Účinek vodného extraktu cistanches Herba na ztrátu kostí u krys po ovariektomii

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Haidong Liang 1,*, Fang Yu 2, Zhihong Tong 1 a Zaiguo Huang 3

1 Hands and feet microsurgery, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: tongzhih37@sina.cn

2 School of Medicine, Dalian University, Dalian 116033, China; E-Mail: yufangk7@sina.cn

3 Orthopedics Department, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: huangzg41@sina.com

Abstraktní:Pro posouzení schopnosti tradiční čínské medicíny extrakt z bylinek Cistanches Herba (CHE) zabránit úbytku kostní hmoty u krys po ovariektomii (OVX), byl intragastricky podán krysám extrakt Cistanches Herba (CHE). Samice potkanů ​​byly anestetizovány pentobarbitalem sodným (40 mg kg-1, ip) a jejich vaječníky byly odstraněny oboustranně. Krysy ve skupině s falešnou operací byly anestetizovány, laparotomovány a sešity bez odstranění jejich vaječníků. Po 1 týdnu zotavení z chirurgického zákroku byli OVX potkani náhodně rozděleni do tří skupin a orálně léčeni H2O (OVX skupina) nebo CHE (100 nebo 200 mg kg-1 denně) po dobu 3 měsíců. Falešně operovaná skupina (n=8) byla perorálně léčena H2O. Po 3 měsících byla zkoumána celková tělesná hustota kostních minerálů (BMD), obsah kostních minerálů (BMC), kostní biomechanický index, hladiny minerálních látek v krvi a aktivity antioxidačních enzymů v krvi u krys s falešnou operací, ovariektomií a s extraktem z Cistanches Herba. Výsledky ukázaly, že léčba extraktem Cistanches Herba významně v závislosti na dávce zvýšila hustotu kostního minerálu (BMD), obsah kostních minerálů (BMC), maximální zatížení, posunutí při maximálním zatížení, stres při maximálním zatížení, zatížení při automatickém přerušení, posunutí při automatickém přerušení a stres při autobreaku a aktivity antioxidačních enzymů v krvi snížily hladiny Ca, Zn a Cu v krvi ve srovnání se skupinou OVX. Tento experiment ukazuje, že podávání extraktu z bylin Cistanches Herba krysám po ovariektomii zvrátilo úbytek kostní hmoty a zabránilo osteoporóze.

klíčová slova:ovariektomie; krysa; kost; antioxidant; Cistanches Herba

Cistanches Herba

1. Úvod

Osteoporóza je onemocnění stárnutí spojené s úbytkem kostní hmoty, ke kterému často dochází bez příznaků, dokud se mikroarchitekturní zhoršení nestane tak významným, že zlomenina kosti nastává vždy v bodě, kde je redukce kostní hmoty nižší, než je potřeba pro integritu kosti. Osteoporóza má ve zdravotnictví velký význam. I když jsou kosti zmenšené, jsou z hlediska mineralizace normální, ale histologicky dochází ke snížení tloušťky kortexu a počtu a velikosti trámců hrubé spongiózní kosti [1–3].

V posledních letech bylo provedeno mnoho studií o tomto onemocnění. Hromadné údaje ukázaly, že ztráta estrogenu v menopauze je hlavním přispěvatelem k patogenezi onemocnění, protože tento hormon je hlavním negativním regulátorem aktivity osteoklastů [4–6] a osteoklasty jsou hlavními buňkami odpovědnými za přestavbu kostí při osteoporóze. [7].

Postmenopauzální osteoporóza je nejčastější metabolické onemocnění kostí, je charakterizováno rychlým úbytkem mineralizované kostní tkáně, narušením trabekulární architektury kosti a změnami krystalických vlastností minerálních ložisek, které mají za následek strukturální selhání (zlomeninu) místa bohatá na spongiózní kost, jako jsou obratle, kyčle a distální předloktí [8–11]. Nedostatek estrogenu je považován za hlavní determinantu úbytku kostní hmoty u postmenopauzálních žen. Ovariektomizované krysy a psi byly široce používány v modelech osteoporózy. V roce 1996 byly popsány účinky ibandronátu na psy po ovariektomii [12].

Cistanches Herba (CH), holoparazitická rostlina Cistanche deserticola YC Ma, je v orientální tradiční medicíně klasifikována jako tonizující látka a běžně se používá k léčbě zapomnětlivosti, ztráty sluchu, neplodnosti a chronické zácpy. CH má různé farmakologické účinky, včetně antinociceptivních, protizánětlivých a imuno-posilujících účinků [13,14]. Předchozí studie uvedla, že Cistanches Herba může vést kostní mezenchymální kmenové buňky (BMSC) k diferenciaci na osteoblasty, což slibuje příznivé vyhlídky pro léčbu osteoporózy a rozdělení zlomenin kostí [15]. Chen a kol. [16] uvedli, že polysacharidy Cistanches Herba mohou podporovat přechod buněčného cyklu kostní dřeně a obnovu hematopoetické funkce u anemických myší s útlumem kostní dřeně, urychlit hematogenezi u kmene rubrum a kmene makronukleu.

V této studii byly zkoumány kostní minerální hustota (BMD), kostní minerální obsah (BMC), kostní biomechanický index, hladiny minerálních látek v krvi a aktivity antioxidačních enzymů v krvi u falešně operovaných, ovariektomizovaných potkanů ​​a potkanů ​​léčených přípravkem Cistanches Herba, aby se studovaly účinky léčby. s extraktem Cistanches Herba na kvalitu kostí.

Tradiční čínská medicína Cistanches Herba extrakt (CHE)

2. Materiály a metody

2.1. Příprava vodních extraktů cistanches Herba

Cistanches Herba byla shromážděna z pouště v alxa lize autonomní oblasti Nei Monggol (Vnitřní Mongolsko) v roce 2010.

Vysušený stonek Cistanches Herba byl extrahován destilovanou vodou při 100 stupních po dobu 2 hodin. Roztok byl centrifugován při 4000 ot./min. po dobu 10 minut. Zbytky byly odstraněny filtrací a spojený filtrát byl odpařen zahřátím, aby byla získána požadovaná koncentrace (2,1 g suchého rostlinného ekvivalentu extraktu/ml). Výtěžek extrakce byl 13,7 procent (hmotn./hmotn.). Vodný extrakt byl skladován při 2–8 stupních.

2.2. Zvířata

Pro studii bylo použito 32 samic krys Wistar ve věku 3 měsíců, o hmotnosti mezi 240 a 270 g na začátku experimentu. Byly udržovány za standardních laboratorních podmínek s 12hodinovým cyklem světla a tmy, s volným přístupem ke standardní laboratorní potravě pro potkany a vodě z vodovodu.

2.3. Pokusy na zvířatech.

Samice potkanů ​​byly anestetizovány pentobarbitalem sodným (40 mg kg-1, ip) a jejich vaječníky byly odstraněny oboustranně. Krysy ve skupině s falešnou operací byly anestetizovány, laparotomovány a sešity bez odstranění jejich vaječníků. Po 1 týdnu zotavení z chirurgického zákroku byli potkani OVX náhodně rozděleni do tří skupin (n=8 v každé skupině) a intragastricky léčeni H2O (skupina OVX), extraktem Cistanches Herba (CHE) (100 nebo 200 mg kg). −1 denně) po dobu 3 měsíců. Falešně operovaná skupina (n=8) byla perorálně léčena H2O.

Poslední den studie byla zvířata zvážena a usmrcena a současně byly odebrány vzorky krve. Stehenní kosti byly vypreparovány a zbaveny měkké tkáně pro měření biomechanického testování.

Všechny experimenty byly provedeny v souladu s výzkumnými protokoly stanovenými výborem pro péči o zvířata v Číně.

2.4. Denzitometrie kostí

Minerální obsah femorální kosti (BMC) a kostní minerální hustota (BMD) byly stanoveny pomocí Hologic QDR{{0}}W DXA. Přístroj byl upraven pro režim s ultravysokým rozlišením s řádkováním 0.0254 cm, rozlišením 0,0127 cm a kolimátorem o průměru 0,9 cm. Kosti byly umístěny do Petriho misky. Aby se simulovala hustota měkkých tkání obklopujících kosti, byla kolem kostí nalita voda z vodovodu do hloubky 1 cm. Výsledky jsou uvedeny pro BMC a pro měřenou plochu. BMD této oblasti se vypočítá jako BMC děleno plochou. Kromě výsledků pro celý femur byly jako podoblasti analyzovány distální a střední oblast femuru [17].

2.5. Biomechanické testování kostí

Stehenní kosti byly udržovány ve 4 stupních až do stanovení pevnosti při přetržení pomocí 5-kN Flexure Fixture, nakonfigurovaného pro tříbodové ohybové testy a připojeného k Instron Universal Testing Machine Model 4502 vybavenému 10- kN siloměr (Instron, Canton, MA, USA), jak bylo popsáno dříve [18]. Rychlost křížové hlavy byla 50 mm/min a rychlost vzorkování dat byla 10 vzorků/s. Maximální zatížení, napětí při maximálním zatížení, zatížení při porušení a napětí při porušení byly stanoveny ve femurech pomocí softwaru Series IX, v 8.08.00 (Instron).

2.6. Biochemická analýza

Hladiny Ca, Zn a Cu v krvi byly měřeny atomovou absorpční spektrofotometrií.

Na základě metody Kinga a Armstronga [19] byla testována aktivita alkalické fosfatázy (ALP) s použitím fenylfosfátu sodného jako substrátu. Vyvolaná barva byla odečtena při 510 nm v UV-vis spektrofotometru po 10 minutách. Aktivity ALP byly vyjádřeny jako IU/L.

Koncentrace malondialchehyche v krvi (MDA) byla stanovena pomocí metody popsané v Jain et al. [20], na základě reaktivity TBA. Stručně, 0,2 ml erytrocytárních pelet nebo supernatantu získaných z tkání, 0,8 ml fosfátového pufru (pH 7,4), 0.025 ml BHT a { {19}}.5 ml 30% TCA bylo přidáno do zkumavek a promícháno. Po 2 hodinách inkubace při -20 stupních byla směs centrifugována (4000 x g) po dobu 15 minut. Poté byl odebrán 1 ml supernatantu a přidán do každé zkumavky a poté 0,075 ml 0,1 M EDTA a

Bylo přidáno 0,25 ml 1% TBA. Tyto zkumavky s teflonem potaženým šroubovacím uzávěrem byly inkubovány při 90 stupních ve vodní lázni po dobu 15 minut a ochlazeny na teplotu místnosti. Optická hustota byla měřena při 532 pro koncentraci MDA v krvi.

Aktivita glutathionperoxidázy (GSH-Px) byla stanovena podle metody Lawrence a Burka [21]. Testovací směs se skládala z 2.0 ml 75 mM fosfátového pufru (pH 7.0), 50 μl 60 mM glutathionu, {{15} },1 ml 30 jednotek/ml glutathionreduktázy, 0,1 ml 15 mM EDTA, 0,1 ml 3 mM NADPH a příslušné množství tkáňového supernatantu do konečného objemu 3,0 ml . Reakce byla zahájena přidáním 0,1 ml 7,5 mM H202. Rychlost změny absorbance během konverze NADPH na NADP plus byla zaznamenávána spektrofotometricky při 340 nm po dobu 3 minut. Aktivita GSH-Px pro tkáně byla vyjádřena jako μmol NADPH oxidovaného na NADP plus min-1 mg-1 proteinu.

Aktivita superoxiddismutázy (SOD) byla stanovena v krvi podle metody Sun et al. [22]. Princip metody je založen na inhibici redukce nitrotetrazoliové modři (NBT) použitím systému xanthin-xanthinoxidázy jako generátoru superoxidu. Aktivita byla hodnocena v supernatantech 10 000 g methanol/chloroform (5/3, v/v) extraktů tkáňových homogenátů (10 procent). Jedna jednotka SOD byla definována jako množství enzymu způsobující 50% inhibici rychlosti snížení NBT.

Aktivita katalázy (CAT) byla měřena pomocí Abeiho [23] metody. Sérum bylo přidáno do kyvety obsahující 2,89 ml 50 mmol/l fosfátového pufru (pH 7.0). Reakce byla zahájena přidáním 0,1 ml čerstvě připravené 30 mmol/l H202, aby byl konečný objem 3,0 ml při 25 stupních. Rychlost rozkladu H202 byla měřena při 240 nm po dobu 5 minut na spektrofotometru. Jedna jednotka (U) CAT byla definována jako množství enzymu potřebného k rozkladu 1 nmol H2O2 za minutu při 25 stupních a pH 7,8.

2.7. Statistická analýza

Experimentální výsledky byly vyjádřeny jako průměr ± SD pro osm zvířat v každé skupině. Biochemické parametry byly analyzovány statisticky za použití jednosměrné analýzy rozptylu ANOVA, po které následoval Dunnettův vícenásobný srovnávací test (DMCT). P-hodnota<0.05 was="" considered="" statistically="">

3. Výsledky

Dvě zvířata v průběhu studie vypršela. V důsledku toho byla čísla pro skupiny na konci studie: 8 ve falešné kontrole; 7 ve skupině OVX; 7 ve skupině s léčbou CHE (100 mg kg-1 denně) a 8 ve skupině s léčbou CHE (200 mg kg-1 denně). Dva dny po operaci byl příjem potravy a vody u potkanů ​​mírně nižší než před operací. Žádné zvíře netrpělo infekcí a anabiózou. U potkanů ​​nebyly pozorovány žádné klinicky zjevné nežádoucí účinky.

Před operací nebyl mezi skupinami žádný významný (p > {{0}}.01) rozdíl v tělesné hmotnosti potkanů. Tělesná hmotnost ve skupině s OVX byla významně (p < 0.01)="" nižší="" než="" u="" skupiny="" s="" falešnou="" léčbou="" (tabulka="" 1).="" podávání="" extraktu="" cistanches="" herba="" v="" dávce="" 10}0="" a="" 200="" mg/kg="" denně="" významně="" (p="">< 0,05)="" zvýšilo="" tělesnou="" hmotnost="" potkanů="" ​​ve="" skupině="" léčené="" che="" (100="" a="" 200="" mg/kg="" denně).="" data="" získaná="" od="" zvířat="" ukázala,="" že="" existují="" statisticky="" významné="" rozdíly="" mezi="" bmd="" a="" bmc="" skupiny="" ovx="" a="" kontrolní="" kontroly="" (p="">< 0,01).="" jak="" se="" očekávalo,="" podávání="" extraktu="" z="" bylinek="" cistanches="" herba="" v="" dávce="" 200="" mg/kg="" vedlo="" k="" významnému="" zvýšení="" bmd="" a="" bmc="" u="" skupiny="" léčené="" che="" (p="">< 0,05;="" p=""><>

4. Diskuze

Osteoporóza je jednou z nejčastějších poruch spojených s nedostatkem estrogenu a stárnutím. Menopauza má za následek zvýšený kostní obrat, nerovnováhu mezi tvorbou kosti a kostní resorpcí a čistý úbytek kostní hmoty. Ztráta kosti způsobená nedostatkem estrogenu je primárně způsobena zvýšením osteoklastické kostní resorpce jak u lidí, tak u pokusných zvířat [24].

Ačkoli osteoporóza postihuje jak starší muže, tak ženy, postmenopauzální ženy byly primárním ohniskem osteoporózy [25,26]. Dramatický nedostatek ženských hormonů je nejdůležitějším faktorem postmenopauzální osteoporózy žen. Krysí model OVX se nejčastěji používá ve výzkumu postmenopauzální osteoporózy [27,28], kdy ovariektomie zpočátku vede k nadměrné resorpci kosti nad tvorbou kosti a způsobuje ztrátu kostní hmoty. Operace OVX způsobuje výrazné zvýšení tělesné hmotnosti, což by mohlo být vodítkem pro hodnocení úspěšnosti operace [29]. Na konci této studie byla tělesná hmotnost skupiny OVX výrazně snížena ve srovnání s hmotností skupiny s falešnou léčbou a léčba extraktem Cistanches Herba těmto poklesům plně zabránila. Předpokládáme, že OVX způsobil vážné fyziologické nepohodlí, které ovlivnilo příjem potravy potkanů. Následně byla tělesná hmotnost skupiny OVX výrazně snížena.

Minerální hustota kostí byla popsána jako pouhé zástupné měřítko pevnosti kosti [30]; mikroarchitektonické vlastnosti jsou však nově objeveným markerem pro hodnocení skutečného dopadu léčby na kvalitu trabekulární kosti. Ačkoli je nízká kostní hmota hlavním rizikovým faktorem pro zlomeniny [31], zachování trabekulární kostní architektury významně přispívá k pevnosti kosti a může snížit riziko zlomenin nad BMD a BMC, jak prokázala řada studií, které uvádějí úzké korelace mezi mikrostrukturálními vlastnosti a biomechanickou pevnost kostí [32,33]. V této práci bylo zjištěno, že BMD a BMC se významně liší mezi skupinami s falešnou a ovariektomií. Léčba extraktem Cistanches Herba významně zvýšila BMD a BMC u OVX potkanů. Kromě toho podávání extraktů Cistanches Herba stále významně v závislosti na dávce zvyšovalo maximální zatížení, posun při maximálním zatížení, stres při maximálním zatížení, zatížení při automatickém přerušení, posunutí při automatickém přerušení a stres při automatickém nástupu do skupin léčených CHE ve srovnání se skupinou OVX. Tyto výsledky ukázaly, že stehenní kosti z krys krmených extraktem z Cistanches Herba měly vyšší zatížení při selhání, a proto mohly být odolnější vůči stresovým zlomeninám. Kromě toho krysy ve skupině OVX měly vyšší hladiny Ca, Zn a Cu v krvi než krysy ve falešné skupině. Podávání extraktu Cistanches Herba snížilo hladiny Ca, Zn a Cu v krvi u OVX potkanů.

Názor, že oxidační stav je důležitý u osteoporózy, je v souladu se silnou epidemiologickou souvislostí mezi osteoporózou a aterosklerózou, onemocněním, ve kterém hraje hlavní roli oxidační stres. Navíc bylo nedávno pozorováno, že u žen existuje souvislost mezi oxidačním stresem (měřeným biomarkerem oxidačního stresu, 8-iso-PGF2- ) [34], hladinami antioxidantů [35] a kostní minerální hustota. Klinické studie, které zkoumaly vztah mezi dietním a/nebo doplňkovým askorbátem a kostní hmotou u lidí, také naznačují souvislost se zvýšenou kostní hmotou [36].

Protože MDA má vysokou reaktivitu vůči aminoskupinám, inhibuje syntézu nukleových kyselin a proteinů a také deaktivuje enzymy [37,38]. Pokles antioxidačních enzymů femuru pozorovaný po OVX tedy může být způsoben zvýšenou peroxidací lipidů. Antioxidační enzymy se podílejí na obranném systému před poškozením tkání nebo buněk zprostředkovaným volnými radikály. Metabolizují buď volné radikály nebo reaktivní kyslíkové meziprodukty na neradikálové produkty. Tyto enzymy zahrnují rodinu enzymů závislých na glutathionu [39]. V této studii jsme zaznamenali významný pokles hladin antioxidačních enzymů viz. SOD, GSH-Px, CAT v krvi ovariektomizovaných potkanů. Tato zjištění naznačují, že nedostatek ovariálních hormonů koreluje se selháním v boji proti oxidativnímu stresu. Podávání extraktů Cistanches Herba významně v závislosti na dávce zvýšilo krevní SOD, GSH-Px a CAT aktivity u OVX potkanů. Zdá se, že tyto výsledky naznačují lepší ochranný účinek extraktu Cistanches Herba proti oxidativnímu stresu vyvolanému během OVX.

Stručně řečeno, extrakt Cistanches Herba je účinný při prevenci úbytku kostní hmoty způsobené nedostatkem ovariálních hormonů, jak je patrné z hodnot BMD, BMC a hladin Ca, Zn a Cu v krvi. Vzhledem k tomu, že osteoporóza je spojena s oxidačním stresem, studie tohoto druhu potvrzují důležitost terapeutických hodnot antioxidantů. Předpokládáme, že extrakt Cistanches Herba zlepšuje kvalitu kostí, možná částečně zvýšením aktivity antioxidačních enzymů OVX potkanů ​​a snížením minerálních prvků v kostech.

Extrakt z cistanches Herba: zabraňuje úbytku kostní hmoty

Reference

1. Canalis, E.; Giustina, A.; Bilezikian, JP Mechanismy anabolických terapií pro osteoporózu. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 905–916.

2. Heaney, RP; Recker, RR; Saville, PD Menopauzální změny v kostní remodelaci. J. Lab. Clin. Med. 1978, 92, 964-970.

3. McNamara, LM; Ederveen, AGH; Lyons, CG; Cena, C.; Schaffer, MB; Weinans, H.; Prendergast, PJ Síla spongiózní kostní trabekulární tkáně z normálních, ovariektomizovaných potkanů ​​a potkanů ​​léčených léky v průběhu stárnutí. Kost 2006, 39, 392–400.

4. Compston, JE Hormonální substituční terapie. Clin. Rheumatol. 1997, 11, 583–596.

5. Meiner, SE Rozšiřující se krajinná osteoporóza: Možnosti léčby dnes. Adv. Nurse Pract.1999, 7, 26–31.

6. Aubin, JE; Bonnelye, E. Osteoprotegerin a jeho ligand: Nové paradigma regulace osteoklastogeneze a kostní resorpce. Osteoporos. Int. 2000, 11, 905-913.

7. Roodman, GD Pokroky v biologii kostí: osteoklasty. Endokr. Rev. 1996, 17, 308–332.

8. Kaštan, CH, III. Medikamentózní terapie: Kalcitonin, bisfosfonáty a anabolické steroidy. In Osteoporóza: Etiologie, diagnostika a management; Riggs, BL, Melton, LJ, III, Eds.; Lippincott-Raven: Philadelphia, PA, USA, 1995.

9. Quan, Q.-M.; Wu, W.; Li, Y.-X.; Cai, Q.-R. Rozdíly v obsahu icariinu a flavonoidů u druhů Barrenwort. J. Med. Plants Res. 2010, 4, 1176–1181.

10. Du, XG; pánev, HZ; Zhang, CY; Zhang, HY; Liu, HM; Chen, ZY; Extrakt Zeng, XY Zingiber officinale moduluje imunosupresi vyvolanou g-paprsky u myší. J. Med. Plants Res. 2010, 4, 1647–1655.

11. Paschalis, EP; Betts, F.; DiCarlo, E.; Mendelsohn, R.; Boskey, AL Mikrospektroskopická analýza FTIR biopsií lidského hřebene kyčelního z neléčené osteoporotické kosti. Calcif. Tissue Int. 1997, 61, 487–492.

12. Motoie, H.; Kanoh, H.; Ogata, S.; Kawamuki, K.; Shikama, H.; Fujikura, T. Prevence úbytku kostní hmoty bisfosfonátem YM175 u psů po ovariektomii s omezením vápníku ve stravě. Jpn. J. Pharmacol. 1996, 71, 239–246.

13. Lin, LW; Hsieh, MT; Tsai, FH; Wang, WH; Wu, ČR Antinociceptivní a protizánětlivá aktivita způsobená Cistanche deserticola u hlodavců. J. Ethnopharmacol. 2002, 83, 177–182.

14. Wu, XM; Gao, XM; Tsim, KW; Tu, PF Arabinogalaktan izolovaný ze stonků Cistanche deserticola indukuje proliferaci kultivovaných lymfocytů. Int. J. Biol. Macromol. 2005, 37, 278–282.

15. Zeng, JC; ventilátor, YG; Liu, JR; Zeng YR; Yi, CZ; Liang Y. Experimentální studie směrové diferenciace kostních mezenchymálních kmenových buněk (BMSC) na osteoblasty řízená cistanche deserticola obsahující sérum. Zhongguo Gu Shang 2010, 23, 606–608.

16. Chen, Z.-W.; Zhu, B.-D.; Xu H.-Y. Experimentální studie pouštně žijících polysacharidů cistanche na regulované hematogenezi u myší s anémií s útlumem kostní dřeně. Brada. Oblouk. Tradice. Brada. Med. 2007, 25, 1473–1474.

17. Prakasam, G.; Jo, JK; Chen, M.-M.; Castro-Magana, M.; Liang, CT; Aloia, JF Účinky růstového hormonu a testosteronu na tvorbu kortikální kosti a hustotu kostí u starých krys po ovariektomii. Kost 1999, 24, 491–497.

18. McClung, JP; Stahl, CH; Marchitelli, LJ; Morales-Martinez, N.; Makin, KM; Young, AJ; Scrimgeour, AG Účinky dietní fytázy na přírůstek tělesné hmotnosti, složení těla a biomechaniku kostí u rostoucích potkanů ​​krmených dietou s nízkým obsahem zinku. J. Nutr. Biochem. 2006, 170, 190–196.

19. Král, EJ; Armstrong, AR Pohodlná metoda pro stanovení aktivity sérové ​​a žlučové fosfatázy. Umět. Med. Doc. J. 1934, 31, 376–381.

20. Jain, SK; McVie, R.; Duett, J.; Herbst, JJ Peroxidace lipidů na membráně erytrocytů a glykosylovaný hemoglobin u diabetu. Diabetes 1989, 38, 1539–1543.

21. Lawrence, RA; Burk, RF Aktivita glutathionperoxidázy v játrech krys s deficitem selenu. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1976, 71, 952–958.

22. Sun, Y.; Oberley, LW; Ying, L. Jednoduchá metoda pro klinické stanovení superoxiddismutázy. Clin. Chem. 1988, 34, 497–500.

23. Abei, H. Catalase in vitro. Metody Enzymol. 1988, 10, 121–126.

24. Mozaffari, Z.; Azarnia, M.; Abdolhamid Angaji, S. Hodnocení toxických účinků vodného extraktu z listů Trigonella foenum-graecum na vývoj dlouhé kostní tkáně u plodu potkana. J. Med. Plants Res. 2010, 4, 1148–1155.

25. Buencamino, MCA; Sikon, AL; Jain, A.; Thacker, HL Observační studie o dodržování pokynů pro léčbu osteopenie. J. Zdraví žen 2009, 18, 873–881.

26. Schmitt, MN; Schmitt, J.; Dören, M. Role fyzické aktivity v prevenci osteoporózy u postmenopauzálních žen – aktualizace. Maturita 2009, 63, 34–38.

27. Lelovas, PP; Xanthos, TT; Thoma, SE; Text písně, GP; Dontasi, IA Laboratorní krysa jako zvířecí model pro výzkum osteoporózy. Comp. Med. 2008, 58, 424–430.

28. Ncango, DM; Pohl, CH; van Wyk, PWJ; Kock, JLF Nesteroidní protizánětlivé léky (NSAID) inhibují růst kvasinkových patogenů. Afr. J. Microbiol. Res. 2011, 5, 1123–1125.

29. Fazliana, M.; Nazaimoon, WMW; Gu, HF; Ostenson, extrakt CG Labisia pumila reguluje tělesnou hmotnost a adipokiny u krys po ovariektomii. Maturita 2009, 62, 91–97.

30. Bourrin, S.; Ammann, P.; Bonjour, JP; Rizzoli, R. Obnova minerální hustoty a síly kosti proximální tibie, ale ne spongiózní kostní architektury, po dlouhodobé bisfosfonátové nebo selektivní terapii modulátorem estrogenového receptoru u starých potkanů. Kost 2002, 30, 195–200.

31. Borah, B.; Dufresne, TE; Chmielewski, PA; Gross, GJ; Prenger, MC; Phipps, RJ Risedronate zachovává trabekulární architekturu a zvyšuje pevnost kostí v obratli miniprasat po ovariektomii, měřeno pomocí trojrozměrné mikropočítačové tomografie. J. Bone Miner. Res. 2002, 17, 1139–1147.

32. Müller, R.; Hannan, M.; Smith, SY; Bauss, F. Intermitentní ibandronát zachovává kvalitu kostí a pevnost kostí v bederní páteři po 16 měsících léčby u opice cynomolgus po ovariektomii. J. Bone Miner. Res. 2004, 19, 1787–1796.

33. Pruh, NE; Kumer, JL; Majumdar, S.; Khan, M.; Lotz, J.; Stevens, RE; Klein, R.; Phelps, KV Účinky syntetických konjugovaných estrogenů, a (Cenestin) na strukturu a sílu trabekulární kosti v modelu krysy s odstraněnými vaječníky. Osteoporosis Int. 2002, 13, 816–823.

34. Basu, S.; Michaelsson, K.; Olofsson, H.; Johansson, S.; Melhus, H. Asociace mezi oxidačním stresem a hustotou kostních minerálů. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001, 288, 275–279.

35. Maggio, D.; Barabani, M.; Pierandrei, M.; Cristina Polidori, M.; Catani, M.; Mecocci, P.; Senin, U.; Pacifici, R.; Cherubini, A. Výrazný pokles plazmatických antioxidantů u starších žen s osteoporózou: Výsledky průřezové studie. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2003, 88, 1523–1527.

36. Morton, DJ; Barrett-Connor, EL; Schneider, užívání doplňku DL vitamínu C a minerální hustota kostí u žen po menopauze. J. Bone Miner. Res. 2001, 16, 135–140.

37. Pták, RP; Draper, HH Vliv malonaldehydu a acetaldehydu na kultivované savčí buňky: Morfologie růstu a syntéza makromolekul. J. Environ. Zdraví 1980, 6, 811–823.

38. Abdelhalim, MAK Potenciální vliv oxidačního stresu vyvolaného dietou s vysokým obsahem cholesterolu na složení a vlastnosti červených krvinek u králíků. Afr. J. Microbiol. Res. 2010, 4, 836–843.

39. Chaudiere, J.; Ferrari-Illiou, R. Intracelulární antioxidanty od chemických k biochemickým mechanismům. Food Chem. Toxicol. 1999, 37, 949-962.