Vodní extrakt Cistanches Tubulosa chrání varle před poraněním způsobeným cyklofosfamidem: účinek a mechanismus

XIA Lun-bin1,2 ,JIANG Ping 1,2 ,HE Yan-fei 1,2 ,SUN Tao-tao 1 ,ZHOU Yu1 ,ZUO Ｒui-hua 1,2

1. Škola biologického a farmaceutického inženýrství, West Anhui College, Lu ＇an, Anhui 237012, Čína; 2. Inženýrská laboratoř Anhui pro zachování a udržitelné využití zdrojů tradiční čínské medicíny, Lu＇an, Anhui 237012, Čína

【Abstraktní】

Cíl: Prozkoumat ochranný účinekVodní extrakt Cistanche tubulosa (CTWE) proti poranění varlat (TI) indukovanému cyklofosfamidem (CTX) u myší a jeho mechanismu účinku.

Prášek z extraktu cistanche

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche pro onemocnění ledvin

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Metody: Třicet myších samců bylo stejně náhodně rozděleno do normální kontroly, CTX-indukované modelové kontroly TI a skupiny léčené CTWE. Po 7 dnech adaptivního krmení byly myši ve skupině léčené CTWE léčeny intragastricky pomocí CTWE v dávce 1{{2{{30}}}} g/kg/d, než v normální kontrole a modelu TI kontrolní skupiny se stejným objemem normálního fyziologického roztoku qd všechny po dobu 35 po sobě jdoucích dnů a ty v kontrolní skupině modelu TI a CTWE léčené intraperitoneální injekcí cyklofosfamidu v dávce 80 mg/kg/d v 7,14,21 28 a 35 dní. Poté byla všechna zvířata zvážena, byly odebrány vzorky krve a byla jim odebrána varlata a nadvarlata pro zjištění obsahu T v séru, vyšetření kvality spermatu, měření hmotnosti varlat, pozorování histopatologických změn ve varlatech a stanovení hladin super oxid dismutáza (SOD) a malondialdehyd (MDA) ve tkáni varlat a mＲNA exprese genů souvisejících se signální dráhou nukleárního faktoru erytroidního{{10}}faktoru (Nrf2). Výsledky: Myši v kontrolní skupině modelu TI ve srovnání s normálními kontrolami vykazovaly významné snížení tělesné hmotnosti (［34． 13 ± 1． 56］vs ［47． 08 ± 1． 98］g ,P ＜ 0． 05) ,váha varlat ( ［81． 82 ± 1{{101}}． 61］vs ［148． 5{122}} ± 14． 82］mg,P ＜ 0． 05) ,koncentrace spermií (［32． 60 ± 5． 29］vs ［78． 90 ± 7． 95］ × 106/ml,P ＜ 0． 05) ,motilita spermií (［45． 20 ± 7． {{186 }}9,5 procenta vs.86 ］ng /L,P ＜ 0． 05) a úroveň SOD (［152． 22 ± 10． 66］vs［356． 10 ± 30． 95］U/mg prot,P ＜ ． v procentu morfologicky abnormálních spermií (MAS) (［39． 30 ± 7． 36］ procent vs［14． 40 ± 3． 53］ procent, P＜ 0． 05) a hladina MDA (［914．. 12 vs. 31 71 ± 3 57 nmol/mg prot, P 0 05) . Zvířata léčená CTWE ve srovnání s kontrolami modelu TI vykazovala výrazně zvýšenou tělesnou hmotnost (［40． 67 ± 2． 13］vs［34． 13］vs［34． 13］vs［34． 56］g, P＜ 0． 05), test je (［121． 21 ± 17． 38］vs ［81． 82］ 10． 61］mg,P＜ 0． 05), koncentrace spermií (［58］［32949． 40 ± 495) 29 ］ × 106 /ml, P ＜ 0． 05), pohyblivost spermií ( ［72． 30 ± 7． 51］ procent vs［45． 20 ± 7． 09, ］ procenta, P ＜ 050 10. 89 ± 1. 07. vs. 6 ］U/mg prot,P ＜ 0． 05), ale snížené procento MAS (［22． 20 ± 6． 07］ procent vs. ［39． 30 ± 7． 36) a MDA0 ．úroveň ．05］ (［36． 41 ± 4． 27］vs ［54． 91 ± 5． 12］nmol/mg prot,P＜ 0． 05)． Exprese mＲNA Nrf2,HO-1 a NQO-1 ve tkáni varlete byly významně sníženy u kontrol modelu TI ve srovnání s těmi u normálních kontrol (P＜0．05) a pozoruhodně up-regulovaná ve skupině léčené CTWE ve srovnání s těmi v modelové skupině TI (P＜0．05), zatímco u kaspázy3 se výrazně zvýšila v kontrolách modelu TI (P＜0．05) a snížila ve skupině léčené CTWE (P＜ 0． 05) . Histopatologicky vykazovala tkáň varlat kontrolních modelů TI nezřetelné obrysy od základny semenného tubulu k povrchu lumen, s neuspořádanými a redukovanými vrstvami spermatogenních buněk a sníženým počtem spermií v semenotvorných tubulech, zatímco struktura spermatogenních tubulů se ve skupině léčené CTWE zotavila téměř k normálu.

Závěr: Vodní extrakt Cistanches tubulosa může účinně inhibovat poškození varlat vyvolané cyklofosfamidem zvýšením aktivity antioxidačního enzymu a regulací exprese genů souvisejících se signální dráhou Nrf2.

Cistanche prášek

【Klíčová slova】Vodní extrakt Cistanche tubulosa; varlata; cyklofosfamid; oxidační stres; myš

Cyklofosfamid (CTX) jako protinádorový lék [1] a imunosupresivum [2] je široce používán v lékařské klinické praxi. Má však i výrazné cytotoxické účinky a k jeho nežádoucím účinkům patří poškození reprodukčního systému. Předchozí studie ukázaly, že CTX může způsobit poškození tkáně varlat oxidativním stresem u samců nebo samců, což vede ke spermatogenní dysfunkci, jako je snížený počet a pohyblivost spermií [3-6]. Zkoumání metod ke snížení nebo eliminaci poškození tkáně varlat CTX a k opravě její normální spermatogenní funkce se proto stalo ohniskem výzkumu.

Cistanche deserticola byla poprvé zaznamenána v „Shennong Materia Medica Classic“ a je tradiční a vzácnou čínskou medicínou. Má účinky tonizující esence a krve, tonizuje jang ledvin, vyživuje jin ledvin, zvlhčuje střeva a ulevuje od zácpy. Podle čínského lékopisu je Cistanche deserticola vytrvalá bylinná parazitická rostlina z čeledi Orobaceae. Cistanche deserticola YCMa nebo Cistanche tubulosa (Schenk) Light je suchá, šupinatá, masitá nať. Cistanche deserticola podle „Lékařského významu“ [8] „patří k jin jangu... je to hlavní látka posilující ledviny a je produktem, který pomáhá posilovat jang a esenci“. Přípravek Materia Medica [9] zdůrazňuje, že klíčem k použití Cistanche deserticola jako léku je „vyživovat ledviny a vyživovat střeva“. Cistanche deserticola je široce používán v receptech tradiční čínské medicíny a je jednou z nejčastěji používaných léčivých bylin při tonizaci ledvin, posílení jangu a zvýšení síly. V posledních letech chemické analýzy a farmakologické studie zjistily, že Cistanche deserticola obsahuje různé aktivní složky, jako jsou fenylethanoidové glykosidy, iridoidy a jejich glykosidy, lignany a jejich glykosidy, polysacharidy, alkaloidy, aminokyseliny a stopové prvky. [10]. 

Účinnost Cistanche deserticola – tonizující ledviny

Moderní farmakologický výzkum ukázal, že má nejen farmakologické účinky, jako jsou účinky proti stárnutí [11-12], proti únavě [13], antioxidant [14], imunitní regulace [15] a ochrana nervů [{{6 }}], ale také významně zlepšuje reprodukční funkce [18]. LI a kol. [19] uvedli, že Cistanche deserticola může zvrátit reprodukční toxicitu vyvolanou glykosidy tripterygia u myší; Wang Dejun a kol. [20] prokázali, že Cistanche deserticola může podpořit testikulární spermatogenezi a zlepšit mikroprostředí nadvarlete; Zhao Donghai a kol. [21] zjistili, že fenylethanoidní glykosidy z Cistanche deserticola mají významný terapeutický účinek na CTX indukované spermatogenní poruchy u myší, a poukázali na to, že jejich mechanismus může souviset se zlepšením hladiny testosteronu ve tkáni varlat. Existuje však málo zpráv o mechanismu účinku Cistanche deserticola na podporu reprodukčních funkcí, jako je spermatogeneze, a je zapotřebí další hloubkový průzkum. Tato experimentální studie využívala CTX ke konstrukci myšího modelu poškození varlat tkáně a zkoumala reparační účinek vodního extraktu Cistanche tubulosa (CTWE) na poškozenou tkáň varlat u myší. Studie byla provedena pomocí histologických, fyziologických a biochemických metod Studium antioxidačních indikátorů a exprese genů souvisejících se signální dráhou nukleárního faktoru E2 souvisejícího faktoru 2 (Nrf2) ve tkáni varlat má za cíl obohatit farmakologický základ Cistanche deserticola a poskytnout vědecký základ pro jeho léčivou hodnotu a vývoj produktů.

1 Materiál a metody

1.1 Materiály

1.1.1 Pokusná zvířata

40 čistých bílých myší Kunming, samci, s tělesnou hmotností (18 ± 2) g, zakoupených od Experimental Animal Center of Anhui Medical University, se zvířecím licenčním číslem SCXK (Anhui) 2017-001. Myši byly chovány v oddělených klecích, krmeny a pily volně při pokojové teplotě 20-24 stupňů a vlhkosti 55 procent -65 procent. Po 7 dnech adaptivního krmení byly použity pro experiment.

1.1.2 Léčivé materiály a činidla

Sušené tablety Cistanche deserticolabyly zakoupeny na trhu s léčivými bylinami ve městě Bozhou v provincii Anhui. Byly identifikovány jako tubulární Cistanche deserticola profesorem Chen Naidongem z Kanceláře pro výuku a výzkum tradiční čínské medicíny na School of Biological and Pharmaceutical Engineering, Wanxi University. Standardní produkt Echinacetinu (čistota větší nebo rovna 98 procentům), Shanghai Tongtian Biotechnology Co., Ltd; barvivo pro barvení hematoxylin eosin (HE), Zhuhai Besso Biotechnology Co., Ltd; Malondialdehyd (MDA), superoxiddismutáza (SOD) souprava ELISA, Nanjing Jiancheng Technology Co., Ltd; CTX, Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd; Testosteron ELISA Kit, Shanghai Zhenke Biotechnology Co., Ltd; UNlQ-10 kolona Trizol souprava pro extrakci celkové RNA, Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd; EasyScript One Step odstranění gDNA a cDNA Synthesis SuperMix, Trans Start Green qPCRSuperMix, Beijing Quanshi Biotech Co., Ltd.

Sušené tablety Cistanche deserticola

1.1.3 Přístroje a vybavení

mikroskop BX53, společnost Olympus; YD-335 kráječ parafínu, Zhejiang Jinhua Yidi Medical Equipment Co., Ltd; RE-2002 rotační výparník, Shanghai Yaote Instrument Equipment Co., Ltd; TU-1950 UV viditelný spektrofotometr, Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd; Ultramikro spektrofotometr NanoDrop2000, Thermo Fisher Scientific; Systém kapalinové chromatografie Agilent 1260 Infinity II Prime, Agilent Technologies; Krok jedna plus přístroj pro fluorescenční kvantitativní PCR, Applied Biosystems.

1.2 Metoda

1.2.1 Příprava CTWE

S odkazem na metodu extrakce horkou vodou uvedenou v odkazu [22] s mírnými vylepšeními. Rozdrťte 500 g Cistanche deserticola a ponořte do 5 l destilované vody. Vařte a extrahujte při 100 stupních po dobu 2 hodin. Filtruje se a filtrát se sebere. Ke zbytku filtru přidejte 5 l destilované vody a pokračujte v extrakci. Extrakce se opakuje třikrát, filtrát se spojí, odpaří se ve vakuu při 65 stupních a koncentruje se na obsah surového léčiva 0,5 g/ml. Kontrola kvality CTWE je založena na obsahu Echinacetinu [23]. Obsah Echinacetinu v CTWE je stanoven vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na (7,63 ± 0,08) mg/ml.

1.2.2 Seskupování a administrace zvířat

30 myši byly náhodně rozděleny do normální kontrolní skupiny, modelové skupiny a skupiny léčené Cistanche deserticola, přičemž v každé skupině bylo 10 myší. Léčebné skupině myší byla podána žaludeční sondou dávka CTWE v dávce 10 g/kg tělesné hmotnosti [vypočteno jako 20násobek dospělého 0,5 g/(kg · d) [13]], zatímco kontrolní skupině a modelové skupině myší byl podáván stejný objem fyziologického roztoku žaludeční sondou jednou denně po dobu 35 po sobě jdoucích dnů; 7., 14., 21., 28. a 35. den podávání byla modelové skupině a myším skupiny Cistanche deserticola podána dávka 80 mg/kg tělesné hmotnosti CTX pro intraperitoneální injekci, zatímco myším kontrolní skupině byla podána stejný objem fyziologického roztoku pro intraperitoneální injekci.

1.2.3 Odběr a zpracování vzorků

Po poslední injekci CTX a hladovění po dobu 12 hodin byla změřena tělesná hmotnost a byly odebrány vzorky krve. Poté byly myši v každé skupině intraperitoneálně anestetizovány chloralhydrátem (0,3 ml/100 g) a varlata byla vyjmuta a zvážena; Odeberte epididymální tkáň z obou stran pro testování kvality spermií; Vezměte levé varle a uložte do 4% roztoku paraformaldehydu pro tkáňové řezy a histopatologické vyšetření; Vezměte správné varle a uložte je do tekutého dusíku pro tkáňové biochemické indikátory a fluorescenční kvantitativní PCR detekci.

1.2.4 Testování kvality spermií

Odřízněte odebranou tkáň nadvarlete a vložte ji do předehřátého fyziologického roztoku na teplotu 37 stupňů. Inkubujte při konstantní teplotě po dobu 15 minut, aby spermie mohly plně vyplavat a připravit suspenzi spermatu. Vezměte suspenzi spermií a umístěte ji na desku na počítání spermií předehřátou na 37 stupňů. Pozorujte pod mikroskopem a vyberte spermie, které se mohou pohybovat přímočaře nebo neorientovaným směrem jako živé spermie. Jiné spermie, které se mohou pouze otáčet nebo zůstat neaktivní na místě jako mrtvé spermie. Spočítejte počet živých spermií ve 200 spermiích a vypočítejte rychlost motility spermií [24]; Odeberte 10 μ Po naředění suspenze spermií 20násobným fyziologickým roztokem vypočítejte koncentraci spermií pomocí destičkové metody pro počítání krvinek; Vezměte suspenzi spermií a smíchejte ji s 1% roztokem eosinu v poměru 10:1 pro obarvení, natřete, vysušte na vzduchu, zafixujte v methanolu, pozorujte pod mikroskopem a vypočítejte míru deformace spermií.

1.2.5 Patologické pozorování tkáně varlat

Vezměte levé varle konzervované ve 4% roztoku paraformaldehydu, ořízněte ho na tkáňový blok o velikosti asi 0,5 cm3 ostřím, zalijte jej do parafínu, obarvěte HE a pozorujte patologické změny varlat tkáně pod mikroskopem.

1.2.6 Detekce biochemických indikátorů v tkáni varlat

Podle pokynů detekční soupravy SOD a MDA odeberte varlata uložená v tekutém dusíku a připravte 10procentní homogenát. Pro detekci obsahu SOD a MDA v testikulární tkáni postupujte podle pokynů sady.

1.2.7 Detekce obsahu testosteronu v séru

Podle návodu k obsluze soupravy pro detekci testosteronu ELISA zjistěte obsah testosteronu v myším séru.

1.2.8 Tkáň varlat myši

Obsah genů souvisejících se signální dráhou Nrf2 byl detekován pomocí fluorescenční kvantitativní PCR k detekci úrovní exprese mRNA genů, jako je Nrf2, kaspáza-3, hemoxygenáza-1 (HO-1) , NADPH chininoxidoreduktáza-1 (NQO-1) a Kelch-like ECH související protein-1 (Keap1) v myší testikulární tkáni. Metoda byla popsána v odkazu [25] a mírně upravena . Celková RNA byla extrahována z myší testikulární tkáně pomocí sloupcového Trizol extrakčního kitu pro celkovou RNA. cDNA byla syntetizována reverzní transkripcí s použitím EasyScript One Step gDNA odstranění a cDNA Synthesis SuperMix a detekována pomocí RTFQ PCR s použitím sady Trans Start Green qPCRSuper Mix. Primery pro Nrf2, Caspase3, HO-1, NQO-1 a Keap1 byly navrženy a syntetizovány společností Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd. Sekvence primerů jsou uvedeny v tabulce 1. Data byla zaznamenána pomocí vestavěného softwaru fluorescenčního kvantitativního PCR přístroje a hodnoty Ct vzorků byly stabilně exprimovány u myší Aktin je endogenní vnitřní referenční gen [26]. Vzorec 2 - ΔΔ Vypočítejte relativní úroveň exprese mRNA pomocí CT.

1.3 Statistická analýza

Všechna data byla analyzována pomocí SPASS 19.0 pro jednosměrnou ANOVA, přičemž data měření reprezentovaná x ± s a P Menší nebo rovno 0,05, což ukazuje na statisticky významné rozdíly.

Stůl 1. Primární sekvence Nrf2, Caspase3, HO-1, NQO-1, Keap1 a -actin používané v RTFQ-PCR

2 Výsledky

2.1 Vliv CTWE na tělesnou hmotnost a hmotu varlat u myší s poškozením varlat způsobeným CTX

Ve srovnání s normální kontrolní skupinou byla tělesná hmotnost a hmotnost varlat u modelové skupiny myší významně snížena (P<0.05); Compared with the model group, the body mass and testicular mass of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). See Table 2.

2.2 Vliv CTWE na kvalitu spermatu u myší s poškozením varlat vyvolaným CTX

Z tabulky 3 je vidět, že ve srovnání s normální kontrolní skupinou byla pohyblivost spermií a koncentrace u myší v modelové skupině významně snížena (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the sperm motility and sperm concentration in the Cistanche deserticola treatment group were significantly increased (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly reduced (P<0.05). The results showed that CTWE significantly improved the semen quality of mice with testicular injury caused by CTX.

Tabulka 2. Tělesná hmotnost a hmotnost varlat u myší v různých skupinách ( x ± s)

NC: Normální ovládání; TIMC: kontrola modelu poranění varlat; CTWE: ošetření vodním extraktem Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}． 05 versus skupina NC; #: P ＜ 0. 05 proti skupině TIMC.

Tabulka 3. Motilita spermií, koncentrace spermií a procento morfologicky abnormálních spermií (MAS) myší v různých skupinách (x ± s)

NC: Normální ovládání; TIMC: kontrola modelu poranění varlat; CTWE: ošetření vodním extraktem Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}． 05 versus skupina NC; #: P ＜ 0. 05 proti skupině TIMC.

Obrázek 1. Patomorfologické snímky tkání varlat myší v různých skupinách (HE × 400)

A＇ a A: Normální ovládání; B＇a B: kontrola modelu poranění varlat; C＇and C: ošetření vodním extraktem Cistanche tubulosa; Šipky ukazují na změny ve vrstvách spermatogenních buněk na všech úrovních v semenotvorných kanálcích; rámečky označují neuspořádané a redukované vrstvy spermatogenních buněk; a kroužky označují snížený počet spermií v semenotvorných tubulech

2.3 Účinek CTWE na patologické změny testikulární tkáně u myší s poškozením varlat vyvolaným CTX

Jak je vidět z obrázku 1, ve srovnání s normální kontrolní skupinou se struktura semenotvorného tubulu v testikulární tkáni myší modelové skupiny významně změnila. Obrys bazální membrány semenotvorného tubulu je nejasný, hladiny spermatid na všech úrovních v lumen jsou snížené a neuspořádaně uspořádány a počet spermií v lumen je významně snížen (obrázek 1B, B'); Ve srovnání s modelovou skupinou se po léčbě v léčebné skupině Cistanche deserticola obrys bazální membrány semenotvorného tubulu ve varlatech myší stal úplný a jasný, vrstvy spermatid v lumen se zvětšily a jejich uspořádání mělo tendenci být pravidelné, a počet spermií v lumen se významně zvýšil (obrázek 1C, C').

2.4 Vliv CTWE na hladiny SOD a MDA ve tkáni varlat myší s poškozením varlat vyvolaným CTX

Ve srovnání s normální kontrolní skupinou se obsah SOD v testikulární tkáni myší modelové skupiny významně snížil (P<0.05) and the MDA content significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the SOD content in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05) and the MDA content significantly decreased (P<0.05). The results showed that CTWE had a significant improvement effect on SOD and MDA indicators in the testicular tissue of mice with CTX-induced testicular injury. See Table 4.

Tabulka 4. Hladiny SOD a MDA ve tkáni varlat u myší v různých skupinách (x ± s)

SOD: super oxid dismutáza; MDA: malondialdehyd; NC: Normální ovládání; TIMC: kontrola modelu poranění varlat; CTWE: ošetření vodním extraktem Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}． 05 versus skupina NC; #: P ＜ 0. 05 proti skupině TIMC.

2. 5 Vliv CTWE na obsah sérového testosteronu u myší s poškozením varlat vyvolaným CTX

Podle tabulky 5 byl ve srovnání s normální kontrolní skupinou obsah sérového testosteronu u myší modelové skupiny významně snížen (P<0.05); Compared with the model group, the serum testosterone content of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). This indicates that CTWE not only has a good anti-injury and repair effect on CTX-induced testicular injury in mice but also significantly increases the serum testosterone content in testicular injury mice.

Tabulka 5. Obsah séra T v různých skupinách myší ( x ± s)

NC: Normální ovládání; TIMC: kontrola modelu poranění varlat; CTWE: ošetření vodním extraktem Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}． 05 versus skupina NC; #: P ＜ 0. 05 proti skupině TIMC.

2. 6 Vliv CTWE na expresi genů dráhy Nrf2 ve varlatech myší s poškozením varlat vyvolaným CTX

Jak je znázorněno na obrázku 2, ve srovnání s normální kontrolní skupinou byly hladiny exprese mRNA NQO-1, HO-1 a Nrf2 v testikulární tkáni myší modelové skupiny významně sníženy (P<0.05), while the mRNA expression level of the apoptotic gene Caspase3 was significantly upregulated (P<0.05); Compared with the model group, the expression levels of NQO-1, HO-1, and Nrf2 mRNA in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola were significantly upregulated (P<0.05), while the expression levels of Caspase3 mRNA were significantly downregulated (P<0.05); The mRNA expression level of Keap1 gene showed no significant difference between the normal control group, model group, and Cistanche deserticola treatment group (P>0.05). CTWE tedy může opravit oxidační poškození CTX na histiocytech myších varlat zvýšením exprese NQO-1, HO-1 a dalších antioxidačních faktorů regulovaných Nrf2 a inhibicí exprese apoptózového genu kaspázy3 .

Obrázek 2. Ｒelativní exprese genů souvisejících se signální dráhou Nrf2 v různých skupinách myší

NC: Normální ovládání; TIMC: kontrola modelu poranění varlat; CTWE: ošetření vodním extraktem Cistanche tubulosa; * : P ＜ {{0}}． 05 versus skupina NC; #: P ＜ 0. 05 oproti skupině TIMC

3 Diskuse

Jako protinádorový a imunosupresivní lék má CTX silnou reprodukční toxicitu a velké poškození fertility [27]. Výsledky této studie ukázaly, že testikulární tkáň myší modelu CTX byla významně poškozena, obrys bazální membrány semenotvorného tubulu byl nejasný, průměr lumenu byl zmenšen a hladiny spermatid na všech úrovních byly sníženy a došlo k neuspořádanosti, zvýšila se míra deformace spermií a snížila se životaschopnost a koncentrace spermií, což bylo v souladu s výsledky výzkumu Jiang Pinga [24], což dále naznačuje, že CTX má silnou reprodukční toxicitu. Cistanche deserticola je dobrým lékem na posílení jangu a tonizaci ledvin. Výsledky této studie ukazují, že CTWE může účinně opravit reprodukční toxicitu CTX u myší. Hmotnost a kvalita varlat myší v léčebné skupině Cistanche deserticola se významně zvýšila, koncentrace a životaschopnost spermií významně vzrostla, míra deformace spermií se významně snížila a obsah sérového testosteronu se významně zvýšil; Z hlediska histopatologie pozorování HE barvením tkáňových řezů ukázalo, že poškození testikulární tkáně se významně zlepšilo, obrys bazální membrány semenných tubulů se stal úplným a jasným, hladina spermatid v lumenu byla jasná a měla tendenci být pravidelná, a morfologie tkáně měla tendenci být normální, což bylo v souladu s výzkumnou zprávou Wang Dejun et al. [20], což naznačuje, že CTWE měla účinek na opravu poškození tkáně varlat myší způsobené CTX.

Pouštní žijící cistanche – Tonizující ledvina

Za normálních fyziologických podmínek tělesné tkáně nepřetržitě eliminují volné kyslíkové radikály a jejich peroxidy produkované metabolickými aktivitami prostřednictvím antioxidačního systému, čímž udržují dynamickou rovnováhu redoxního systému těla a zabraňují poškození tkání oxidativním stresem [28]. SOD a MDA jsou důležitými indikátory tkáňové antioxidační aktivity, odrážející antioxidační kapacitu tkáně a stupeň poškození oxidativním stresem [29]. Ma Xiaoqing a kol. [30] zjistili, že Cistanche deserticola může významně zvýšit hladinu SOD a snížit hladinu MDA v tkáni ledvin potkana, čímž má určitý ochranný účinek na poškození tkáně ledvin potkana způsobené gentamicinem. Výsledky této studie ukazují, že CTWE může účinně zvýšit úroveň aktivity SOD a snížit obsah MDA v poškozené tkáni varlat myší, podobně jako výše uvedené výsledky výzkumu, což naznačuje, že CTWE může odolat poškození oxidativním stresem zvýšením antioxidační kapacity. tkáně varlat.

Superman byliny cistanche — Tonizující ledviny

Nrf2 je členem rodiny transkripčních faktorů Cap'n'collar a hraje důležitou roli v různých chorobných procesech, jako jsou nádory a záněty [31]. Nrf2 je klíčový transkripční faktor, který reguluje buněčný antioxidační stres. Když tělo zažije oxidační stres, vstoupí do jádra a naváže se na downstream prvky antioxidační odezvy (ARE), které regulují transkripční aktivitu různých endogenních antioxidačních faktorů, včetně SOD, HO-1 a NQO-1, a inhibici oxidačních reakcí [32]. Za patologických podmínek je regulační funkce Nrf2 abnormální a histiocyty jsou poškozeny oxidačním stresem. Le a kol. [33] uvedli, že CTX hraje roli při poškození reprodukční toxicitou tím, že snižuje expresi Nrf2, čímž inhibuje expresi antioxidačních faktorů, jako je HO-1 a NQO-1. V této studii byla exprese genů Nrf2, HO-1 a NQO-1 v testikulární tkáni myší modelové skupiny významně snížena a exprese genu apoptózy Caspase3 byla upregulována, což naznačuje, že CTX může podporovat apoptózu myších testikulárních histiocytů prostřednictvím signální dráhy Nrf2, což způsobuje poškození testikulární tkáně, což je v souladu s výše uvedenými výsledky výzkumu; Exprese Nrf2, NQO-1 a HO-1 v testikulární tkáni myší léčených Cistanche deserticola byla významně up-regulována, zatímco exprese Caspase3 byla významně downregulována, což naznačuje, že Cistanche deserticola mohla podporují vstup do jádra Nrf2 a integraci ARE, zvyšují expresi NQO-1, HO-1 a dalších antioxidačních faktorů regulovaných Nrf2, opravují oxidační poškození CTX na myších testikulárních histiocytech a obnovují testikulární spermatogenitu funkce.

Stručně řečeno, CTWE může zmírnit poškození testikulární tkáně vyvolané CTX u myší, opravit poškozenou strukturu testikulární tkáně a obnovit spermatogenní funkci varlat. Mechanismus může souviset se schopností CTWE zvyšovat aktivitu antioxidačních enzymů, regulovat expresi genů antioxidačních stresových faktorů souvisejících se signální dráhou Nrf2 a snižovat expresi apoptotického genu Caspase3. Tento článek se zabývá především antioxidačním stresovým poškozením účinku CTWE na tkáň varlat a je zapotřebí dalšího výzkumu jeho mechanismu účinku.

odkaz

［1］ Smolej L,Brychtová Y,Cmunt E,et al. Nízkodávkovaný fludarabin a cyklofosfamid v kombinaci s rituximabem v první linii léčby starších/komorbidních pacientů s chronickou lymfocytární leukémií/malým lymfocytárním lymfomem (CLL/SLL) : Dlouhodobé výsledky projektu Q-lite Czech CLL Study Group. Br J Haematol, 2021,193( 4): 769-778．

［2］ Li Ruijun, Qin Yong, Zhou Yalin a kol. Vliv cizrnového peptidu na imunitní funkci imunokompromitovaných myší. potravinářská věda, 2020, 41 (21): 133-139

［3］Liu Bo, Li Ye, Wu Qi a kol. Účinek Erxian Tang na reprodukční funkci modelových myší s oligospermií indukovanou cyklofosfamidem. Chinese Journal of Andrology, 2018, 24 (6): 547-552

［4］Lai Yongwei, Xi Yanli, Shao Minghai a kol. Ochranný účinek flavonoidů Myrica rubra na reprodukční toxicitu indukovanou cyklofosfamidem u samců myší. Zdravotní výzkum, 2020, 49 (5): 790 - 794

［5］Liu Jianguo, Zhao Hongle, Li Jiaojiao a kol. Účinek receptury Bushen Huoxue na apoptózu myších testikulárních spermatidních buněk indukovanou cyklofosfamidem. Chinese Journal of Andrology, 2020, 26 (9): 826-831

［6］Mi Zhaoyan, Zhang Yanan, Hua Rui a kol. Ochranný účinek resveratrolu na oxidativní poškození lidských spermií vyvolané cyklofosfamidem. Journal of Modern Urology, 2021, 26 (4): 340-344

［7］Národní lékopisná komise. Lékopis Čínské lidové republiky: Část 1. Peking: China Medical Science and Technology Press, červenec 2022

［ 8 ］ Jia Suo Xue. Farmaceutická chemie. Peking: China Traditional Chinese Medicine Press, červenec 2015

［9］Wang Ang. Příprava Materia Medica. Peking: China Traditional Chinese Medicine Press, 2009.121

［10］Zhi Yajing, Zhen Yaqin, Tian Wei a kol. Pokrok ve výzkumu chemického složení a farmakologických účinků Cistanche deserticola a predikční analýza markerů kvality (Q-Markers). Chinese Herbal Medicine, 2021, 52 (9): 2758-2767

［11］Wu Yan, Zhang Hong, Bu Ren a kol. Studie ochranného účinku polysacharidu Cistanche deserticola na modelu akutního stárnutí vyvolaného galaktózou D-neneneba. Chinese Pharmacological Bulletin, 2017, 33 (7): 927-933

［12］ Wang NQ, Ji SZ, Zhang H a další. Herba Cistanches: Proti stárnutí. Aging Dis,2017,8( 6) : 740-759．

［13］Wang Xiaoming. Výzkum účinných složek a mechanismu působení Desert Cistanche při zmírňování fyzické únavy (doktorská práce). Peking: Peking Union Medical College, 2019.139-145

［14］Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi a kol. Analýza složení a antioxidační aktivita polysacharidů z Lanzhou Cistanche deserticola. Technologie potravinářského průmyslu, 2021, 42 (15): 96-103

［15］Yang Xiumei, Yang Yu, Wang Danyang a kol. Etanolový extrakt z Cistanche deserticola v Xinjiang reguluje imunitní účinek zrání DC na Th1/Th2 u myší. Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2021, 52 (3): 820-830

［16］Wang Jingkang, Wang Lichao, Jiang Yong a kol. Studie ochranného účinku a mechanismu alkoholového extraktu z Cistanche deserticola na poškození neuronů způsobené hypoxií/hypoglykemickou reperfuzí. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2019, 44 (13): 2686-2690

［17］Cai Kerui, Liu Zhixin, Sun Xiaodong a kol. Ochranný účinek a mechanismus polysacharidu Cistanche deserticola na mozkové neurony u stárnoucích myší vyvolaných galaktózou D-neneneba. Chinese Journal of Gerontology, 2018, 38 (19): 4732-4734

［18］Wang Qixin, Chen Zehua, Luo Hujie a kol. Účinek různých extraktů z Cistanche deserticola na zlepšení sexuální schopnosti u potkanů ​​s nedostatkem jangu ledvin. Chinese Journal of Experimental Prescriptions, 2018, 24 (22): 95-101

［19］ Li J, Huang D, He LQ. Vliv Ｒoucongrong (Herba Cistanch es Deserticolae) na reprodukční toxicitu u myší indukovanou glykosidem Leigongteng (Ｒadix et Ｒhizoma Tripterygii) Ｒ. J Tradit Chin Med, 2014,34( 3): 324-328．

［20］Wang Dejun, Sheng Shuqing, Liang Hong. Vliv Cistanche deserticola na morfologii a histochemii myších varlat a nadvarlat. Anatomical Research, 2000, 22 (2): 101-103158

［21］Zhao Donghai, Zhang Lei, Zhang Yan a kol. Terapeutický účinek a mechanismus fenylethanolových glykosidů z Cistanche deserticola na cyklofosfamidem indukované spermatogenní poruchy u myší. Journal of Jilin University (Medical Edition), 2014, 40 (3): 612-615

［22］Li Y, Peng Y, Wang MY a další. Lidský gastrointestinální metabolismus vodního extraktu z cistanches herba in vitro: Objasnění metabolického profilu na základě komplexní identifikace metabolitů v žaludeční šťávě, střevní šťávě, lidských střevních bakteriích a střevních mikrozomech. J Agricult Food Chemist, 2017, 65( 34) : 7447-7456．

［23］Xu Shanshan, Wu Kangyu, Tu Xingming. Stanovení echinacetinu ve vodním extraktu Cistanche deserticola pomocí HPLC. Nová čínská medicína a klinická farmakologie, 2019, 30 (5): 598-601

［24］Jiang Ping, Xu Qinghong, Chen Cunwu a kol. Účinek Jingui Shenqi Wan na expresi genů signální dráhy Nrf2 ve tkáni varlat myší s poškozením varlat vyvolaným cyklofosfamidem. Chinese Journal of Andrology, 2020, 26 (2): 160-166

［25］Ma Chaoyang, Zhu Lijuan, Luo Chenxi a kol. Ochranný účinek kyseliny betulinové na poškození jater vyvolané cyklofosfamidem u myší. potravinářská věda, 2020, 41 (21): 147-153

［26］Hai Zhuo, Xiong Xianrong, Ma Hongcheng a kol. Screening interních referenčních genů pro fluorescenční kvantitativní PCR analýzu myších varlat. Journal of Southwest University for Nationalities (Natural Science Edition), 2020, 46 (5): 448-456

［27］ Guo XB, Zhai JW, Xia H a další. Ochranný účinek exozomů pocházejících z mezenchymálních kmenových buněk kostní dřeně proti reprodukční toxicitě cyklofosfamidu je spojen se signálními cestami p38MAPK/EＲK a AKT，. Asian J Androl, 2021, 23( 4): 386-391．

［28］ Liu M, Li H, Zhang L a spol. Bavlníkový olej zmírňuje poškození oxidativním stresem vyvolané ischemickou mrtvicí aktivací signální dráhy Nrf2. Mol Neurobiol,2021,58(6): 2494-2507．

［29］ Yang Y, Wu ZZ, Cheng YL a další. Ｒesveratrol chrání před oxidačním poškozením buněk pigmentového epitelu sítnice modulací aktivity SOD/MDA a aktivací exprese Bcl{1}}. Eur Ｒev Med Pharmacol Sci,2019,23(1) : 378-388．

［30］Ma Xiaoqing, Wang Jie, Hu Junping a kol. Farmakodynamická studie celkových glykosidů fenylethanolu z Cistanche deserticola na gentamicinem indukovaném akutním poškození ledvin u potkanů. Journal of Xinjiang Medical University, 2020, 43 (7): 942-946950

［31］ Huang Y, Yang Y, Xu Y a další. Osa Nrf2 /HO-1 reguluje angiogenezi rakoviny žaludku prostřednictvím cílení na VEGF. Cancer Manager Ｒes,2021,13(1) : 3155-3169．

［32］ Zhao Y, Wang Y, Zhang M a další. Ochranné účinky ginsenosidů ( 20Ｒ) -Ｒg3 na H 2O 2-indukované poškození buněk myokardu aktivací signální dráhy Keap-1 /Nrf2 /HO-1． Chemist Biodiver, 2021, 18( 4): e2001007．

［33］ Le X, Ping L, Gu Y a spol. Polysacharid chobotnicového inkoustu snižuje poškození varlat vyvolané cyklofosfamidem prostřednictvím aktivační dráhy Nrf2/AＲE u myší. Iranian J Basic Med Sci, 2015,18( 8) : 827-831．