Stanovení obsahu pěti sloučenin ve spermatu Rehmanniae a stanovení jeho HPLC otisku

Tabulka 3 Výsledky testu obnovy (n=6)

2.4 Stanovení vzorku

Šest odebraných šarží Rehmannia bylo připraveno podle metody podle "2.2.2" a odebrány vzorky a stanoveny podle chromatografických podmínek podle "2.1". Výsledky stanovení obsahu jsou uvedeny v tabulce 4. Výsledky ukazují, že mezi pěti složkami je obsah glykosidu D rehmanie nejvyšší, v rozmezí od 0,460 % do {{1 0}}.730 %; obsah glykosidu leonuri je druhý, pohybuje se od 0,100 % do 0,270 % a obsah obou složek ve vzorcích z různých produkčních oblastí se významně neliší. Ve vzorku SX1, s výjimkou echinakosidu, jsou obsahy ostatních čtyř složek významně vyšší než u jiných šarží vzorků; obsahy echinakosidu, cistanchesidu A a verbascosidu v Rehmannia glutinosa z různých produkčních oblastí jsou zcela odlišné a nepravidelné.

BYLINA CISTANCHE SDOBRÁ KVALITNÍ KONZISTENCE

2.5 Stanovení a vyhodnocení podobnosti HPLC otisku Rehmannia glutinosa

Chromatogramy a data stanovení vícesložkového obsahu v Rehmannia glutinosa byly importovány do softwaru „Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System (2012 Edition)“ a byl vybrán chromatogram testovacího vzorku SX1 jako referenční spektrum. Šířka časového okna byla nastavena na 0.10 min a ke generování superponovaných spekter a referenčních spekter byla použita metoda mediánu. Bylo identifikováno celkem 23 společných píku (viz obrázek 3). Podobnost mezi otisky prstů vzorku Rehmannia glutinosa a reference byla 0,904~0,950, což ukazuje, že vzorky Rehmannia glutinosa z různých produkčních oblastí a mezi syrovou Rehmannia glutinosa a vařenou Rehmannia glutinosa byly podobné a měly dobrou kvalitu konzistence.

Tabulka 4 Výsledky stanovení obsahu 5 složek ve spermatu Rehmanniae/%

13. rehmaniosid D; 17. leonurid; 19. echinakosid; 20. kastanosid A; 21. akteosid

Obrázek 3 Překrývající se HPLC chromatogramy 6 šarží Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) a referenční (R)

3 Diskuse

3.1 Výběr chromatografických podmínek

V této studii byly zkoumány čtyři systémy mobilní fáze, acetonitril-voda, acetonitril-0,1% roztok kyseliny mravenčí, methanol-voda a methanol-0,1% roztok kyseliny mravenčí. Výsledky ukázaly, že pět složek mělo dobré separační účinky v acetonitrilovém systému; ve srovnání se systémem mobilní fáze acetonitril-voda byly píky rehmannia glutinosa a glykosidů mateřídoušky v mobilní fázi acetonitrilu-0.1% roztok kyseliny mravenčí užší a měly dobrou symetrii píku. Současně se obsah složek velmi liší v důsledku různé absorpce ultrafialového záření pěti složek. Aby bylo možné přesněji určit obsah každé složky a zajistit, aby intenzita absorpce pěti složek byla rovnoměrně rozložena na stejném chromatogramu, ultrafialová absorpceglykosid rehmanie Danalyzoval se glykosid mateřídoušky, echinakosid, cistanchesid A a verbascosid a zvolilo se stanovení proměnnou vlnovou délkou, tj. 0-24 min, první separovaný glykosid rehmanie byl stanoven při 203 nm a 24-40 min, separovaný echinakosid, cistanchesid A a verbascosid byly stanoveny při 330 nm. Kromě toho tato studie také zkoumala extrakční účinky methanolu, 70% roztoku methanolu, 50% roztoku methanolu a 50% roztoku acetonitrilu jako extrakčních rozpouštědel. Výsledky ukázaly, že 70% roztok methanolu jako extrakční rozpouštědlo může lépe rozpustit testované složky a extrahovaný vzorek má méně nečistot. Proto tato studie vybrala jako extrakční rozpouštědlo 70% methanol, jako systém mobilní fáze acetonitril-0,1% roztok kyseliny mravenčí a ke stanovení obsahu pěti složek v Rehmannia použila proměnnou vlnovou délku.

3.2 Analýza výsledků stanovení vzorku

Z výsledků stanovení je patrné, že po napaření, až na mírné zvýšení obsahu echinakosidu, došlo k výraznému snížení obsahů dalších čtyř složek, zejména obsahu leonurisidu a cistanchesidu A; obsah glykosidu rehmanie D a cistanchesidu A u Rehmannia glutinosa ze stejné výrobní oblasti byl mírně odlišný a obsah leonurisidu, echinakosidu a verbascosidu byl výrazně odlišný; obsah echinakosidu v Rehmannia glutinosa z produkční oblasti Henan byl významně vyšší než ve vzorcích z produkční oblasti Shanxi a obsah ostatních čtyř složek byl mírně odlišný. Současně podle HPLC otisku stanoveného v této studii byla podobnost mezi 6 šaržemi vzorků Rehmannia a kontrolním otiskem 0.904~0.950, což naznačuje, že hlavní chemická látka složky 6 šarží vzorků Rehmannia před a po zpracování byly vysoce konzistentní.

Stručně řečeno, metoda stanovení obsahu a HPLC fingerprint stanovené v této studii jsou přesné, spolehlivé a mají dobrou specificitu. Mohou být použity k charakterizaci změn složek a stupně zpracování Rehmannia glutinosa před a po zpracování a poskytují technickou podporu pro kontrolu kvality Rehmannia glutinosa. Tato studie má však nevýhody malých šarží vzorků a neúplného pokrytí výrobních oblastí, což vyžaduje další analýzu a ověření.

Reference

[1] Výbor pro čínský lékopis. Lékopis Čínské lidové republiky: svazek 1 [S]. Peking: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Výzkum historického vývoje názvů zpracovaných Rehmannia glutinosa a studium její účinnosti [J]. Čínská patentová medicína, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe a kol. Pokrok ve výzkumu Rehmannia glutinosa a analýza predikce jejích kvalitativních markerů [J]. Čínská patentová medicína, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi a kol. Pokrok ve výzkumu chemického složení a farmakologických účinků Rehmannia glutinosa [J]. Chinese Herbal Medicine, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Pokrok ve výzkumu chemických složek a farmakologických účinků Rehmannia glutinosa［J］.

Drug Evaluation Research, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei a kol. Analýza chemických složek čerstvé Rehmannia glutinosa, syrové Rehmannia glutinosa a vařené Rehmannia glutinosa pomocí UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Čínská patentová medicína, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei a kol. Rozpoznávání vzorů otisků prstů a stanovení vícesložkového obsahu různých zpracovaných produktů Rehmannia glutinosa［J］. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi a kol. Pokrok ve výzkumu chemických složek a farmakologických účinků Rehmannia glutinosa［J］. Čínská bylinná medicína, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian a kol. Srovnávací studie chemických složek Rehmannia glutinosa před a po zpracování UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Nová čínská léčiva a klinická farmakologie, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan a kol. Dynamická akumulace nukleosidových a aminokyselinových složek v Rehmannia glutinosa na základě UPLC-TQ-MS［J］. Čínská bylinná medicína, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yujiao. Studie o technologii zpracování a mechanismu "devět napařování a devět expozice" Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Univerzita Shandong, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan a kol. HPLC Současné stanovení obsahu osmi složek v Rehmannia glutinosa a jejích různých zpracovaných produktech pomocí UPLC fingerprint analýzy a multiindexového stanovení obsahu složek [J]. Chinese Medicinal Materials, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Hodnocení kvality Rehmannia glutinosa na základě otisku prstu UPLC a stanovení obsahu víceindexových složek [J]. Chinese Medicinal Materials, 2021, 44 (4): 917-923.