodoforem a zvířata byla vrácena do klece a chována a poté perfundována po dobu 24 hodin. Operace u krys ve skupině Sham byla stejná jako u modelových krys, ale nebylo provedeno žádné ucpání. Nakonec bylo 10 krys v každé skupině ponecháno pro následující experimenty.
1. 3. 2. Způsob administrace
Vezměte prášek GC a přidejte čistou vodu, abyste připravili roztok 15 mg/ml. Předběžné studie ukázaly, že dávka 50 mg/(kg·d) je lepší než u jiných dávkových skupin [8], takže dávka vybraná pro tento experiment je stejná jako dříve. Krysám ve skupině GC byly podávány GC žaludeční sondou po 24 hodinách ischemie a reperfuze a krysám ve skupině Sham a Modelové skupině byl podáván stejný objem normálního fyziologického roztoku žaludeční sondou po dobu 14 dnů.
1. 3. 3 Skóre neurologického deficitu
Ke skóre 24 hodin po operaci byla použita metoda Longa skórování [7] a modelové krysy se skóre 1 až 3 byly ponechány pro následující experimenty. Skóre po poslední dávce. 0 bodů: Žádné
Neurologické příznaky; 1 bod: mírný neurologický deficit, kontralaterální přední končetina se při zvednutí ocasu ohýbá a elevuje a addukty ramene; 2 body: středně těžký neurologický deficit, kontralaterální přední končetina se ohýbá a elevuje při zvednutí ocasu, addukce ramene, otáčení v kruzích na opačnou stranu léze při chůzi; 3 body: těžký neurologický deficit, naklonění na opačnou stranu léze při chůzi; 4 body: nevědomé a autonomní činnosti.
1. 3. 4 Stanovení procenta plochy mozkového infarktu
Po posledním podání byly náhodně vybrány 4 krysy z každé skupiny, hluboce anestetizovány, dekapitovány a jejich mozky byly rychle odebrány.
Rychle zmrazte mozkovou tkáň v chladničce na -20 stupňů po dobu 20 minut. Poté, co je mozková tkáň relativně zafixovaná, vyjměte ji. Začněte od průsečíku předního pólu mozku k optickému chiasmatu a od čela k týlnímu hrbolu prořízněte mozek potkana podél koronální roviny. Nakrájejte na 5 mozkových plátků o tloušťce 2 mm, ponořte je do 2% roztoku TTC, vložte na 15 minut do 37stupňové vodní lázně k barvení, otočte a barvěte dalších 15 minut. Nakonec byly řezy mozku ponořeny do 4% roztoku paraformaldehydu a fixovány po dobu 12 hodin před fotografováním. Normální mozková tkáň byla zobrazena červeně a mozková tkáň po infarktu byla zobrazena bíle. Použijte obrazový software k analýze a výpočtu frekvence infarktu každého řezu mozku. Frekvence infarktu=infarktová plocha/celková plocha řezu mozku × 100 %.
1. 3. 5 Detekce indikátorů souvisejících s oxidativním stresem
Uveďte potkana do anestezie, odeberte 4 ml krve z břišní aorty, alikvotujte ji do čistých EP zkumavek a umístěte ji do 4stupňové chladničky na 0. Centrifugujte při 3 500 otáčkách za minutu po dobu 5 hodin při 4 stupních po dobu 15 minut, odeberte supernatant a nakonec uchovejte sérum 3 krys v každé skupině. Obsah malondialdehydu (MDA) a superoxiddismutázy (superoxiddismutázy) byl stanoven podle provozní metody soupravy ELISA. e dismutase,
SOD), aktivita glutathionperoxidázy (glutathionperoxidáza, GSH-Px).
1. 3. 6 Detekce Western blot
Oxidační stres a proteiny související s apoptózou byly měřeny za účelem měření exprese proteinů Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax a kaspázy -3 v mozkové tkáni. Z každé skupiny byly vybrány tři krysy a z nemocné oblasti bylo odebráno příslušné množství mozkové kůry, k ní byl přidán lyzační roztok a po extrakci proteinu byla vypočtena koncentrace proteinu. Po elektroforéze proteinového gelu, přenesení na membránu, blokování blokovacím roztokem po dobu 2 hodin, opláchnutí a poté inkubace s primární protilátkou při 4 stupních přes noc, další den byl TBST odstraněn, opláchnut a byla přidána sekundární protilátka pro inkubaci po dobu 2 h. Umístěte cílový pás na zobrazovací analyzátor a analyzujte hodnotu šedé. Vypočítejte relativní hodnotu šedé proužku, relativní hodnotu šedé proužku=cílovou hodnotu šedé proužku / hodnotu šedé vnitřního referenčního proužku.
1. 4 Metody statistické analýzy
Datová aplikace SPSS 25. 0 software pro analýzu dat a statistické grafy v tomto článku byly nakresleny pomocí softwaru GraphPad Prism 8. Výsledky dat konzistentní s normální distribucí jsou vyjádřeny jako průměr ± standardní odchylka. Jednofaktorová analýza rozptylu byla použita pro srovnání mezi více vzorky a LSD-t byla použita pro srovnání mezi dvěma nezávislými vzorky. Test s P < 0. 05 ukazuje, že rozdíl je statisticky významný.
