Srovnání jednorázového a opakovaného dávkování protizánětlivých mezenchymálních stromálních buněk lidské pupeční šňůry u myšího modelu polymikrobiální sepse
Jul 07, 2023
souhrn
Mezenchymální stromální buňky (MSC) zlepšují preklinickou sepsi a akutní poškození ledvin (SAAKI) spojené se sepsí, ale klinické studie jednorázových MSC neprokázaly robustní účinnost. Tato studie zkoumala imunomodulační účinky nového produktu MSC (CD362-vybrané lidské MSC odvozené z pupečníkové šňůry [hUC-MSC]) na myších modelech endotoxémie a polymikrobiální sepse. Zpočátku myši dostávaly intraperitoneální (ip) lipopolysacharid (LPS) a následně jednotlivé ip dávky hUC-MSC nebo vehikula. Dále myši podstoupily ligaci a punkci slepého střeva (CLP), po níž následovaly intravenózní (iv) dávky hUC-MSC ve 4 h nebo 4 a 28 h. Analýzy zahrnovaly sérové/plazmatické testy biochemických indexů, zánětlivých mediátorů a AKI biomarkeru NGAL; vícebarevná průtoková cytometrie peritoneálních makrofágů (LPS) a subpopulací intrarenálních imunitních buněk (CLP) a histologie/imunohistochemie ledvin (CLP). 72 hodin po injekcích LPS snížily hUC-MSC sérové zánětlivé mediátory a poměr peritoneálních makrofágů M1/M2. Opakované, nikoli však jednotlivé dávky hUC-MSC podávané 48 hodin po CLP, vedly k nižším sérovým koncentracím zánětlivých mediátorů, nižšímu NGAL v plazmě a zvrácení deplece intrarenálních subpopulací T buněk a myeloidních buněk související se sepsí. Hierarchická shluková analýza všech 48-h sérových/plazmatických analytů prokázala částečné společné shlukování zvířat s opakovanou dávkou hUC-MSC CLP se skupinou Sham, ale neodhalila zřetelnou známku odpovědi na terapii. Dospělo se k závěru, že opakované dávky CD362-vybraných hUC-MSC jsou nutné k modulaci systémových a lokálních imunitních/zánětlivých příhod u polymikrobiální sepse a SA-AKI. Interindividuální variabilita a nedostatečný účinek podání jedné dávky MSC v modelu CLP jsou v souladu s dosavadními pozorováními z raných fází klinických studií.
Klíčová slova
Akutní poškození ledvin · Mezenchymální stromální buňka · Regenerativní medicína · Sepse · Zánět · Buněčná terapie
Kliknutím sem zakoupíte doplněk Cistanche
Úvod
Sepse je charakterizována život ohrožující orgánovou dysfunkcí v důsledku dysregulované odpovědi hostitele na infekci způsobenou bakteriálními, plísňovými, virovými a parazitickými patogeny [1]. Každý rok postihne sepse téměř 50 milionů lidí na celém světě, což často vede k závažným systémovým následkům a poškození orgánů, včetně akutního poškození ledvin (AKI), což má za následek přibližně 11 milionů úmrtí [2, 3]. Mezenchymální stromální buňky (MSC) jsou multipotentní buňky s rozsáhlými imunomodulačními vlastnostmi, které lze izolovat z různých tkání [4]. Nyní je dobře známo, že MSC nabízí potenciální chorobu modulující terapii sepse a AKI související se sepsí (SA-AKI) [5, 6]. Několik nedávných studií využívajících modely ligace a punkce slepého střeva u myší a potkanů (CLP), lipopolysacharidů (LPS) nebo fekální peritonitidy ukázalo, že systémové podávání MSC má potenciál snížit zánět, působit proti bakteriální infekci a zlepšit hojení poraněné tkáně. sepse [7–11], včetně SA-AKI, [10, 12–15] modulací rovnováhy mezi prozánětlivými a protizánětlivými stavy.
Nedávná studie u zdravých dospělých potvrdila, že preventivní intravenózní (iv) léčba 4 × 106 MSC/kg vyvolává časné imunomodulační účinky na odpověď hostitele na LPS [16]. Kromě toho podávání alogenních MSC pacientům se septickým šokem (NCT01849237, NCT02421484 a NCT02328612) a syndromem akutní respirační tísně související se sepsí (NCT01775774) prokázalo dobrou bezpečnost a snášenlivost v klinických studiích fáze 1 [16–19]. Navzdory těmto povzbudivým výsledkům Galstyan et al. také uvedli, že jediná dávka iv MSC nezabránila úmrtí na orgánovou dysfunkci související se sepsí, což zvyšuje možnost, že k získání významného klinického přínosu mohou být nutné další dávky [17]. Nedávná studie fáze 2 bez sepse (NCT01602328), ve které byly jednotlivé dávky alogenního MSC podávány intra-vortálně pacientům se sterilním AKI po operaci kardiopulmonálního by-passu, také neprokázala příznivý účinek na orgánovou dysfunkci a přežití pacientů navzdory slibnému výsledky preklinických studií a studií fáze 1 [20]. Zda by opakované dávkování během časného průběhu sepse a jiných akutních zánětlivých syndromů mohlo zvýšit nebo rozšířit účinky MSC na modulaci onemocnění, zůstává na preklinické a translační úrovni relativně nedostatečně prozkoumáno. Kromě toho neúplná znalost mechanismu účinku, dávkové odpovědi a optimálních klinických ukazatelů pro podávání MSC při sepsi omezuje potenciál pro navrhování úspěšných studií [5, 21, 22].
V této studii jsme provedli preklinické zkoumání protizánětlivých účinků CD362-selektovaných lidských MSC derivovaných z pupečníkové šňůry (hUC-MSC) na myších modelech sepse. Tento hUC-MSC se selektovaným povrchovým markerem je novým terapeutickým produktem, který prokázal účinnost na potkaních modelech bakteriální pneumonie a sepse při podávání časně po nástupu onemocnění [23, 24]. Jakožto hodnocený léčivý přípravek klinického stupně (IMP) hUC-MSC v současné době prochází fází I/II studie u pacientů se středně těžkým až těžkým syndromem akutní respirační tísně (ARDS) v důsledku COVID-19 (NCT03042143) au pacientů s vícečetnými autoimunitní zánětlivá onemocnění (POLARIZE). Zaměřili jsme se na demonstraci protizánětlivého potenciálu jednotlivých dávek hUC-MSC na myších modelech endotoxemie/polymikrobiální sepse indukované LPS a CLP [25, 26] a na určení, zda druhé podání hUC-MSC během časný průběh onemocnění vedl k větším nebo častějším prospěšným účinkům na systémový zánět a orgánově specifické poškození, příkladem je SA-AKI.
Cistanche tubulosa
Materiály a metody
1. Buňky
Anti-CD362 plus-selektované hUC-MSC byly kultivovány z eticky získané lidské pupečníkové tkáně získané od Tissue Solutions Ltd. (Glasgow, UK). Primární izolace a expanzní kultury CD362 plus hUC-MSC byly provedeny, jak bylo popsáno dříve [19, 23, 27]. Kryokonzervované lahvičky (1 x 107 v 1 ml) anti-CD362 plus -selektovaného hUC-MSC byly rozmraženy a přeneseny do 9 ml fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (PBS). Po analýze živých/mrtvých buněk buď pomocí barviva trypanové modři nebo automatického počítadla buněk (NucleoCounter® NC-200™, Chemometec A/S, Dánsko), byl požadovaný počet buněk peletován pomocí centrifugace při 400×g po dobu 5 minut a buňky byly resuspendovány ve 100 ul sterilního fyziologického roztoku pro intraperitoneální (ip) nebo iv injekci.
2. Postupy se zvířaty
Všechny postupy na zvířatech byly prováděny na základě licence (č. 255/17) Etického výboru pro experimentování na zvířatech, University of Barcelona, a na základě povolení (AE19125/P082 a AE19125/P066) od Úřadu pro regulaci zdravotních produktů, Irsko a byly schváleny od Etického výboru NUI Galway Animal Care Research. Všechny postupy byly prováděny v licencovaných zařízeních pro zvířata na NUI Galway a University of Barcelona.
Pro LPS model endotoxémie byli použiti 10-12 týdenní samci myší C57BL/6 od Charles River Ltd., Kent, UK. Myším bylo ip injikováno 5 ug/g LPS (LPS 0111:B4, katalogové č. L2630, Sigma Aldrich, UK) ve 100 ul sterilního fyziologického roztoku. Myši byly během studie umístěny ve skupinách po 3-5 myších/kleci v individuálně větraných klecích. Jednotlivé ip injekce 2,5 x 105 hUC-MSC nebo stejné objemy vehikula (sterilní fyziologický roztok) byly podávány 4 hodiny po LPS injekcích. Zvířata byla monitorována každé 4 hodiny až do konce studie za použití tabulky pro hodnocení stresu a podpůrných opatření podle předem stanoveného protokolu. Humánní eutanazie byla provedena v definovaném experimentálním koncovém bodě nebo dříve, pokud zvířata překročila předem definovaný práh skóre závažnosti. V době eutanazie byly peritoneální exsudáty shromážděny pro analýzu průtokovou cytometrií opatrným vylovením 5 ml sterilního PBS do a z peritoneální dutiny.
Ligace a punkce slepého střeva (CLP) byla provedena na {{0}} týdenních samcích myší C57BL/6 (Charles River Ltd., UK). Myši dostaly 25-30 min před zákrokem subkutánně buprenorfin {{1{{20}}},1 mg/kg (Richter Pharma AG, Rakousko) a byly anestetizovány 1.{{8 }} procenta isofluranu (s průtokem O2 0,5 l/min) na NUI Galway nebo s Anesketinem (100 mg/ml; Dechra Veterinary Products SLU, Španělsko) a Rampunem (20 mg/ml; Bayer, Německo) na univerzitě v Barceloně. Spodní polovina břicha byla oholena a vyčištěna 4% chlorhexidinem nebo povidon-jódem a naříznuta 1 cm vertikálně podél střední čáry. Slepé střevo bylo externalizováno a distálních 50 procent bylo podvázáno pomocí 4{19}},0 M stehů. Cekální materiál byl uvolněn punkcí „skrz a skrz“ jehlou 21-kalibrace a kapka fekálií byla vytlačena, než bylo slepé střevo znovu zavedeno do peritoneální dutiny a sešitý sval a kůže byly uzavřeny. Falešně operované myši podstoupily identický postup, včetně otevření pobřišnice a obnažení střeva, ale bez podvázání a perforace slepého střeva. Myši dostaly 0,5 ml Gelofusinu (Braun Melsungen AG, Německo) ip instilací před uzavřením rány. Pooperační podpora sestávala z buprenorfinu ředěného podávaného subkutánně (sc) každých 8-12 h až do předem stanovených koncových bodů (48 nebo 72 h pro jednotlivé experimenty). Podání 1 x 106 hUC-MSC nebo ekvivalentních objemů vehikula (sterilní fyziologický roztok) bylo provedeno iv prostřednictvím ocasní žíly 4 hodiny nebo 4 a 28 hodin po CLP. Časté monitorování a podpora byly prováděny podle eticky schváleného protokolu. Humánní eutanazie byla provedena v definovaném experimentálním koncovém bodě nebo dříve, pokud zvířata překročila předem definovaný práh skóre závažnosti.
Buněčné dávky pro dva zvířecí modely použité pro studii byly vybrány na základě předchozích zpráv o protizánětlivých účincích lidských MSC v podobných modelech [9, 13, 14, 28, 29]. Velikosti skupin pro studii LPS byly vybrány empiricky na základě relevantních předchozích zpráv pro tento model [30, 31]. Velikosti skupin pro studii CLP byly určeny pro primární výsledek plazmatického NGAL 24 hodin po operaci. S použitím dat z pilotního experimentu byla vypočtena velikost vzorku 9 zvířat na skupinu, aby poskytla 90% sílu za předpokladu 5% hladiny významnosti a oboustranného testu (http://www.3rs-reduction.co.uk/html /6__výkon_a_ukázka_velikost.html). Pro výběr konečné velikosti skupiny n=10 byla použita očekávaná míra opotřebení 10 procent.
Extrakt z cistanche
3. Odběr vzorků krve a odběr tkání
Vzorky žilní krve do maximálního objemu 20 μl byly přerušovaně odebírány z ocasních a obličejových žil aseptickou technikou pomocí jehel s kalibrem 25-21 a byly odebírány do zkumavek obsahujících heparin (VWR International, Dublin, Irsko). Konečný vzorek krve byl odebrán srdeční punkcí v době eutanazie. Sérum bylo odebráno do mikrozkumavek se sérovým gelem a aktivátorem srážení (Sarstedt, Wexford, Irsko). Vzorky plazmy a séra byly připraveny centrifugací při 10,000×g po dobu 10 minut. Vzorky séra byly skladovány při -80 stupních a následně analyzovány na biochemické parametry NationWide Laboratories (Lancashire, UK). Slezina, plíce, ledviny a játra byly vypreparovány ihned po eutanazii.
4. Imunologické testy
Koncentrace lipokalinu asociovaného s gelatinázou v plazmě (NGAL) byla kvantifikována pomocí vývojové sady myší Lipocalin-2/NGAL Duo-Set ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MI, USA) podle protokolu navrženého výrobcem (podrobnosti v doplňkových metodách ). Pro multiplexní kvantifikaci cytokinů a chemokinů v séru byl použit standardní 23-plexní test myších cytokinů Bio-Plex Pro (Bio-Rad, Accuscience) podle pokynů výrobce. Vzorky byly analyzovány na systému Bioplex 200 multiplex ELISA (BioRad, Accuscience).
5. Semikvantitativní hodnocení řezů ledvinové tkáně
Obarvené řezy ledvin byly analyzovány zaslepeným způsobem pomocí světelné mikroskopie při 40násobném zvětšení za použití mikroskopu s jasným polem Olympus BX43 (Olympus, Centre Valley, PA) a pomocí softwaru IS TCapture (Tucsen Photonics Co., Fujian, Čína). Pro každou ledvinu bylo zachyceno dvacet nepřekrývajících se polí obarveného řezu a pozitivně obarvená oblast byla ohodnocena zaslepeným pozorovatelem na (A) tubulární dilataci, odlitku a nekrózu (PAS) a (B) expresi NGAL [32]. Bodování bylo provedeno na 0-4 semikvantitativní bodovací stupnici (podrobnosti v doplňkových metodách). Průměrné skóre bylo vypočteno pro každou ledvinu a konečné výsledky byly vyjádřeny jako průměr skupiny ± SD.
Cistanche prášek
Diskuse
Sepse a její časté komplikace SA-AKI jsou hlavními výzvami v oblasti veřejného zdraví kvůli přetrvávajícímu nedostatku účinné léčby a neuspokojivým výsledkům z posledních fází klinických studií [2, 3]. Několik nedávných předklinických studií přineslo výsledky naznačující, že MSC z různých zdrojů a jejich produkty mají pozitivní vliv na závažnost onemocnění a přežití v modelech sepse a AKI [7, 8, 11–15]. Nicméně klinický přínos MSC u sepse a SA-AKI zůstává neprokázaný s pouze omezenými údaji dostupnými od lidských pacientů [5]. Dosud klinické studie dokumentovaly, že jednorázová iv infuze MSC v prostředí podávání LPS, sepse a ARDS je bezpečná a proveditelná [16–19], ale zjevně nesnižuje úmrtí na selhání orgánů souvisejících se sepsí [17]. . V této studii jsme porovnávali účinky jednorázového a dvojitého iv podání výrazného lidského MSC terapeutického produktu (CD362- selektovaný hUC-MSC) na myším CLP modelu polymikrobiální sepse. Zpočátku, v souladu s nedávno hlášenými výsledky pro stejný produkt MSC u potkaních modelů bakteriální pneumonie a sepse [23, 24], jsme potvrdili potenciál časného podání hUC-MSC k modulaci LPS-indukovaného systémového zánětu u myší. V myším modelu CLP polymikrobiální sepse však naše výsledky ukázaly, že jednotlivé dávky hUC-MSC podávané iv 4 hodiny po indukci fekální peritonitidy nevykazovaly žádný jasný příznivý účinek na systémový zánět nebo orgánově specifické (renální) poškození tkáně. Naproti tomu podání druhé iv dávky hUC-MSC o 24 hodin později vedlo k četným signálům zmírnění zánětu a poškození ledvin do 48 hodin po nástupu sepse. Navzdory tomu nebyl prokázán přínos pro přežití u režimu s dvojitou dávkou. Naše výsledky zdůrazňují důležitost provádění in vivo studií terapeutických produktů MSC na více modelech a uvádění pozitivních i negativních předklinických výsledků pro lepší informování klinického překladu a návrhu studie. Celkově vzato naše výsledky také poskytují důkaz, že omezený nebo žádný přínos časných režimů s jednorázovou dávkou protizánětlivých MSC přípravků ve studiích sepse může být alespoň částečně překonán opakovaným dávkováním.
V myším modelu LPS jediná časná dávka hUCMSC modulovala systémové hladiny vrozených i adaptivních zánětlivých mediátorů po dobu alespoň 72 hodin, i když bez zjevného účinku na skóre závažnosti a přežití. Fenotypová analýza peritoneálních makrofágů poskytla důkaz, že podávání hUC-MSC bylo spojeno s předpokládaným lokálním imunomodulačním účinkem – vychýlením makrofágů směrem k polarizaci M2, což bylo spojeno s vyřešením zánětlivého poškození a podporou opravy tkáně [29, 35] a je pravděpodobně zprostředkován MSC cross-talk s rezidentními myeloidními buňkami [36]. Nedávné studie skutečně uvádějí, že terapeutická imunomodulace pomocí MSC při sepsi může být závislá na jejich fagocytóze myeloidními buňkami (mononukleárními fagocyty), které pak podléhají alternativní aktivaci vedoucí k produkci IL-10 a dalších parakrinních anti- zánětlivých mediátorů [7, 27, 37]. Ačkoli by bylo zajímavé zjistit, zda jsou výhody takové imunomodulace zesíleny opakovanými dávkami hUC-MSC po podání LPS, usoudili jsme, že experimentální model, který lépe odráží vyvíjející se sepsi, by měl větší klinický význam. S potvrzenou biologickou aktivitou hUC-MSC u myší pomocí podávání LPS byl tedy myší model CLP použit pro charakterizaci protizánětlivých účinků souvisejících s opakovaným dávkováním a kvantifikaci ledvinově specifických účinků hUC-MSC v podmínkách polymikrobiální sepse. a SA-AKI. V našich rukou byl tento model spojen se středně těžkou sepsí (přibližně 70 procent, 50 procent a 40 procent přežití po 48, 96 a 168 hodinách u neléčených zvířat) bez zjevného selhání jater a ledvin. Naše pozorování pro tento model, včetně úmrtnosti a trendů v sérových jaterních parametrech a albuminu, jsou v souladu s velmi komplexním profilováním myšího CLP, které uvádí Li et al. [38], která také dokumentuje sníženou tělesnou teplotu, krevní tlak a srdeční frekvenci během prvních 48 hodin po CLP. Je zajímavé, že zatímco Li a spol. dokumentované zvýšení sérového kreatininu a dusíku močoviny v krvi 8 a 16 hodin po CLP, jejich výsledky naznačují, že tyto renální funkční biomarkery klesly na normální (nebo pod normální) hladiny do 48 hodin – pravděpodobně odrážející vyvíjející se účinky změněného metabolismu/svalové hmoty na tyto biomarkery v průběhu vývoje modelu [38]. V souladu s tím analýza séra/plazmy a tkáně ledvin po 48 hodinách ukázala významný systémový zánět a odpověď na poškození ledvin bez zjevného důkazu ischemického poškození/nekrózy. Tyto posledně uvedené analýzy poskytly nejjasnější důkaz o modulačním účinku režimu dvojité dávky hUCMSC na závažnost polymikrobiální sepse ve srovnání s podáním jedné dávky, které bylo na rozdíl od výsledků nedávno hlášených na modelu CLP u potkanů [24] nerozeznatelné. ze skupiny CLP ošetřené fyziologickým roztokem napříč všemi zkoumanými indexy. Zejména klinicky relevantní biomarker AKI, NGAL, se v tomto modelu ukázal jako cenný diskriminátor závažnosti sepse a léčebného účinku a může být důležitým biomarkerem pro budoucí klinické studie buněčných terapií u sepse a SA-AKI [33, 39 ].
Naše výsledky pro účinek iv MSC na přežití u malých zvířecích modelů sepse jsou v rozporu s některými jinými zprávami [28, 40], ale zejména jsou v souladu s pozorovanými účinky alogenních MSC v klinických studiích na lidech [5, 16– 18, 41]. V tomto ohledu bychom zdůraznili potenciální roli zkreslení publikací – konkrétně selektivního zveřejňování výsledků odrážejících pozitivní účinky – jako důležité hnací síly nerealistických očekávání ohledně účinnosti jednorázových režimů MSC a dalších pokročilých terapií v nejranějších fázích klinického hodnocení. překlad [42]. Sun et al. v nedávné metaanalýze 29 studií na zvířatech účinnosti terapií MSC u sepse skutečně odhalili v těchto preklinických zprávách významnou publikační zaujatost a nedostatek jasnosti ohledně optimální buněčné dávky [43]. Uvádíme však také výrazné pozitivní nálezy, které mohou pomoci posouvat translační cíle pro UC-MSC při sepsi nebo jiných systémových a orgánově specifických zánětlivých onemocněních, jako jsou AKI, jaterní nebo respirační onemocnění. V obou modelech tyto molekulární změny indikují komplexní interakce hUC-MSC s imunitní odpovědí Th1 a Th2. Takové účinky na aktivaci T-efektorových buněk a rovnováhu fenotypu T helper mohou hrát klíčovou roli v modulaci akutní fáze sepse, protože nerozlišující, dysregulovaná aktivace imunitních efektorů vedoucí k vysokým hladinám cirkulujících cytokinů přispívá k multiorgánovému selhání [44]. a v případě T-buněk může být následována rozsáhlou apoptózou a následnými imunitními deficity [45]. Bylo také prokázáno, že podávání MSC může snížit lokalizovaný zánět tkáně regulací cytokinové homeostázy a snížením pohybu imunitních buněk do orgánů [44]. V souladu s tím naše kvantitativní analýza řady populací intrarenálních imunitních buněk 48 hodin po sepsi vyvolané CLP odhalila nedostatky vyvolané sepsí ovlivňující jak vrozené, tak adaptivní efektory, včetně ztráty dvojitě negativních T buněk, které byly nedávno hlášeny. být včasnými respondéry na AKI [46]. Pozoruhodné je, že u zvířat ošetřených dvojitou, ale nikoli jednou dávkou hUC-MSC, byla prokázána reverze deplece intrarenálních imunitních buněk. Vzhledem k tomu, že podobné trendy byly pozorovány také v plicích a slezině, naše výsledky naznačují potenciál pro opakované iv podávání MSC k širokému zlepšení deplece imunitních buněk z nelymfoidních a lymfoidních orgánů – což je aspekt sepse, která je spojena s následnou úmrtností v důsledku sekundární infekce [47, 48]. Na základě dalšího pozorování zvýšené buněčné smrti mezi intrarenálními CD45 plus buňkami u neléčených CLP zvířat je pravděpodobné, že to odráží přímé nebo nepřímé účinky hUC-MSC na snížení mitochondriální dysfunkce a proapoptotické signalizace [49–51]. K úplnému objasnění mechanismů, kterými systémové podávání MSC zachovává počet myeloidních a/nebo lymfoidních buněk při sepsi, a ke stanovení, zda je lze terapeuticky využít, budou nicméně zapotřebí cílenější experimenty.
Kapsle Cistanche
Vzhledem k inherentní variabilitě, kterou my a další pozorujeme u jednotlivých výsledků pro myší model CLP, jsme předpokládali, že hierarchická shluková analýza kvantitativních hodnot pro řadu cirkulujících mediátorů souvisejících se zánětem po 48 hodinách by pomohla lépe definovat charakteristický „podpis respondenta“ mezi zvířaty léčenými MSC. Ačkoli se 60 procent ze skupiny s dvojitou dávkou seskupilo do vzoru, který je odděloval od většiny skupin s jednou dávkou a neléčených skupin a bylo blíže skupině falešné, nebylo možné identifikovat žádný velmi jasný multianalytický profil modulace onemocnění. Přístup analýzy hlavních složek (PCA) přinesl podobný závěr (data nejsou uvedena). Mělo by být uznáno, že nebylo možné získat údaje od zvířat, která nepřežila do 48 hodin, a je možné, že analýzy v jednom nebo více dřívějších časových bodech by mohly poskytnout výraznější oddělení respondentů/nereagujících. Tato analýza nicméně zdůrazňuje složitost interindividuálních variací, která je vlastní zvířecím modelům sepse a buněčných terapií, i když je věnována velká pozornost zásadám dobrého experimentálního designu [52, 53], a která odráží podobné výzvy, kterým čelíme při klinické aplikaci nové terapie sepse [18, 20, 41, 54, 55].
Je třeba uznat některá omezení studie. V první řadě jsme se zaměřili na zkoumání in vivo účinků CD362-vybraného hUC-MSC, protože tento buněčný produkt prochází klinickými zkouškami pro jiná zánětlivá onemocnění včetně ARDS souvisejícího s COVID-19-. Tento design studie zabránil získání dalšího náhledu na srovnávací účinky testovaného buněčného produktu při sepsi a SA-AKI s účinky neselektovaného hUC-MSC nebo s MSC odvozeným z kostní dřeně nebo jiných tkání. Za druhé, protože použité dávky buněk byly zvoleny na základě předchozích studií protizánětlivých účinků lidských MSC u myší, není možné určit, zda vícenásobné podávání vyšších nebo nižších počtů buněk poskytuje větší přínos. A konečně, protože velikosti skupin pro experimenty s modelem CLP byly zaměřeny na účinky hUC-MSC na systémový zánětlivý biomarker závažnosti sepse/SA-AKI, je možné, že větší velikosti skupin by jasněji definovaly účinky opakovaných dávek na přežití. I když tyto problémy dále zdůrazňují potřebu sekvenčních preklinických experimentů, které se co nejvíce přidržují klíčových parametrů požadovaných pro optimální návrh klinické studie, výsledky, které zde uvádíme, podporují pokračující zaměření na vícedávkové režimy protizánětlivých MSC při sepsi a SA-AKI.
Reference
1. Singer, M., Deutschman, CS, Seymour, CW, Shankar-Hari, M., Annane, D., Bauer, M., Bellomo, R., Bernard, GR, Chiche, JD, Coopersmith, CM, Hotchkiss , RS, Levy, MM, Marshall, JC, Martin, GS, Opal, SM, Rubenfeld, GD, van der Poll, T., Vincent, JL, & Angus, DC (2016). Třetí mezinárodní konsensuální definice pro sepsi a septický šok (sepse-3). The Journal of the American Medical Association, 315 (8), 801-810. https://doi.org/10.1001/jama.2016.0287
2. Hoste, EA, Bagshaw, SM, Bellomo, R., Cely, CM, Colman, R., Cruz, DN, Edipidis, K., Forni, LG, Gomersall, CD, Govil, D., Honore, PM, Joannes-Boyau, O., Joannidis, M., Korhonen, AM, Lavrentieva, A., Mehta, RL, Palevsky, P., Roessler, E., Ronco, C., et al. (2015). Epidemiologie akutního poškození ledvin u kriticky nemocných pacientů: Mezinárodní studie AKI-EPI. Intenzivní medicína, 41(8), 1411–1423. https://doi.org/ 10.1007/s00134-015-3934-7
3. Rudd, KE, Johnson, SC, Agesa, KM, Shackelford, KA, Tsoi, D., Kievlan, DR, Colombara, DV, Ikuta, KS, Kissoon, N., Finfer, S., Fleischmann-Struzek, C Machado, FR, Reinhart, KK, Rowan, K., Seymour, CW, Watson, RS, West, TE, Marinho, F., Hay, SI, a kol. (2020). Globální, regionální a národní výskyt a úmrtnost sepse, 1990-2017: Analýza globální zátěže studiem onemocnění. Lancet, 395(10219), 200–211. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(19)32989-7
4. Arutyunyan, I., Elchaninov, A., Makarov, A., & Fatkhudinov, T. (2016). Pupečník jako perspektivní zdroj pro terapii založenou na mezenchymálních kmenových buňkách. Stem Cells International, 2016, 6901286. https://doi.org/10.1155/2016/6901286
5. Fazekas, B., & Grifn, MD (2020). Terapie akutního poškození ledvin na bázi mezenchymálních stromálních buněk: Pokrok v posledním desetiletí. Kidney International, 97(6), 1130–1140. https://doi.org/10. 1016/j.kint.2019.12.019
6. Hickson, LJ, Herrmann, SM, McNicholas, BA a Grifn, MD (2021). Pokrok směrem ke klinické aplikaci mezenchymálních stromálních buněk a dalších regeneračních terapií modulujících onemocnění: Příklady z oblasti nefrologie. Ledviny360, 2(3), 542–557. https://doi.org/10.34067/kid.0005692020
7. Weiss, ARR, Lee, O., Eggenhofer, E., Geissler, E., Korevaar, SS, Soeder, Y., Schlitt, HJ, Geissler, EK, Hoogduijn, MJ, & Dahlke, MH (2020). Diferenciální účinky teplem inaktivovaného, sekretom-deficientního msc a metabolicky aktivního msc při sepsi a alogenní transplantaci srdce. Kmenové buňky, 38(6), 797–807. https://doi.org/10.1002/stem.3165
8. Jerkic, M., Gagnon, S., Rabani, R., Ward-Able, T., Masterson, C., Otulakowski, G., Curley, GF, Marshall, J., Kavanagh, BP, & Lafey, JG (2020). Lidské mezenchymální stromální buňky z pupečníku částečně zmírňují systémovou sepsi tím, že zvyšují zabíjení peritoneálních makrofágů prostřednictvím indukce hemoxygenázy-1 u potkanů. Anesteziologie, 132(1), 140–154. https://doi.org/10.1097/ ALN.0000000000003018
9. Wu, KH, Wu, HP, Chao, WR, Lo, WY, Tseng, PC, Lee, CJ, Peng, CT, Lee, MS, & Chao, YH (2016). Exprese signalizace Toll-like receptoru 4 v časové řadě u septických myší léčených mezenchymálními kmenovými buňkami. Šok, 45(6), 634–640. https://doi. org/10.1097/SHK.0000000000000546
10. Chang, CL, Leu, S., Sung, HC, Zhen, YY, Cho, CL, Chen, A., Tsai, TH, Chung, SY, Chai, HT, Sun, CK, Yen, CH a Yip , HK (2012). Vliv apoptotických mezenchymálních kmenových buněk odvozených z adipózní tkáně na zmírnění poškození orgánů a snížení mortality u syndromu sepse u potkanů vyvolaného punkcí slepého střeva a ligací. Journal of Translational Medicine, 10, 244. https://doi. org/10.1186/1479-5876-10-244
11. Hall, SR, Tsoyi, K., Ith, B., Padera Jr., RF, Lederer, JA, Wang, Z., Liu, X., & Perrella, MA (2013). Mezenchymální stromální buňky zlepšují přežití během sepse v nepřítomnosti hemoxygenázy-1: Význam neutrofilů. Kmenové buňky, 31(2), 397–407. https://doi.org/10.1002/stem.1270
12. Zhang, G., Zou, X., Huang, Y., Wang, F., Miao, S., Liu, G., Chen, M., & Zhu, Y. (2016). Extracelulární vezikuly odvozené z mezenchymálních stromálních buněk chrání před akutním poškozením ledvin prostřednictvím antioxidace zvýšením aktivace nrf2/are u potkanů. Výzkum ledvin a krevního tlaku, 41 (2), 119–128. https://doi.org/10. 1159/000443413
13. Luo, CJ, Zhang, FJ, Zhang, L., Geng, YQ, Li, QG, Hong, Q., Fu, B., Zhu, F., Cui, SY, Feng, Z., Sun, XF & Chen, XM (2014). Mezenchymální kmenové buňky zlepšují akutní poškození ledvin u myší spojené se sepsí. Šok, 41(2), 123–129. https://doi. org/10.1097/SHK.0000000000000080
14. Condor, JM, Rodrigues, CE, Sousa Moreira, R., Canale, D., Volpini, RA, Shimizu, MH, Camara, NO, Noronha Ide, L., & Andrade, L. (2016). Léčba mezenchymálními kmenovými buňkami získanými z rosolu lidského Whartona zmírňuje poškození ledvin vyvolané sepsí, poškození jater a endoteliální dysfunkci. Stem Cells Translational Medicine, 5(8), 1048–1057. https://doi.org/10.5966/sctm. 2015-0138
15. Zullo, JA, Nadel, EP, Rabadi, MM, Baskind, MJ, Rajdev, MA, Demaree, CM, Vasko, R., Chugh, SS, Lamba, R., Goligorsky, MS, & Ratliff, BB (2015 ). Sekretom endoteliálních progenitorových buněk zalitých do hydrogelu a mezenchymálních kmenových buněk instruuje polarizaci makrofágů při endotoxémii. Stem Cells Translational Medicine, 4(7), 852–861. https://doi.org/10. 5966/sctm.{8}}
16. Perlee, D., van Vught, LA, Scicluna, BP, Maag, A., Lutter, R., Kemper, EM, van 't Veer, C., Punchard, MA, Gonzalez, J., Richard, MP , Dalemans, W., Lombardo, E., de Vos, AF, & van der Poll, T. (2018). Intravenózní infuze lidských tukových mezenchymálních kmenových buněk modifikuje reakci hostitele na lipopolysacharid u lidí: Randomizovaná, jednoduše zaslepená, placebem kontrolovaná studie s paralelními skupinami. Kmenové buňky, 36(11), 1778–1788. https://doi.org/10.1002/stem.2891
17. Gennadiy Galstyan, PM, Parovichnikova, E., Kuzmina, L., Troitskaya, V., Gemdzhian, E., & Savchenko, V. (2018). Výsledky jednocentrové pilotní randomizované ruské klinické studie mezenchymálních stromálních buněk u těžce neutropenických pacientů se septickým šokem (RUMCESS). International Journal Blood Research and Disorders, 5(1), 33. https://doi.org/10.23937/2469-5696/1410033
18. McIntyre, LA, Stewart, DJ, Mei, SHJ, Courtman, D., Watpool, I., Granton, J., Marshall, J., Dos Santos, C., Walley, KR, Winston, BW, Schlosser, K., Fergusson, DA, & Canadian Critical Care Trials Group, & Canadian Critical Care Translational Biology Group. (2018). Buněčná imunoterapie pro septický šok. Fáze I klinické studie. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 337–347. https://doi.org/10. 1164/rccm.{8}}OC
19. Matthay, MA, Calfee, CS, Zhuo, H., Thompson, BT, Wilson, JG, Levitt, JE, Rogers, AJ, Gotts, JE, Wiener-Kronish, JP, Bajwa, EK, Donahoe, MP, McVerry , BJ, Ortiz, LA, Exline, M., Christman, JW, Abbott, J., Delucchi, KL, Caballero, L., McMillan, M., et al. (2019). Léčba alogenními mezenchymálními stromálními buňkami u středně těžkého až těžkého syndromu akutní respirační tísně (studie START): Randomizovaná bezpečnostní studie fáze 2a. The Lancet Respiratory Medicine, 7(2), 154–162. https://doi.org/10. 1016/S2213-2600(18)30418-1
20. Swaminathan, M., Staford-Smith, M., Chertow, GM, Warnock, DG, Paragamian, V., Brenner, RM, Lellouche, F., FoxRobichaud, A., Atta, MG, Melby, S., Mehta, RL, Wald, R., Verma, S., Mazer, CD, & vyšetřovatelé, A.-A. (2018). Alogenní mezenchymální kmenové buňky pro léčbu AKI po kardiochirurgických operacích. Journal of the American Society of Nephrology, 29 (1), 260–267. https://doi.org/10.1681/ASN.2016101150
21. Gotts, JE a Matthay, MA (2018). Buněčná terapie u sepse. O krok blíž. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197 (3), 280–281. https://doi.org/10.1164/rccm. 201710-2068ED
22. Griffin, MD, & Swaminathan, S. (2020). Úvodník: Inovativní biologika a léky zaměřené na zánět ledvin. Frontiers in Pharmacology, 11, 38. https://doi.org/10.3389/fphar.2020.00038
23. Horie, S., Masterson, C., Brady, J., Loftus, P., Horan, E., O'Flynn, L., Elliman, S., Barry, F., O'Brien, T. , Lafey, JG, & O'Toole, D. (2020). CD362(plus) mezenchymální stromální buňky derivované z pupečníkové šňůry např. coli pneumonie: Vliv dávkovacího režimu, pasáže, kryokonzervace a antibiotické terapie. Stem Cell Research & Therapy, 11(1), 116. https://doi.org/10.1186/s13287-020-01624-8
24. Gonzalez, H., Keane, C., Masterson, CH, Horie, S., Elliman, SJ, Higgins, BD, Scully, M., Lafey, JG, & O'Toole, D. (2020). CD362(plus) mezenchymální stromální buňky odvozené z pupečníkové šňůry zeslabují polymikrobiální sepsi vyvolanou podvázáním a punkcí slepého střeva. International Journal of Molecular Sciences, 21(21). https://doi.org/10.3390/ijms21218270
25. Lewis, AJ, Seymour, CW, & Rosengart, MR (2016). Současné myší modely sepse. Chirurgické infekce, 17(4), 385–393. https://doi.org/10.1089/sur.2016.021
26. Remick, DG, & Ward, PA (2005). Hodnocení endotoxinových modelů pro studium sepse. Shock, 24 (Suppl 1), 7-11. https://doi.org/10.1097/01.shk.0000191384.34066.85
27. de Witte, SFH, Luk, F., Sierra Parraga, JM, Gargesha, M., Merino, A., Korevaar, SS, Shankar, AS, O'Flynn, L., Elliman, SJ, Roy, D. , Betjes, MGH, Newsome, PN, Baan, CC a Hoogduijn, MJ (2018). Imunomodulace terapeutickými mezenchymálními stromálními buňkami (MSC) je spouštěna fagocytózou msc monocytárními buňkami. Kmenové buňky, 36(4), 602–615. https://doi.org/10.1002/stem.2779
28. Zhao, X., Liu, D., Gong, W., Zhao, G., Liu, L., Yang, L., & Hou, Y. (2014). Ligandy Toll-like receptoru 3, poly(I:C), zlepšují imunosupresivní funkci a terapeutický účinek mezenchymálních kmenových buněk na sepsi prostřednictvím inhibice mir-143. Kmenové buňky, 32(2), 521–533. https://doi.org/10.1002/stem.1543
29. Nemeth, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, PS, Mayer, B., Parmelee, A., Doi, K., Robey, PG, Leelahavanichkul, K., Koller, BH, Brown, JM, Hu, X., Jelínek, I., Star, RA, & Mezey, E. (2009). Stromální buňky kostní dřeně zmírňují sepsi prostřednictvím prostaglandinu E(2) závislého přeprogramování hostitelských makrofágů ke zvýšení jejich produkce interleukinu-10. Nature Medicine, 15(1), 42–49. https://doi.org/10.1038/nm.1905
30. Fletcher, AL, Elman, JS, Astarita, J., Murray, R., Saeidi, N., D'Rozario, J., Knoblich, K., Brown, FD, Schildberg, FA, Nieves, JM, Heng , TS, Boyd, RL, Turley, SJ, & Parekkadan, B. (2014). Transplantace fibroblastických retikulárních buněk lymfatických uzlin vykazují silnou terapeutickou účinnost u vysoce mortalitní myší sepse. Science Translational Medicine, 6(249), 249ra109. https://doi.org/10.1126/scitranslmed.3009377
31. Gonzalez-Rey, E., Anderson, P., Gonzalez, MA, Rico, L., Buscher, D., & Delgado, M. (2009). Lidské dospělé kmenové buňky získané z tukové tkáně chrání před experimentální kolitidou a sepsí. Gut, 58(7), 929–939. https://doi.org/10.1136/gut.2008. 168534
32. Kaucsar, T., Godo, M., Revesz, C., Kovacs, M., Mocsai, A., Kiss, N., Albert, M., Krenacs, T., Szenasi, G., & Hamar, P. (2016). Poměr lipokalinu asociovaný s neutrofilní želatinázou v moči/plazmě je citlivým a specifickým markerem subklinického akutního poškození ledvin u myší. PLoS One, 11(1), e0148043. https://doi.org/10.1371/journ al.pone.0148043
33. Park, HK, Kim, S., Lee, S.-S., Kim, H.-J., Ahn, H.-S., Song, JY, Um, T.-H., Cho, C .-R., Jung, H., Koo, H.-K., Sim, YS, Song, J.-U., & Park, J.-H. (2015). Pomáhá plazmatický NGAL pro predikci akutního poškození ledvin u pacientů se sepsí?: Systematický přehled a metaanalýza. European Respiratory Journal, 46 (suppl 59), PA2148. https://doi.org/10.1183/13993003.congr ess-2015.PA2148
34. Koeze, J., van der Horst, ICC, Keus, F., Wiersema, R., Dieperink, W., Kootstra-Ros, JE, Zijlstra, JG, & van Meurs, M. (2020). Lipkalin asociovaný s plazmatickou neutrofilní gelatinázou při příjmu na jednotku intenzivní péče jako prediktor progrese akutního poškození ledvin. Clinical Kidney Journal, 13(6), 994–1002. https://doi. org/10.1093/ckj/sfaa002
35. Lee, KY (2019). M1 a M2 polarizace makrofágů: Minirecenze. Lékařská biologická věda a inženýrství, 2(1), 1–5. https://doi.org/10.30579/mbse.2019.2.1.1
36. Eggenhofer, E., Luk, F., Dahlke, MH, & Hoogduijn, MJ (2014). Život a osud mezenchymálních kmenových buněk. Frontiers in Immunology, 5, 148. https://doi.org/10.3389/fmmu.2014.00148
37. Luk, F., de Witte, SF, Korevaar, SS, Roemeling-van Rhijn, M., Franquesa, M., Strini, T., van den Engel, S., Gargesha, M., Roy, D. , Dor, FJ, Horwitz, EM, de Bruin, RW, Betjes, MG, Baan, CC a Hoogduijn, MJ (2016). Inaktivované mezenchymální kmenové buňky si udržují imunomodulační kapacitu. Kmenové buňky a vývoj, 25(18), 1342–1354. https://doi.org/10.1089/scd. 2016.0068
38. Li, JL, Li, G., Jing, XZ, Li, YF, Ye, QY, Jia, HH, Liu, SH, Li, XJ, Li, H., Huang, R., Zhang, Y., & Wang, H. (2018). Hodnocení biomarkerů spojených s klinickou sepsí v modelu septických myší. Journal of International Medical Research, 46(6), 2410–2422. https://doi.org/10.1177/0300060518764717
39. Cai, L., Rubin, J., Han, W., Venge, P., & Xu, S. (2010). Původ více molekulárních forem v moči HNL/NGAL. Clinical Journal of the American Society of Nephrology, 5(12), 2229–2235. https://doi.org/10.2215/CJN.00980110
40. Capcha, JMC, Rodrigues, CE, Moreira, RS, Silveira, MD, Dourado, P., Dos Santos, F., Irigoyen, MC, Jensen, L., Garnica, MR, Noronha, IL, Andrade, L. & Gomes, SA (2020).
41. Schlosser, K., Wang, JP, Dos Santos, C., Walley, KR, Marshall, J., Fergusson, DA, Winston, BW, Granton, J., Watpool, I., Stewart, DJ, McIntyre, LA, Mei, SHJ, & Canadian Critical Care Trials, G., & Canadian Critical Care Translational Biology, G. (2019). Účinky léčby mezenchymálními kmenovými buňkami na systémové hladiny cytokinů ve fázi 1 bezpečnostní studie s eskalací dávky u pacientů se septickým šokem. Critical Care Medicine, 47(7), 918–925. https://doi.org/10.1097/CCM.0000000000003657
42. van Rhijn-Brouwer, FCC, Gremmels, H., Fledderus, JO, & Verhaar, MC (2018). Charakteristika mezenchymálních stromálních buněk a regenerační potenciál u kardiovaskulárních onemocnění: Důsledky pro buněčnou terapii. Transplantace buněk, 27(5), 765–785. https://doi.org/10.1177/0963689717738257
43. Sun, XY, Ding, XF, Liang, HY, Zhang, XJ, Liu, SH, Bing, H., Duan, XG, & Sun, TW (2020). Účinnost terapie mezenchymálními kmenovými buňkami u sepse: Metaanalýza preklinických studií. Stem Cell Research & Therapy, 11(1), 214. https://doi.org/ 10.1186/s13287-020-01730-7
44. Laroye, C., Gibot, S., Reppel, L., & Bensoussan, D. (2017). Stručný přehled: Mezenchymální stromální/kmenové buňky: Nová léčba sepse a septického šoku? Kmenové buňky, 35(12), 2331–2339. https://doi.org/10.1002/stem.2695
45. Brady, J., Horie, S., & Lafey, JG (2020). Role adaptivní imunitní odpovědi v sepsi. Intensive Care Medicine Experimental, 8 (Suppl 1), 20. https://doi.org/10.1186/s40635-020-00309-z
46. Martina, MN, Noel, S., Saxena, A., Bandapalle, S., Majithia, R., Jie, C., Arend, LJ, Allaf, ME, Rabb, H., & Hamad, AR (2016 ). Dvojitě negativní alfa-beta T buňky jsou časnými odpověďmi na Aki a nacházejí se v lidských ledvinách. Journal of the American Society of Nephrology, 27(4), 1113–1123. https://doi.org/10.1681/ ASN.2014121214
47. Hotchkiss, RS, Tinsley, KW, Swanson, PE, Schmieg Jr., RE, Hui, JJ, Chang, KC, Osborne, DF, Freeman, BD, Cobb, JP, Buchman, TG, & Karl, IE (2001 ). Apoptóza vyvolaná sepsí způsobuje u lidí progresivní hlubokou depleci B a CD4 plus T lymfocytů. The Journal of Immunology, 166(11), 6952–6963. https://doi.org/10.4049/jimmunol.166.11.6952
48. Condotta, SA, Cabrera-Perez, J., Badovinac, VP, & Grifth, TS (2013). Imunita zprostředkovaná T-buňkami a úloha TRAIL v imunosupresi vyvolané sepsí. Critical Reviews in Immunology, 33(1), 23–40. https://doi.org/10.1615/critrevimmunol.{12}}
49. Khosrojerdi, A., Soudi, S., Hosseini, AZ, Eshghi, F., Shafee, A., & Hashemi, SM (2021). Imunomodulační a terapeutické účinky mezenchymálních kmenových buněk na orgánovou dysfunkci při sepsi. Šok, 55(4), 423–440. https://doi.org/10.1097/SHK.{8}}
50. Nie, P., Bai, X., Lou, Y., Zhu, Y., Jiang, S., Zhang, L., Tian, N., Luo, P., & Li, B. (2021) . Lidské mezenchymální kmenové buňky z pupečníku snižují oxidační poškození a apoptózu u diabetické nefropatie aktivací Nrf2. Stem Cell Research & Therapy, 12(1), 450. https://doi.org/10.1186/s13287-021-02447-x
51. dos Santos, CC, Murthy, S., Hu, P., Shan, Y., Haitsma, JJ, Mei, SH, Stewart, DJ, & Liles, WC (2012). Síťová analýza transkripčních odpovědí indukovaných léčbou experimentální sepse mezenchymálními kmenovými buňkami. American Journal of Pathology, 181 (5), 1681–1692. https://doi.org/10.1016/j.ajpath.2012.08.009
52. von Kortzfeisch, VT, Karp, NA, Palme, R., Kaiser, S., Sachser, N., & Richter, SH (2020). Zlepšení reprodukovatelnosti ve výzkumu na zvířatech rozdělením studované populace do několika „mini-experimentů“. Scientifc Reports, 10(1), 16579. https://doi.org/10. 1038/s41598-020-73503-4
53. Tanavde, V., Vaz, C., Rao, MS, Vemuri, MC, & Pochampally, RR (2015). Výzkum pomocí mezenchymálních kmenových/stromálních buněk: Metrika kvality k vývoji referenčního materiálu. Cytoterapie, 17(9), 1169–1177. https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2015. 07.008
54. Pickkers, P., Heemskerk, S., Schouten, J., Laterre, PF, Vincent, JL, Beishuizen, A., Jorens, PG, Spapen, H., Bulitta, M., Peters, WH, & van der Hoeven, JG (2012). Alkalická fosfatáza pro léčbu akutního poškození ledvin vyvolaného sepsí: Prospektivní randomizovaná dvojitě zaslepená placebem kontrolovaná studie. Critical Care, 16(1), R14. https://doi.org/10.1186/cc11159
55. Pickkers, P., Mehta, RL, Murray, PT, Joannidis, M., Molitoris, BA, Kellum, JA, Bachler, M., Hoste, EAJ, Hoiting, O., Krell, K., Ostermann, M ., Rozendaal, W., Valkonen, M., Brealey, D., Beishuizen, A., Meziani, F., Murugan, R., de Geus, H., Payen, D., et al. (2018). Vliv lidské rekombinantní alkalické fosfatázy na 7-denní clearance kreatininu u pacientů s akutním poškozením ledvin souvisejícím se sepsí: Randomizovaná klinická studie. The Journal of the American Medical Association, 320(19), 1998–2009. https://doi.org/10.1001/jama.2018.14283
Barbara Fazekas1 · Senthilkumar Alagesan2 · Luke Watson2 · Olivia Ng1,2 · Callum M. Conroy1,2 · Cristina Català3 · Maria Velascode Andres3 · Neema Negi1 · Jared Q. Gerlach4 · Sean O. Hynes5,6 · Francisco Lozano3,7,8 · Stephen J. Elliman2 · Matthew D. Grifn1,9,10
1 Institut regenerativní medicíny při CÚRAM Centrum pro výzkum zdravotnických prostředků, School of Medicine, National University of Ireland Galway, Galway, Irsko
2 Orbsen Therapeutics Ltd., Galway, Irsko
3 Institut d'Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer, Barcelona, Španělsko
4 Glycoscience Group, Národní centrum pro vědu biomedicínského inženýrství, National University of Ireland Galway, Galway, Irsko
5 Discipline of Pathology, School of Medicine, National University of Ireland Galway, Galway, Irsko
6 Histopathology Department, Galway University Hospitals, Galway, Irsko
7 Servei d'Immunologia, Hospital Clinic de Barcelona, Barcelona, Španělsko
8 Department de Biomedicina, Universitat de Barcelona, Barcelona, Španělsko
9 Oddělení nefrologie, Saolta University Health Care Group, Galway University Hospitals, Galway, Irsko
10 National University of Ireland Galway, REMEDI, Biomedical Sciences, Corrib Village, Dangan, Galway H91 TK33, Irsko
