Účinky léčby 2-aminoindan-2-fosfonovou kyselinou na akumulaci salidrosidu a čtyř fenylethanoidních glykosidů v suspenzní buněčné kultuře Cistanche Deserticola

další informace:ali.ma@wecistanche.com

Gao Sheng Hu a kol

Abstraktní

2-Aminoindan-2-fosfonová kyselina (AIP), specifický kompetitivní inhibitor fenylalanin amonné lyázy (PAL) byl aplikován na suspenzní buněčnou kulturuCistanche deserticola. Účinky léčby AIP na buněčný růst, aktivitu PAL, obsah a výtěžky celkové fenolické sloučeniny, salidrosidu a čtyřFenylethanoidové glykosidy(PheG) jsou vyšetřovány. Výsledky ukázaly, že léčba {{0}},5 a 2,0 lM AIP měla podobné účinky na měření zkoumaná v této studii. Léčba AIP vedla k významnému snížení aktivity PAL, obsahu celkových fenolických sloučenin a(fenylethanoidní glykosidy)Obsah PheGs. Lineární regresní analýza ukázala, že aktivita PAL měla vysoký korelační koeficient s celkovým obsahem fenolické sloučeniny a čtyřmi(fenylethanoidní glykosidy)Obsah PheGs. Celková plocha aktivity PAL pod křivkou (AUC) měla vysoký korelační koeficient s celkovým výtěžkem fenolické sloučeniny a výtěžky pěti testovaných sloučenin v neošetřených buněčných vzorcích. V buňkách ošetřených AIP si celková AUC aktivita PAL v čase udržela vysokou korelaci s celkový výtěžek fenolické sloučeniny a výtěžky tří testovaných sloučenin, echinakosidu, akteosidu a tubulosidu A, ale ne salidrosidu a cistanosidu A. Rozdíl může být způsoben odlišným biosyntetickým původem každé z testovaných sloučenin. Tyto výsledky ukazují důležitou roli PAL v biosyntéze(fenylethanoidní glykosidy)PheGs v suspenzní buněčné kultuřeCistanche deserticola.

Klíčová slova

Cistanche deserticola, Suspenzní buněčná kultura,Fenylethanoidové glykosidy, 2-Aminoindan-2-kyselina fosfonová (AIP), aktivita PAL, biosyntéza, salidrosid

Kliknutím získáte výhody extraktu Cistanche a produkty Cistanche

Úvod

Cistanche deserticolaYC Ma, tradiční čínská léčivá bylina, se v Číně používá po staletí pro své vyživující účinky. Je to vytrvalá a parazitická léčivá bylina patřící do rodu Cistanche z čeledi Orobanchaceae. Rostlina roste v pouštních oblastech západní Číny a je parazitem na kořenech Haloxylosammodendrun.

Studie izolace chemických složek a strukturního objasněníCistanche deserticolazačala v 80. letech (Kobayashi a kol. 1984a, b, 1985, 1986; Karasawa a kol. 1986; Xiong a kol. 1996). Demonstracefenylethanoidové glykosidy(PheGs) jako účinné sloučeniny chránící neuronové buňky před poškozením (Sheng et al. 2002; Puet al. 2003; Geng et al. 2004; Tian a Pu. 2005) způsobeným chemikáliemi a stárnutím způsobily nárůst tržní poptávky po komerčně dostupných zdravých potravinách. a drogy. Kvůli nadměrné sklizni, porušování stanovišť a složitému parazitismu, přírodních zdrojůCistanche deserticolajsou na pokraji vyhynutí a v roce 2003 byly zařazeny do Úmluvy o mezinárodním obchodu s ohroženými druhy volně žijících živočichů a planě rostoucích rostlin (CITES).

K vyřešení problémů spojených s omezenými zdroji byly v Číně provedeny buněčné tkáňové kultury této léčivé rostliny. Tyto studie zkoumaly účinky různých faktorů včetně osmotického stresu (Liu a Cheng 2008), krmení prekurzory (Ouyang et al. 2005; Liu et al. 2007), světla o různé vlnové délce (Ouyang et al. 2003a), fungalelicitorů (Lu a Mei 2003; Cheng a kol. 2005, 2006), andabiotické elicitory (Ouyang a kol. 2003b) na buněčný růst a akumulaci(fenylethanoidní glykosidy)PheGs. Tyto studie poskytly cenné informace pro kulturu ve velkém měřítkuCistanche deserticolaJak jsou tyto sloučeniny biosyntetizovány v Cistanchecells, zůstává nejasné a bylo hlášeno jen málo genetických informací.

V experimentech s krmením izotopem značených prekurzorů (Ellis 1983; Saimaru a Orihara 2010) bylo prokázáno, že kafeoylová skupina akteosidu byla odvozena od L-fenylalaninu, zatímco 3, 4-dihydroxylfenylethanol byl odvozen od L-tyrosinu. Hypotetická biosyntetická cesta(fenylethanoidní glykosidy)PheGs dovnitřCistanche deserticolabyla navržena (doplňkový obr. 1) na základě současných znalostí souvisejících biosyntetických drah. Enzym PAL katalyzoval první krok z fenylalaninu na caffeoylovou skupinu. PAL bylo nepřímo prokázáno jako důležitý enzym při biosyntéze(fenylethanoidní glykosidy)PheGs výzkumem léčby elicitorem vCistanche deserticola(Lu a Mei 2003; Cheng et al. 2005, 2006; Ouyang et al. 2003b), ve kterých je celková(fenylethanoidní glykosidy)Akumulace PheGs byla zlepšena spolu se zvýšenou aktivitou PAL. Léčba elicitorem nejen zlepší hladinu exprese PAL, ale také zlepší hladiny dalších enzymů zapojených do biosyntézy sekundárních metabolitů. Vzhledem k obtížím při zavádění transformačního systémuCistanche deserticola, přímý důkaz nadměrné exprese PAL na(fenylethanoidní glykosidy)Akumulace PheG nebyla hlášena. V jiných závodech vyrábějících(fenylethanoidní glykosidy)PheGs, jako jsou rostliny rodu Echinacea, experiment také nebyl proveden. Zde uvádíme účinky léčby PAL specifickým inhibitorem 2-aminoindan-2-fosfonové kyseliny na buněčný růst, celkové fenolické sloučeniny, PAL aktivitu a akumulaci(fenylethanoidní glykosidy)PheGs v suspenzní buněčné kultuřeCistanche deserticolave snaze vyhodnotit funkční roli PAL v biosyntéze PheG. Studovat biosyntetickou dráhu(fenylethanoidní glykosidy)PheGs na molekulární úrovni jsme klonovali a charakterizovali gen CdPAL1 z kalusuCistanche deserticola(Hu et al. 2010). Snažíme se vytvořit transformační systém rostlin Echinacea zprostředkovaný Agrobacterium rhizogenes a zavést gen do vlasatého kořene Echinacea, abychom mohli studovat přímé účinky nadměrné exprese tohoto genu na akumulaci PheG. Kromě toho jsme také klonovali několik genů zapojených do biosyntetické dráhy PheGsCistanche deserticolakalus pomocí screeningu cDNA knihovny a RACE PCR, jako je tyrosináza, cinnamylalkoholdehydrogenáza, tyrosindekarboxyláza, cinnamát-3-hydroxyláza, kumarát-4-hydroxyláza; UDP-glukosyltransferáza a hydroxylcinnamyltransferáza. Provedeme další experimenty včetně molekulární charakterizace, expresní analýzy, linií nadměrné exprese kořene Echinaceahairy, abychom objasnili biosyntetickou dráhu PheGsonu na molekulární úrovni.

Materiály a metody

Suspenzní buněčná kultura C. deserticola

Suspenzní buněčná kulturaCistanche deserticolabyl udržován v B5 (Gamborg et al. 1968) tekutém médiu doplněném 30 g sacharózy-l-1, 0,5 mg 6-BA-l-1 a 2,0 mg NAA l-1 při 25 ± 1 stupni za třepání (180 ot./min.). Světelná perioda byla 16 (L)/8 (D) a suspenzní buněčná kultura byla subkultivována každých 28 dní. Během subkultivace byla suspenzní buněčná kultura nejprve přefiltrována na čisté lavici pomocí autoklávované tkaniny Mira a poté byla čerstvá buněčná peleta zvážena a naočkována do nového média v koncentraci 2 g FW-50 ml-1.

Průzkum růstu

Růst buněk byl měřen hlavně pomocí čerstvé hmotnosti buněk (FW) a suché hmotnosti (DW). Z buněčných kultur byly odebírány vzorky 2., 4., 8., 12., 17., 22. a 28. den a filtrovány vakuovou filtrací pomocí tkaniny Mira, dokud z nálevky neklesla žádná kapalina. Buněčná peleta byla zvážena a zaznamenána jako FW. Polovina shromážděných čerstvých buněk byla skladována při -78 C pro test aktivity a druhá polovina byla sušena při 60 °C po dobu 24 hodin, dokud nebyla pozorována konstantní hmotnost. Vysušené buňky byly ochlazeny v desikátoru na teplotu místnosti a poté zváženy. Tato váha byla vynásobena dvěma a zaznamenána jako DW. Vysušené vzorky buněk byly rozemlety na jemný prášek (80 meshsíto až 100 procent), umístěny do hnědých zkumavek, uzavřeny a skladovány při -20 stupních pro budoucí experimenty.

Extrakce a stanovení obsahu celkových fenolických sloučenin

Třicet miligramů sušeného buněčného prášku z každého vzorku bylo extrahováno za použití 400 ul 80% methanolu při 37 °C po dobu 1 hodiny s rychlostí třepání 200 ot./min. s následnou centrifugací. Supernatant byl přenesen do nové zkumavky a zbytky byly extrahovány ještě dvakrát za použití stejného postupu. Supernatant byl spojen, filtrován a použit pro stanovení celkového obsahu fenolické sloučeniny a HPLC analýzu (Hu 2007).

Obsahy celkových fenolických sloučenin byly analyzovány pomocí modifikované Folin-Ciocalteuovy metody (Singletonet al. 1999). Folin-Ciocalteuovo činidlo bylo zředěno 1 objemem destilované vody. Získaný extrakt byl zředěn a 10 ul extraktu bylo použito pro každý obsahový test. Deset mikrolitrů každého zředěného extraktu bylo přidáno do 200 ul čerstvě připraveného 2% roztoku uhličitanu sodného. Směs byla intenzivně promíchána a následovala krátká centrifugace. Směs byla inkubována při teplotě místnosti po dobu 5 minut a následně smíchána s 10 ul zředěného Folinova činidla. Konečná směs byla důkladně promíchána a inkubována při teplotě místnosti po dobu 30 minut. OD750 byla měřena v UV/Vis spektrofotometru a zaznamenána pro výpočet celkových fenolických sloučenin. Sériový roztok kyseliny chlorogenové byl použit jako standardní sloučenina a byla připravena standardní křivka mezi množstvím kyseliny chlorogenové a OD750 pro výpočet reprezentativního obsahu celkových fenolických sloučenin jako kyseliny chlorogenové. Pomocí celkového obsahu fenolických sloučenin a údajů o růstu vzorků jsme vypočítali výtěžek celkové fenolické sloučeniny v každém vzorku a vyjádřili, kolik miligramů celkové fenolické sloučeniny se vyprodukuje v jednom vrhu (mg L-1).

Léčba AIP

Zásobní roztok AIP byl připraven použitím destilované vody k dosažení konečné koncentrace 4 mM. Vhodný objem zásobního roztoku byl přidán k 5 0 ml média, aby se získaly konečné koncentrace 0,5 a 2,0 lM. Média byla autoklávována a naočkována čerstvě odebranými buňkami. Trojité baňky byly naočkovány buňkami odebranými ze stejné láhve a byly použity ve všech skupinách, aby se minimalizovala systematická chyba.

HPLC analýza

Extrakty získané v 'Extrakce a stanovení obsahu celkových fenolických sloučenin' byly před analýzou HPLC filtrovány přes 0,5 lm filtr. HPLC analýza byla provedena pomocí Hitachi HPLC (L-2130 pumpa, L-2420UV/Vis detektor a L-2200 autosampler) s C18 kolonou (150 9 4,6 mm, 5 lm, Waters), mobilní fáze (gradientová eluce MeOH/H2O) a detekční vlnová délka 330 a 220 nm pro detekci(fenylethanoidní glykosidy)PheGs a salidroside, v tomto pořadí. Deset mikrolitrů každého standardního ředění sloučeniny a extraktu vzorku bylo nastříknuto do kolony. Stanovení obsahu echinakosidu, akteosidu, cistanosidu A, tubulosidu A a salidrosidu byla provedena pomocí standardní křivky pro každou referenční sloučeninu. Salidrosid a echinakosid byly zakoupeny od National Institute for Control of Pharmaceutical and Biological Products (Peking, Čína) a Dr. Nobuhisa Ezaki z Yomeishu Seizo Company poskytli další referenční sloučeniny. Čistota všech standardních sloučenin je vyšší než 95 procent. Strukturální informace pro pět testovaných sloučenin jsou uvedeny v tabulce 1.

Test aktivity PAL

Surový protein byl extrahován ze vzorků skladovaných při {{0}} stupni. Vzorek 0,1 g byl rozemlet na jemný prášek s kapalným dusíkem a do zkumavky obsahující buněčný prášek bylo přidáno 600 ul pufru pro extrakci proteinu a následovalo intenzivní promíchání. 5 minut ve 4stupeň. Směs byla centrifugována při 13, 000 otáčkách za minutu při 4 stupních po dobu 10 minut. Supernatant byl definován jako surový proteinový extrakt. Deset mikrolitrů surového proteinového extraktu bylo přidáno do Tris-HCl (pH 8,5) pufru obsahujícího 10 ul 5 mM fenylalaninu na ledu. Směs byla inkubována při 55 °Cstupeňpo dobu 20 minut a reakce se ukončí přidáním 50 ul 2M HC1. Změny OD270 byly zaznamenány pro výpočet produkce kyseliny skořicové na základě standardní křivky kyseliny trans-skořicové. Celková plocha PAL aktivita-čas pod křivkou (AUC) byla vypočtena na základě dat buněčného růstu a dat testu aktivity PAL.

Statistická analýza

Všechny statistické analýzy byly provedeny pomocí softwaru Microsoft excelsoftware včetně standardní chyby a lineární regresní analýzy

Výsledky a diskuse

Účinky léčby AIP na buněčný růstCistanche deserticolasuspenzní buněčná kultura

Jak je ukázáno na obr. 1, ošetření AIP v obou koncentracích nemělo žádné inhibiční účinky na buněčný růst, jak ukazují FW a DW.

Účinky léčby AIP na aktivitu PAL

Jak je znázorněno na obr. 2, léčba AIP v obou koncentracích nevedla ke snížení aktivity PAL 2. den, ale aktivita PAL se významně snížila ve dnech 4 až 28. V těchto dnech byla aktivita PAL buněk ošetřených 0.5 1MAIP 80,3, 73,2, 82,7, 68,5, 62,3 a 42,4 procent neošetřených buněk a pod 2 1M AIP.

Účinky léčby AIP na celkovou akumulaci fenolických sloučenin

Obrázek 3a ukazuje, že ošetření AIP v obou koncentracích výrazně ovlivnilo biosyntézu celkových fenolických sloučenin. Podobně jako u aktivity PAL se celkový obsah fenolové sloučeniny nesnížil 2. den, ale začal klesat 4. den. Inhibiční účinky AIP při 0,5 a 2 lM na celkový obsah fenolické sloučeniny byly velmi podobné. Míra inhibice obsahu se pohybovala od 91,1 do 50,1 procenta a od 89,9 do 41,5 procenta neošetřených buněk v 0,5 a 2 lM buňkách ošetřených AIP, v daném pořadí. Na základě stanovení obsahu celkových fenolických sloučenin a údajů o růstu buněk byly vypočteny výtěžky celkových fenolických sloučenin, jak je znázorněno na obr. 3b. Významné změny v celkovém výtěžku fenolické sloučeniny v různých růstových stádiích byly evidentní u buněk ošetřených 0,5 a 2,0 lM AIP ve srovnání s neošetřenými buňkami. Jak je znázorněno na Obr. 2 a 3, inhibice aktivity PAL a pokles celkových fenolických sloučenin a výtěžků měly podobné trendy.

Byla provedena lineární regresní analýza mezi aktivitou PAL a celkovým počtem fenolických sloučenin a výsledky naznačovaly, že v buňkách ošetřených AIP byla aktivita PAL úzce spjata s celkovým obsahem fenolických sloučenin (obr. 4a). Výtěžek celkových fenolických sloučenin ve vzorku v každém časovém kroku je výsledkem akumulace; proto byla provedena lineární regresní analýza mezi celkovou aktivitou PAL-čas AUC a celkovým výtěžkem fenolické sloučeniny. Obrázek 2 ukazuje, že aktivita PAL byla v každém časovém bodě odlišná; proto, abychom vypočítali celkovou AUC aktivity PAL na čase, předpokládáme, že aktivita PAL mezi dvěma časovými body se měnila lineárně. Jak je znázorněno na obr. 4b, AUC dobře korelovala s celkovým výtěžkem fenolické sloučeniny a vykazovala korelační koeficienty (R2) 0,9788, {{10}},8157 a 0 0,6981 pro neošetřené, 0,5 lM AIP a 2,0 lM AIP ošetřené buňky, v daném pořadí. Na základě těchto výsledků jsme dospěli k závěru, že inhibice PAL aktivity způsobené AIP léčbou vedla ke snížení celkové biosyntézy a akumulace fenolických sloučeninCistanche deserticolasuspenzní buněčná kultura.

Účinky léčby AIP na akumulaci salidrosidu a čtyři(fenylethanoidní glykosidy)PheGs

Studovat podrobné účinky AIP na biosyntézu a akumulaci(fenylethanoidní glykosidy)PheG, extrakty různých vzorků byly aplikovány na HPLC a reprezentativní chromatogram každého vzorku je znázorněn na obr. 5. Standardní vzorec pro testované sloučeniny a jejich retenční časy jsou uvedeny v tabulce 2. Jak ukazuje obr. 5a, salidrosid a další čtyři PheG jsou základní linie oddělené za našich analytických podmínek. Z obr. 5b–d můžeme vidět, že obsah salidroside se významně nezměnil a na obr. 5f, g, že plocha píků detekovaných při 330 nm významně a kontinuálně klesala u 0,5 a 2 lM ošetřených AIP buněčné extrakty ve srovnání s neošetřenými buňkami (obr. 5e).

Změny obsahu a výtěžku každé testované sloučeniny jsou ukázány na obr. 6 a tabulce 3. Podle našich výsledků jsou echinakosid a cistanosid A dvě hlavní sloučeniny a jejich obsahy jsou asi desetkrát vyšší než u ostatních tří sloučenin. Byly však významné rozdíly v obsahu každé sloučeniny v reakci na léčbu AIP. V případě echinakosidu se obsah v neošetřených buňkách začal kontinuálně zvyšovat od 8. dne do 28. dne (obr. 5a), což bylo zcela odlišné od vzoru cistanosidu A, který dosáhl nejvyššího obsahu 8. den a mírně kontinuálně klesal až do 28. den. V buňkách ošetřených AIP se obsah těchto dvou sloučenin významně snížil stejným způsobem. Obsah akteosidu a tubulosidu A byl mnohem nižší než echinakosid, zatímco měnící se trend byl podobný jako u echinakosidu. Existuje také dramatický pokles výtěžku každé testované sloučeniny pro buňky ošetřené 0,5 a 2 1M AIP ve srovnání s buňkami neošetřenými. Podle obr. 6 a tabulky 3 klesl výtěžek echinakosidu, cistanosidu, akteosidu, tubulosidu A a salidrosidu na přibližně 10, 10, 34, 36 a 25 procent neošetřených buněk, v daném pořadí, 28. den v buňkách ošetřených AIP u obou buněk. koncentrace.

Lineární regresní analýza mezi aktivitou PAL a(fenylethanoidní glykosidy)akumulace PheGs

Pro stanovení, jak byly PAL aktivita a obsah každé testované sloučeniny korelovány v každé skupině, byla provedena lineární regresní analýza (obr. 7). Obsah salidrosidu ve všech skupinách měl nejnižší korelační koeficient (R2), v rozmezí od 0.1651 v neošetřené buňce do 0.4753 ve 2.0 1M buňkách ošetřených AIP . Kromě salidrosidu měly ostatní testované sloučeniny mnohem vyšší korelační koeficienty a jejich R2 je uvedeno na obr. 7. Naše výsledky ukázaly, že aktivita PAL vysoce koreluje s obsahem echinakosidu, akteosidu, cistanosidu A a tubulosidu A ve všech skupinách.

Provedli jsme také lineární regresní analýzu mezi celkovou aktivitou PAL-čas AUC a výtěžkem každé testované sloučeniny ve shromážděných vzorcích (obr. 8). Regresní analýza ukázala, že výtěžek každé sloučeniny koreloval s AUC odlišně. V neošetřených buňkách má všech pět sloučenin vysoké korelační koeficienty s celkovou AUC aktivity PAL v čase. V buňkách ošetřených AIP si však pouze echinakosid, akteosid a tubulosid A zachovaly vysoké korelační koeficienty a další dvě sloučeniny, cistanosid A a salidrosid, měly velmi nízké korelační koeficienty s celkovou AUC aktivity PAL na čase. Tyto výsledky naznačují, že aktivita PAL měla velmi rozdílné účinky na akumulaci těchto sloučenin. Podle tabulky 1 mají sloučeniny echinakosid, akteosid a tubulosid A kofeoylovou skupinu a 3, 4-dihydroxylfenylethanolovou skupinu; cistanosid A má feruloylovou skupinu a 3-methoxy, 4-hydroxylfenylethanolovou skupinu; andsalidrosid má hydroxylfenylethanolovou skupinu. Důvod, proč mají tyto sloučeniny různé korelační koeficienty s celkovou AUC aktivity PAL v čase v buňkách ošetřených AIP, může souviset s jejich odlišným biosyntetickým původem.

Jak je znázorněno na obr. 5, po léčbě AIP se většina píků kontinuálně a významně snižovala a v této studii bylo identifikováno pět. Z těchto testovaných sloučenin pouze salidrosid neměl žádnou kofeoylovou skupinu. Před touto studií se předpokládalo, že obsah důležitých meziproduktů před integrací kofeoylových skupin, jako je assalidrosid, by se zvýšil kvůli inhibici aktivity PAL, ale nenašli jsme významně zvýšené vrcholy v buňkách ošetřených AIP. Tento výsledek může nastat, protože(fenylethanoidní glykosidy)PheG jsou sekundární metabolity v C. deseriticola a jejich produkce(fenylethanoidní glykosidy)PheGs je regulován environmentálním stresem buněk. V našich experimentech nejsou buňky ošetřené AIP ošetřeny elicitorem nebo jiným stresem, takže produkce PheG a jejich meziproduktů není aktivně biosyntetizována v buňkách ošetřených AIP. Bylo také popsáno, že (Capple et al. 1986) aktivita rostlinné tyrosindekarboxylázy (TYRDC) může být silně inhibována La-aminooxy-b-fenylpropionátem, dalším PAL specifickým kompetitivním inhibitorem. TYRDC je klíčovým enzymem při výrobě salidrosidu z tyrosinu. Podle našich výsledků však nebyl obsah salidrosidu významně ovlivněn léčbou AIP, což naznačuje, že aktivita TYRDC nebyla silně ovlivněna. Ke stanovení účinků AIP na jeho aktivitu je vyžadován specifický test aktivity s použitím TYRDC purifikovaného proteinu nebo rekombinantního proteinu.

Závěry

Naše výsledky prokázaly, že léčba AIP při {{0}},5 a 2,0 lM neměla žádné výrazné účinky na buněčný růst, ale vedla k významné inhibici aktivity PAL, biosyntézy a akumulace celkové fenolické sloučeniny.(fenylethanoidní glykosidy)Suspenzní buněčné kultury PheGsinuCistanche deserticola. Lineární regresní analýza ukázala, že aktivita PAL měla vysoké korelační koeficienty s celkovým obsahem fenolické sloučeniny a(fenylethanoidní glykosidy)Obsah PheGs, kromě salidrosidu ve všech buněčných skupinách. Výtěžky celkových fenolických sloučenin a pěti testovaných sloučenin měly vysoké korelační koeficienty s celkovou AUC aktivity PAL na čase v neošetřených buňkách. Pokud jde o buňky ošetřené AIP, pouze echinakosid, akteosid a tubulosid A si uchovaly vysoké korelační koeficienty s celkovou AUC aktivity PAL v čase. Za tento rozdíl může být zodpovědný odlišný biosyntetický původ. Závěrem lze říci, že naše výsledky naznačují, že enzym PAL hrál důležitou roli při řízení biosyntézy a akumulace(fenylethanoidní glykosidy)PheGs v suspenzní buněčné kultuřeCistanche deserticola.

Poděkování

Tato práce byla podpořena výzkumným fondem Dong-A University. Rádi bychom poděkovali profesoru Jerrymu Zonovi, který pracuje na Ústavu organické chemie, biochemie a biotechnologie, Wrocław University of Technology v Polsku za poskytnutí AIP. Také bychom rádi projevili naše uznání Dr. Nobuhisovi Ezakimu z Yomeishu Seizo Company v Japonsku za poskytnutí standardních sloučenin cistanosidu A, akteosidu a tubulosidu A pro naše experimenty.

From: 'Effects of 2-aminoindan-2- acid treatment on akumulace salidroside a čtyř fenylethanoidových glykosidů v suspenzní buněčné kultuře Cistanche deserticola' odGao Sheng Hu a kol

---Plant Cell Rep (2011) 30:665–674 DOI 10.1007/s00299-010-0997-3

Reference

Chapple CCS, Walker MA, Ellis BE (1986) Rostlinná tyrosindekarboxyláza může být silně inhibována La-aminooxy-b-fenylpropionátem. Planta 167:101–105

Cheng XY, Guo B, Zhou HY et al (2005) Opakovaná elicitace zvyšujefenylethanoidové glykosidyakumulace v suspenzních buněčných kulturáchCistanche deserticola. J Biochem Eng 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, et al (2006) Zlepšenífenylethanoidové glykosidybiosyntéza vCistanche deserticolasuspenzní buněčné kultury chitosanovým elicitorem. J Biotechnol 121(2):253-260
Ellis BE (1983) Výroba hydroxyfenyl ethanol glykosidů v suspenzních kulturách Syringa vulgaris. Fytochemie 22(9):1941–1943
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Požadavky na živiny suspenzních kultur kořenových buněk sóji. Exp Cell Res 50:151–158
Geng XC, Song LW, Pu XP et al (2004) Neuroprotective Effects ofFenylethanoidní glykosidyzCistanchessalsa proti dopaminergní toxicitě vyvolané 1-methyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydro-pyridinem (MPTP) u myší C57. Biol Pharm Bull 27(6):797-801
Hu GS (2007) Studie o suspenzní buněčné kultuře a molekulární biologiiCistanche deserticola. Magisterská diplomová práce, Shenyang Pharmaceutical University Hu GS, Jia JM, Hur YJ, et al (2010) Molekulární charakterizace fenylalanin amonia-lyázy zCistanche deserticola.Mol Bio Rep. doi:10.1007/s11033-010-0489-0
Karasawa H, Kobayashi H, Takizawa N et al (1986) Studie o složkách Cistanchis Herba. VIII. Yakugaku Zasshi 106 (8): 721–724
Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T et al (1984a) Studie o složkách Cistanchis Herba. IV. Chem Pharm Bull 32(10):3880-3885
Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T et al (1984b) Studie o složkách Cistanchis Herba. III. Chem Pharm Bull 32(8):3009–3014
Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T et al (1985) Studie o složkách Cistanchis Herba. V. Chem Pharm Bull 33(4):1452–1457
Kobayashi H, Karasawa H, Takizawa N et al (1986) Studie o složkách Cistanchis Herba. VII. Yakugaku Zasshi 106 (7): 562–566
Liu CZ, Cheng XY (2008) Enhancement offenylethanoidové glykosidybiosyntéza v buněčných kulturáchCistanche deserticolaosmotickým stresem. Plant Cell Rep 27:357–362
Liu JY, Guo ZG, Zeng ZL (2007) Zlepšená akumulacefenylethanoidní glykosids podáváním prekurzoru do suspenzní kultury Cistanche salsa. Biochem Eng J 33:88–93
Lu CT, Mei XG (2003) Zlepšenífenylethanoidové glykosidyprodukce houbovým elicitorem v suspenzní buněčné kultuřeCistanche deserticola.Biotechnol Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, et al (2003a) Intenzita světla a spektrální kvalita ovlivňující růst kalusuCistanche deserticolaa biosyntézafenylethanoidové glykosidy. Plant Sci 165:657–661
Ouyang J, Wang XD, Zhao B a kol. (2003b) Účinky prvků vzácných zemin na růstCistanche deserticolabuňky a produkcifenylethanoidové glykosidy. J Biotechnol 102:129-134
Ouyang J, Wang XD, Zhao B a kol. (2005) Zvýšená produkcefenylethanoidové glykosidypodáváním prekurzoru do buněčné kulturyCistanche deserticola. Process Biochem 40:3480–3484
Pu XP, Song ZH, Li YY et al (2003) Akteosid z Cistanche salsa inhibuje apoptózu 1, 2-methylfenylpyridiniovým iontem v neuronech cerebelárních granulí. Planta Med 69:652–666
Saimaru H, Orihara Y (2010) Biosyntéza akteosidu v kultivovaných buňkách Olea europaea. J Nat Med 64:139–145
Sheng GQ, Pu XP, Lei L, et al (2002) Tubulosid B z Cistanche salsa zachraňuje neuronální buňky PC12 před apoptózou a oxidačním stresem indukovanou methylfenylpyridiniovými ionty. Planta Med 68:966–970
Singleton VL, Orthofer R, Lamuela-Ravento´s RM (1999) Analýza celkových fenolů a dalších oxidačních substrátů a antioxidantů pomocí Folin-Ciocalteuova činidla. Method Enzymol 299:152-178
Tian XF, Pu XP (2005)Fenylethanoidní glykosids z Cistanches salsa inhibují apoptózu indukovanou 1-methyl-4-fenylpyridiniovým iontem v neuronech. J Ethnopharmacol 97:59–63
Xiong Q, Kadota S, Tani T, et al (1996) Antioxidační účinky fenylethanoidů zCistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19(12):1580–1585