Vliv polysacharidu Cistanche Deserticola na proliferaci lymfocytů

Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan, Li Xiaohong, Yang Meihua, Shi Yue

(Institut léčivých rostlin, Peking Union Medical College, Čínská akademie lékařských věd, Peking 100193)

ObjektivníTo studovat účinekPolysacharid Cistanche deserticola(CDPS) na proliferaci lymfocytů u myší. 

MetodyMTT test byl použit k detekci proliferace slezinných lymfocytů u myší. Cyklofosfamid (Cy) byl použit k replikaci zvířecích modelů imunokompromitovaných zvířat a byly měřeny indexy sleziny a brzlíku normálních a imunokompromitovaných zvířat. Aktivita interleukinu-2 (IL-2) byla měřena testem proliferace thymocytů. VýsledekPolysacharid Cistanche deserticolavýznamně podpořila proliferaci mitogenem (ConA a LPS) aktivovaných lymfocytů a neaktivovaných normálních buněk a podpořila sekreci IL-2 v lymfocytech. Prokázalo to intraperitoneální podáníPolysacharid Cistanche deserticolavýznamně zvýšil index sleziny normálních a imunokompromitovaných myší a měl také významný antagonistický účinek na snížení indexu brzlíku způsobené Cy. ZávěrPolysacharid Cistanche deserticolamůže významně podporovat proliferaci slezinných lymfocytů u myší, což může souviset s jeho podporou sekrece IL-2.

Pouštní žijící cistanche

[klíčová slova]Polysacharid Cistanche deserticola; Index sleziny; brzlíkový index; proliferace lymfocytů; interleukin-2

Rostlinné polysacharidy přitahovaly širokou pozornost díky svým rozšířeným imunomodulačním účinkům a relativně nízké toxicitě [1].Cistanche deserticola ma, známý jako "Pouštní ženšen", je šupinatá, suchá, masitá nať Cistanche deserticola, rostlina z čeledi Orobaceae, která má rozsáhlé farmakologické účinky.Jeho vodní odvar může výrazně zvýšit fagocytární procento a fagocytární index makrofágů.Další studie ukázaly, že jeho materiálovým základem je celkový polysacharid Cistanche deserticola[3]. Zeng Qunli a kol. [4] zjistili, že jediná složkaPolysacharid Cistanche deserticolamá významný proliferační účinek na myší thymické lymfocyty in vitro. ÚčinekPolysacharid Cistanche deserticolana proliferaci lymfocytů byla pozorována in vivo a in vitro.

Molekulární vzorec Cistanche deserticola

1. Materiál a metody

1.1 Léky a činidla

Polysacharid z Cistanche deserticola poskytuje rostlinolékařské a chemické oddělení Institutu medicíny a pěstování, Medical College. Je extrahován zPrášek z extraktu cistanchea obsah polysacharidů je 87 procent .

Prášek z extraktu cistanche

Před použitím in vivo experimentů rozpusťte a zřeďte fyziologickým roztokem na požadovanou koncentraci a vařte pro sterilizaci. Před použitím in vitro experimentů bylo kultivační médium RPMI-1640 rozpuštěno a naředěno a byla provedena vysokotlaká sterilizace. Lipopolysacharid (LPS), konkanavalin (ConA), dexamethason (DEX) a MTT jsou všechny produkty společnosti Sigma Corporation. Cyklofosfamid, čínsko-americký společný podnik Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd. Fetální bovinní sérum, kultivační médium RPMI1640 a trypsin jsou všechny produkty Gibco. Ostatní činidla jsou domácí analytická činidla.

1.2 Zvířata

Mladé myši BALB c (úroveň SPF) poskytuje společnost Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Peking) 2002-2003]. Zvířata třídy SPF jsou chována v místnosti a volně se krmí a pijí.

1.3 Zařízení

Enzymový marker Multikan Ascent, produkt společnosti Thermo Electron Company, USA. Přesný pH metr Leici PHS-3B, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd. Inkubátor oxidu uhličitého Napco 5410, NAPCO, USA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B invertovaný mikroskop, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Metoda

1.4.1 Účinek na proliferaci lymfocytů [5]:

Rutinní příprava slezinných lymfocytů z myší BALL c pomocí RPMI-1640 k úpravě koncentrace buněk na 1 × 107 ml, inokulovaných na 96jamkovou kultivační destičku, se 100 buněčnými suspenzemi přidanými do každé jamky μ 50. - kultivované s různými koncentracemiPolysacharid Cistanche deserticola(konečná koncentracePolysacharid Cistanche deserticolapro proliferaci neaktivovaných lymfocytů byla v pořadí 6,25, 12,5, 25, 50 a 100 mg/l; konečná koncentracePolysacharid Cistanche deserticolapro proliferaci ConA-aktivovaných T lymfocytů byla v pořadí 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 a 62,5 mg/l; a konečná koncentracePolysacharid Cistanche deserticolapro proliferaci LPS aktivovaných B lymfocytů byla 1,56, 3,13, 6,25, 12,5 a 25 mg/l v pořadí) a jako kontrola bylo použito médium ConA nebo LPS, RPMI-1640. Celkový objem každého otvoru je 200 μl, při přidání mitogenu ConA a LPS (kontrola je RPMI-1640 obsahující odpovídající koncentrace ConA nebo LPS), konečné koncentrace obou jsou 2,5 mg L a 10 mg L, respektive. Pro různé úpravy byly vytvořeny tři paralelní otvory. Umístěte kultivační destičku do inkubátoru s 5% vlhkostí nasyceného CO2 při teplotě 37 stupňů na 68 hodin, přidejte MTT a pokračujte v kultivaci po dobu 4 hodin. Změřte hodnotu A540 nm enzymovým markerem pomocí metody MTT k detekci proliferace. Při porovnávání každé skupiny převeďte hodnotu A540nm na rychlost proliferace lymfocytů podle následujícího vzorce:rychlost proliferace lymfocytů=Kontrola vzorku A × 100 procent .

Účinky Cistanche—Zlepšení imunity

1.4.2 Účinek na hmotnost imunitních orgánů u normálních myší [6,7]:

Mladé myši BALB c (samci, 4-týdenní stáří, s tělesnou hmotností 10-15 g) byli náhodně rozděleni do slepé kontrolní skupiny (fyziologický roztok) a skupin s různými dávkami (125 mg (kg · bw) a 250 mg (kg · bw)), s 11 krysami v každé skupině. Lék byl podáván intraperitoneálně jednou denně po dobu 7 po sobě jdoucích dnů. Myši byly zabity po cervikální dislokaci. Odebrala se slezina a brzlík, odstranil se tuk a tkáň fascie a povrchová kapalina se vysušila filtračním papírem. Po zvážení index sleziny=100 × Hmotnost sleziny (mg) Tělesná hmotnost (mg); Index brzlíku=100 × Hmotnost brzlíku (mg) Tělesná hmotnost (mg) Vypočítejte index sleziny a index brzlíku pro každých 100 mg tělesné hmotnosti.

1.4.3 Účinek na hmotnost imunitního orgánu u imunokompromitovaných myší [7,8]:

Mladí krysy BALB c (samci, 6 týdnů staří, tělesná hmotnost 15-20 g) byli náhodně rozděleni do 12 skupin podle tělesné hmotnosti. S výjimkou normální kontrolní skupiny (intraperitoneální injekce ekvivalentního objemu fyziologického roztoku) bylo ostatním skupinám injikováno Cy 50 mg (kg · bw) denně intraperitoneálně a roztok testovaného léčiva byl podáván intraperitoneálně [125 a 250 mg (kg · bw)], normální kontrolní skupině a modelové skupině byl podáván stejný objem fyziologického roztoku po dobu 13 po sobě jdoucích dnů, jednou denně. Během experimentu byly pozorovány změny hmotnosti zvířat. 24 hodin po posledním podání byly změřeny a vypočteny indexy sleziny a brzlíku za použití stejné metody jako v 1.4.2.

1.4.4 Dopad na aktivitu IL-2:

① Indukce IL-2 [9]: Přidejte 50 do každé jamky na 96-jamkové destičce s buňkami μl Různé koncentracePolysacharid Cistanche deserticola(konečné koncentrace v pořadí: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5, 125 mg/l, přidat 50 mg/l do kontrolní jamky μl kultivačního média) a 50 μl ConA (konečná koncentrace 5 mg/l), přidat 1 více na jamku × 106 buněk sleziny. Inkubujte v inkubátoru s vlhkostí nasycenou 5 % CO2 při 37 stupních po dobu 24 hodin, centrifugujte 20 minut při 2500 ot./min. a odeberte buněčný supernatant a uložte jej při - 20 stupních pro pohotovostní režim. ② Detekce aktivity IL-2 [9,10]: Základní metoda vychází z literatury [9] a příslušné úpravy jsou provedeny podle literatury [10]. Konvenční příprava suspenze myších thymocytů BALB c, 96jamková buněčná kultivační destička, 1 inokulace na jamku × 106 thymocytů, přičemž se přidá 50 buněk na jamku μl ConA (konečná koncentrace 2,5 mg/l), a poté se přidá připravený IL{{34 }} supernatant 50 μl (přidejte 50 do slepého kontrolního otvoru μl kultivačního roztoku), společně inkubujte 54 hodin, přidejte MTT, pokračujte v inkubaci 4 hodiny, centrifugujte 10 až 15 minut při 1000 r min, odstraňte supernatant, a přidejte DMSO 100 na jamku μl, protřepávejte s mikrooscilátorem po dobu 8 minut a změřte hodnotu A540 nm enzymovým markerem.

1.5 Statistická analýza

Data byla vyjádřena jako průměr a standardní odchylka (x ± s). K porovnání dat byl použit software Microsoft Excel a byl proveden t-test. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2.Výsledky

2.1 Účinek na proliferaci lymfocytů

Jak je vidět z tabulky 1, přídavekPolysacharid Cistanche deserticolado kultivačního média lymfocytů myší sleziny kultivovaných in vitro v koncentraci vyšší než 25 mg/l může významně stimulovat proliferaci lymfocytů, což naznačuje, žePolysacharid Cistanche deserticolasám o sobě má mitotický účinek. Ve stejnou dobu,z tabulky 2 a tabulky 3 lze vidět, že CDPS má významný podpůrný účinek na proliferaci ConA-indukovaných T lymfocytů nebo LPS-indukovaných B lymfocytů.

Tab.1 Vliv naPolysacharid Cistanche deserticolana proliferaci neaktivovaných lymfocytů (x ± s, n =3)

Poznámka: ve srovnání s kontrolní skupinou,＊P <0.05. 

Tab.2 Vliv naPolysacharid Cistanche deserticolana proliferaci Tlymfocytů indukovanou ConA (x ± s, n =3)

Poznámka: ve srovnání se skupinou ConA,＊P <0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Vliv naPolysacharid Cistanche deserticolana proliferaci Blymfocytů indukovanou LPS (x ± s, n =3)

Poznámka: ve srovnání se skupinou LPS,＊P <0.05 , ＊＊P <0.01. 

2.2 Účinek na hmotnost imunitních orgánů u normálních myší

Jak je vidět z tabulky 4,Polysacharid Cistanche deserticolamůže významně zvýšit index sleziny normálních mladých potkanů ​​BALB c, ale nemá žádný účinek na brzlík.

2.3 Účinek na hmotnost imunitního orgánu u imunokompromitovaných myší

Z tabulky 5,lze vidět, že indexy sleziny a brzlíku u myší ve skupině s imunosupresivy Cy jsou nižší než v kontrolní skupině aPolysacharid Cistanche deserticola(125, 250 mg/kg) může výrazně zlepšit indexy sleziny a brzlíku.

2.4 Vliv na aktivitu IL-2

Jak je vidět z tabulky 6,kdy dávkaPolysacharid Cistanche deserticoladosahuje 7,82 mg/l, může významně zvýšit uvolňování IL-2 z buněk myší sleziny.

Tab.4 Vliv naPolysacharid Cistanche deserticolana hmotnosti imunitních orgánů u normálních myší (x ± s, n =11)

Poznámka: ve srovnání s kontrolní skupinou,＊＊P <0.01.

Tab.5 Vliv naPolysacharid Cistanche deserticolana váze imunitních orgánů u imunodeprimovaných myší (x ±s, n =12)

Poznámka: ve srovnání s kontrolní skupinou,## P <0.01;compared with the model group , ＊＊P <0.01.

Tab.6 Vliv naPolysacharid Cistanche deserticolana produkci IL-2 slezinnými lymfocyty u myší (x ±s, n =3)

Poznámka: ve srovnání s kontrolní skupinou,＊＊P <0.01. 

3. Diskuse

ConA a LPS-indukovaná proliferace slezinných lymfocytů u myší je in vitro experiment k detekci funkce T a B lymfocytů a je důležitým indikátorem specifické imunitní schopnosti. Studie ukázaly, že při konečné koncentraciPolysacharid Cistanche deserticolaje nad 25 mg/l, může významně podporovat proliferaci lymfocytů, což naznačuje, že má určitý mitotický účinek. V přítomnosti mitogenu (ConA nebo LPS), menší dávkaPolysacharid Cistanche deserticolamůže zlepšit imunitu těla, vykazovat významnou proliferační aktivitu. Víme, že ConA a LPS indukují hlavně proliferaci T lymfocytů, respektive B lymfocytů. Studie ukázalyZdravotní přínosy cistanche prášku: Polysacharid Cistanche deserticolamůže podporovat proliferaci T lymfocytů i proliferaci B lymfocytů, ale jeho proliferační účinek na B lymfocyty je výrazně silnější než na T lymfocyty.

Zdravotní přínosy prášku Cistanche – Improve imunita

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Improve Immunity

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Brzlík a slezina jsou hlavními imunitními orgány u zvířat. Imunitní buňky ve slezině jsou převážně zralé B lymfocyty, zatímco brzlík jsou převážně nezralé T lymfocyty. Indexy brzlíku a sleziny mohou odrážet vývoj imunitních orgánů a funkční stav imunitních buněk. Intraperitoneální injekce polysacharidu Cistanche deserticola může významně zvýšit index sleziny normálních a imunosuprimovaných myší a má významný antagonistický účinek na atrofii thymu vyvolanou Cy u myší.Polysacharid Cistanche deserticolanemá žádný významný vliv na thymický index u normálních zvířat, což je v souladu s výsledky in vitro experimentů, ve kterýchPolysacharid Cistanche deserticolapodporuje proliferaci B lymfocytů spíše než T lymfocytů.

Cdoplněk istanche v mé blízkosti – zlepšitimunita

IL-2 je cytokin produkovaný T lymfocyty od G1 fáze buněčného cyklu po S fázi. Je to hlavní růstový faktor T buněk, který působí jako autokrinní růstový faktor. Kromě toho může IL-2 podporovat proliferaci B buněk a syntézu protilátek [11,12].Polysacharid Cistanche deserticolapodporuje uvolňování IL-2 z lymfocytů, s čímž samozřejmě souvisíPolysacharid Cistanche deserticolapodporující proliferaci slezinných lymfocytů.

Lékařský výzkum ukazuje, že Cistanche obsahuje polysacharidy,Echinakosidy a akteosidy, který dokáže aktivovat lymfocyty a immzlepšit imunitu tělay; Funkční složky cystanche Phenylethanoid Glycosides mají významný vliv na obnovu buněk po poškození gama zářením 60 Co a také mohou zlepšit imunitní funkce proti poškození zářením.Užíváním doplňku Cistanche deserticola denně lze dosáhnout účinku zlepšení imunity.

CIstanche doplněk v mém okolí — Zlepšete imunitu

odkaz

[1] Schepetkin IA,Quinn MT .Botanické polysacharidy:Imunomodulační a terapeutický potenciál makrofágů [J]. Int Immunopharmacol, 2006, 6(3):317-333.

[2] He Wei, Shu Xiaofen, Zong Guizhen a kol. Studie o účincích Cistanche deserticola na tonizaci ledvin a podporu jangu před a po zpracování [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 1996, 21 (9): 534-537

[3] Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan a kol. Makrofágová aktivace polysacharidů Cistanche deserticola[J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2009, 25 (6): 421-424

[4] Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lv Zhiliang. Imunologická aktivita a mechanismus polysacharidu Cistanche deserticola [J]. Journal of Zhejiang University (Medical Edition), 2002, 31 (4): 284-287

[5] Xu Shuyun, Bian Rulian, Chen Xiu. Farmakologická experimentální metodika [M]. 3. vydání, Beijing: People's Health Publishing House, 2002, 1427-1428

[6] Zhang Xu, Zhang Guorong, Che Wei a kol. Vliv kolagenového polypeptidového chelátu chrómu (Ⅲ) na imunitu diabetických myší [J]. Chinese Journal of Experimental Animals, 2008, 16 (1): 10-14

[7] Chen Qi. Farmakologická výzkumná metodologie tradiční čínské medicíny [M]. První vydání. Peking: Nakladatelství People's Health, 1993:779

[8] Guo Jing, Xu Jianning, Wang Quankai a kol. Vliv extraktu ze sójových bobů (CKBN) na imunitní funkci u imunokompromitovaných myší [J]. Chinese Journal of Comparative Medicine, 2008, 18 (12): 45-49

[9] Xu Shuyun, Bian Rulian, Chen Xiu. Farmakologická experimentální metodika [M]. 3. vydání, Beijing: People's Health Publishing House, 2002: 1440-1441

[10] Zhou Daohong, Shen Yuanshan, Zhao Manrui. Nová metoda pro stanovení transformace lymfocytů a aktivity myšího interleukinu 2 - MTT kolorimetrická analýza [J]. Chinese Journal of Immunology, 1986, 2 (1): 39-43

[11] Wang MQ, Guilbert LJ, Li J, et al. Patentovaný extrakt ze severoamerického ženšenu (Panax quiquefolium) zvyšuje produkci IL-2 a IFN- v buňkách myší sleziny indukovanou Con-A [J]. Int Immunopharmacol, 2002, 4(2):311-315.

[12] Tingjun H., Rongliang Z. Podpora polysacharidu sophora subprosrate na produkci oxidu dusnatého a interleukinu-2 v myších T lymfocytech: implikovaný Ca 2 plus a protein kináza C [J] .Int Immunopharmacol, 2004, 4(1):109-118.