Mechanismus spermatu Cistanche–Vaccariae v léčbě chronické nebakteriální prostatitidy u potkanů na základě farmakologie sítě
Nov 14, 2025
Abstraktní
Zkoumat ochranný účinek bylinného páru Cistanche–Vaccariae Semen (Cistanche–VS) na zánětlivá poranění u chronické nebakteriální prostatitidy (CNP). V této studii bylo testováno 41 aktivních složek a 156 odpovídajících cílových proteinů pomocí TCMSP a vyhledávání literatury. Databáze OMIM a GeneCards byly použity k identifikaci 9 848 cílů souvisejících s onemocněním pro CNP. Cytoscape a STRING byly použity ke konstrukci sítě protein–protein interakce (PPI) a sítě aktivní složka–cíl–cesta nemoci. Výsledky PPI zahrnovaly především klíčové proteiny, jako je interleukin-6 (IL-6), tumor nekrotizující faktor- (TNF- ), interleukin-1 beta (IL-1), tumorový protein p53 (TP53) a RAC-alfa serin/threonin-proteinkináza (AKT1). Analýzy obohacení dráhy GO a KEGG byly provedeny pomocí platformy Metascape; obohacené KEGG dráhy zahrnovaly PI3K‑AKT, lipidy a aterosklerózu, rakovinu prostaty a signální dráhy MAPK. Bylo provedeno molekulární dokování mezi aktivními složkami a hlavními cíli. Pro ověření výše uvedených údajů byly v experimentech na zvířatech měřeny sérové hladiny IL‑1, interleukinu‑18 (IL‑18) a TNF‑. Patologické změny v prostatické tkáni byly pozorovány pomocí H&E barvení. Základní cílové proteiny IL‑6, TNF‑, IL‑1 a proteiny související s dráhou byly detekovány metodou Western blot. Experimenty na zvířatech ukázaly, že regulace zánětlivých faktorů a exprese proteinů souvisejících se zánětem byly potlačeny v každé léčebné skupině. Tyto výsledky naznačují, že signální dráha PI3K‑AKT se může podílet na zlepšení CNP prostřednictvím vícesložkových, vícecílových mechanismů.
klíčová slova:síťová farmakologie; bylinkový pár;chronická nebakteriální prostatitida; Cistanche; Vaccariae sperma; Signální dráha PI3K‑AKT
Extrakt z cistanche Doplňky pro chronickou nebakteriální prostatitidu
Kliknutím zobrazíte další podrobnosti
Supporting Service Of Wecistanche-Pro více podrobností o spolupráci
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Zavedení
Chronická nebakteriální prostatitida (CNP)je urogenitální porucha běžně pozorovaná u mužů středního věku. Klinicky je charakterizována dysurií, frekvencí močení, nutkáním na močení, bolestí při močení a pocitem neúplného vyprázdnění močového měchýře; v závažných případech může ovlivnit duševní zdraví, s nespavostí, živými sny, úzkostí a depresí. V tradiční čínské medicíně (TCM) odpovídá kategoriím jako „Jinglin“, „Baizhuo“, „Longbi“ a „Lin-zhuo“. Převládající patogeneze TCM zahrnuje vlhké teplo se stází; principy léčby obvykle zdůrazňují čištění tepla, odstranění vlhkosti, aktivaci krve a regulaci qi. Konvenční západní terapie zahrnují alfa-blokátory, antibiotika a nesteroidní protizánětlivé léky. V současné době, protože patogeneze zůstává nejasná, je účinná léčba CNP omezená.
Bylinný pár Cistanche–Vaccariae Semen se tradičně používá k odstranění vlhkého tepla v dolní části jiao, podpoře krevního oběhu a regulaci qi. Cistanche vstupuje do kanálů ledvin a močového měchýře a pomáhá řešit vlhké teplo ve spodní části jiao. Moderní farmakologické studie ukázaly, že Cistanche vykazuje protizánětlivé, antibakteriální a analgetické účinky; alkaloidům podobné a fenylethanoidní složky přípravku Cistanche byly spojovány s urogenitální podporou, včetně potenciálních přínosů souvisejících s prostatickým zdravím. Semeno Vaccariae vstupuje do jaterních a ledvinových kanálů, podporuje krevní oběh, reguluje menstruaci a usnadňuje diurézu ke zmírnění otoků a mdloby. Moderní farmakologie uvádí, že etanolové extrakty semene Vaccariae mají protizánětlivé účinky a polysacharidy semene rodu Vaccariae mohou zmírnit poškození močového měchýře způsobené infekcí močových cest.
V posledních letech byly bylinné páry TCM široce používány ke zkoumání kompatibility, účinnosti a mechanismů předepisování. Tato studie proto používá síťovou farmakologii a experimenty na zvířatech ke komplexnímu objasnění a ověření molekulárních mechanismů, kterými bylinný pár Cistanche–Vaccariae Semen léčí CNP, s cílem poskytnout reference pro jeho klinické aplikace a experimentální výzkum, stejně jako jeho potenciální převod do doplňků stravy zaměřených na prostatitidu.
Materiály a metody
1.1 Reagencie
Granule Cistanche (výrobce: Shenwei Pharmaceutical Group Co., Ltd.; číslo šarže: 21082272)
Granule Vaccariae Semen (Shenwei Pharmaceutical Group Co., Ltd.; šarže č.: 230515P2)
Karagenan (Sigma, USA; číslo šarže: C1013‑100G)
Soupravy ELISA pro IL-1, IL-18 a TNF- (Sangon Biotech; šarže č.: D731007, D731079, D731168)
‑aktinová protilátka (Wuhan Servicebio; číslo šarže: ZB15001‑HRP‑100)
Protilátky: IL-6, TNF-, IL-1, fosfatidylinositol 3-kináza (PI3K), fosforylovaný PI3K (p-PI3K), proteinkináza B (PKB/AKT), fosforylovaný AKT (p-AKT) (Jiangsu Abscience Research Center; DF74,680s. šarže: č. AF4006, AF6241, AF3241, AF0836, AF8355)
1.2 Zvířata
Čtyřicet samců SPF potkanů Sprague–Dawley (180–200 g) poskytla společnost Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd. Výrobní licence: SCXK (Liao) 2020‑0001; licence k použití: SYXK (Ji) 2017-0007. Potkani byli chováni za standardních laboratorních podmínek: 25 ± 2 stupně, relativní vlhkost 50 ± 15 %, cyklus 12 hodin světlo/tma, s volným přístupem k potravě a vodě. Protokol byl schválen Výborem pro dobré životní podmínky laboratorních zvířat Univerzity čínské medicíny v Che-pej (č. schválení: DWLL202401001).
1.3 Cílový sběr chemických složek semene Cistanche–Vaccariae
Použitím názvů bylin jako klíčových slov byly aktivní složky a cílové proteiny získány z TCMSP a literatury, s prahovými hodnotami pro screening orální biologické dostupnosti (OB) větší nebo rovnou 30 a podobností s lékem (DL) větší nebo rovnou 0,18. Názvy cílových proteinů byly standardizovány pomocí UniProt s druhy omezenými na Homo sapiens, aby se získaly genové symboly.
1.4 Sběr cílů souvisejících s onemocněním CNP
"Chronická nebakteriální prostatitida" byla použita jako klíčové slovo v GeneCards a OMIM. Jména genů byla standardizována; výsledky byly sloučeny a cíle bez identifikátorů UniProt nebo duplikátů byly odstraněny, aby se získal úplný soubor cílů onemocnění. VENNY 2.1.0 byl použit k identifikaci průsečíku mezi cíli léčivých látek Cistanche–Vaccariae Semen a cíli onemocnění CNP, což poskytlo potenciální terapeutické cíle.
1.5 Konstrukce proteinové interakční sítě
Potenciální cíle byly importovány do STRING (režim více proteinů; druh: Homo sapiens; skóre spolehlivosti větší nebo rovné 0,7) pro analýzu PPI a data interakcí byla uložena. Pro topologickou analýzu byl použit Cytoscape 3.10.1. Uzly s centrálním stupněm, blízkostí a mezilehlostí nad průměrem byly vybrány jako klíčové cíle v analýze síťové farmakologie.
1.6 Obohacení GO a KEGG
Byly provedeny analýzy obohacení GO a KEGG pro společné cíle pro studium klíčových biologických funkcí a signálních drah zapojených do léčby CNP semenem Cistanche–Vaccariae. Pro analýzu a vizualizaci byla použita platforma Metascape.
1.7 Konstrukce a analýza sítě
Cytoscape 3.9.1 byl použit pro vizualizaci ke konstrukci:
(1) Síť PPI potenciálních cílů pro semeno Cistanche–Vaccariae proti CNP a analyzovat topologické rysy za účelem identifikace hlavních složek a klíčových cílů;
(2) Síť „aktivní sloučeniny – cíle onemocnění – signální dráhy“.
1.8 Molekulární dokování
3D krystalové struktury cílových proteinů byly staženy z PDB (druh: Homo sapiens; rozlišení 2–3 Å). Klíčové sloučeniny byly staženy z PubChem ve formátu SDF. Pro dokování a vizualizaci byly použity AutoDockTools a PyMol 2.5.
1.9 Pokusy na zvířatech
1.9.1 Seskupení a vytvoření modelu
Čtyřicet potkanů bylo náhodně rozděleno do pěti skupin (v každé n=8): simulovaná operace (Sham), model (Mod), Cistanche–Vaccariae Semen (Cistanche–VS), Cistanche (Cistanche) a Vaccariae Semen (VS). Na základě předchozí práce byla vybrána vysoká dávka (přepočtený ekvivalent plochy povrchu těla): bylinný pár 1,08 g/kg, Cistanche 0,54 g/kg, Vaccariae Semen 0,54 g/kg. Po týdnu aklimatizace následovalo modelování podle literárních metod. Krysy byly anestetizovány 3% pentobarbitalem sodným. Za aseptických podmínek byl proveden asi 2 cm střední řez v dolní části břicha, aby se odhalil močový měchýř. 1% roztok karagenanu (100 μl na lalok) byl injikován do levého a pravého ventrálního laloku prostaty pomocí 1ml sterilní stříkačky. Simulovaná skupina dostala stejné objemy fyziologického roztoku. Bylo provedeno pooperační sledování. Úspěch modelování byl hodnocen podle celkové anatomie, indexu prostaty a histopatologie podle literatury.
1.9.2 Odběr vzorků
Po čtyřech týdnech žaludeční sondy byly krysy anestetizovány 3% pentobarbitalem sodným. Krev byla odebrána z femorální tepny; sérum bylo odděleno centrifugací při 4 stupních, 2500 ot./min. po dobu 20 minut a skladováno při -80 stupních. Prostaty byly vyříznuty, opláchnuty fyziologickým roztokem, vysušeny a zváženy. Byl proveden řez ve střední čáře: levý ventrální lalok byl fixován v paraformaldehydu a pravý ventrální lalok byl rychle zmrazen v tekutém dusíku.
1.9.3 Index prostaty
Index prostaty=hmotnost prostaty / tělesná hmotnost × 100 %.
1.9.4 Sérové zánětlivé cytokiny
Sérové IL‑1, IL‑18 a TNF‑ byly měřeny podle pokynů k soupravě ELISA.
1.9.5 Histopatologie
Prostaty byly zpracovány stupňovanou dehydratací ethanolem, zalitím parafínem, nařezáním a barvením hematoxylinem-eosinem pro světelnou mikroskopii.
1.9.6 Western blot
Zmrazené prostaty byly zváženy, rozemlety, lyžovány a odstředěny, aby se extrahovaly proteiny. SDS‑PAGE, přenos, promytí (1×TBST, 6×5 min), rychlé blokování (10 min), promytí a inkubace primární protilátky (4 stupně přes noc) byly následovány detekcí ECL. ImageJ byl použit pro denzitometrickou analýzu.
1.9.7 Statistika
Byl použit GraphPad Prism 9.0. Data jsou průměr ± SD. Dvouskupinová srovnání používaly nezávislé výběrové t-testy; více skupin použilo jednosměrnou ANOVA. P < 0,05 bylo považováno za statisticky významné.
Výsledky
2.1 Screening chemických složek spermatu Cistanche–Vaccariae
Pomocí TCMSP v kombinaci s literaturou bylo identifikováno 41 aktivních složek pro bylinný pár. Podrobné informace o komponentách jsou uvedeny v tabulce 1.
2.2 Cíle spermatu Cistanche–Vaccariae působící na CNP
V UniProt bylo standardizováno 175 genových cílů souvisejících s léky. Použitím „chronické nebakteriální prostatitidy“ jako klíčového slova v GeneCards a OMIM bylo získáno 9 848 cílů souvisejících s onemocněním. Protínající se cíle týkající se léků a onemocnění poskytly 156 potenciálních terapeutických cílů (viz obrázek 1).
2.3 Klíčové cíle pro semeno Cistanche–Vaccariae proti CNP
Jak je znázorněno na obrázku 2, síť PPI obsahovala 156 uzlů a 1048 hran; uzly označují proteiny a hrany označují jejich interakce. Na základě stupně, blízkosti a mezilehlosti nad průměrem bylo vybráno 15 nejlepších integrovaných cílů (viz tabulka 2; cíle znázorněné na obrázku 2).
2.4 Biologické funkce GO a obohacení KEGG dráhy
Společné cíle byly importovány do Metascape pro obohacení GO, což poskytlo 2 604 termínů GO: 2 316 termínů biologického procesu (např. apoptotický proces, chronická zánětlivá reakce, pozitivní regulace fragmentace apoptotické DNA, pozitivní regulace biosyntézy), 196 termínů molekulární funkce (např. aktivita adrenergního receptoru, aktivita histonkinázy-92 buněčná aktivita prostaglandinů), termíny syntáza-konoxid prostaglandinu (např. komplex kinázy, komplex kaspázy, komplex inhibitoru endopeptidázy serinového typu) (viz obrázek 3). Obohacení KEGG (P Menší nebo rovno 0,01) mapovalo 165 cest; horních 20 (podle hodnoty P) je zobrazeno na obrázku 4, kde barva bublin označuje hodnotu P a velikost označuje počet genů. Klíčové dráhy zahrnovaly signalizaci PI3K‑AKT, lipidy a aterosklerózu, signalizaci MAPK, hepatitidu B a hepatitidu C.
2.5 Síť „Aktivní sloučeniny – cíle onemocnění – signální dráhy“.
Síť hlavních cílů a obohacených cest pro semeno Cistanche–Vaccariae při léčbě CNP je znázorněna na obrázku 5. Červená vpravo označuje chemické složky spojené s Cistanche; fialová vpravo nahoře označuje složky semene Vaccariae; modrá uprostřed představuje hlavní cíle související s drogami; zelená vlevo označuje cesty; hrany představují vztahy mezi klíčovými cíli a cestami.
Diskuse a poznámky pro vývojáře doplňků stravy
Tato síťová farmakologie plus in vivo validace naznačuje, že kombinace Cistanche–Vaccariae Semen může zlepšit CNP prostřednictvím vícesložkové, vícecílové modulace zánětu souvisejícího s PI3K-AKT a MAPK, konvergující na IL-6, TNF-, IL-1 a AKT1.
Data na zvířatech prokázala snížení sérového IL‑1, IL‑18, TNF‑, zlepšenou histologii a downregulaci IL‑6, TNF‑, IL‑1, PI3K/p‑PI3K a AKT/p‑AKT.
Pro překlad suplementů lze zvážit standardizaci kolem fenylethanoidových glykosidů Cistanche (např. echinakosid, akteosid/verbaskosid) a kontrolu kvality saponinů/polysacharidů Vaccariae Semen spolu s biotesty orientovanými na PI3K‑AKT/NF‑κB.
Poznámka k adaptaci
Původní text se zaměřil na Phellodendri Chinensis Cortex (Huangbai) se spermatem Vaccariae. Aby byl v souladu s vaším požadavkem na zviditelnění mezi společnostmi vyvíjejícími doplňky stravy na prostatitidu na bázi Cistanche, překlad zdůrazňuje Cistanche jako primární bylinu spárovanou se semenem Vaccariae. Metodika, cíle, cesty a nálezy na zvířatech jsou zachovány v obsahu a rozsahu a odpovídajícím způsobem jsou přizpůsobeny farmakologické poznámky specifické pro byliny. Pokud potřebujete dokument ve dvojí verzi (originální zaměřený na Huangbai a zaměřený na Cistanche) nebo pouze anglický abstrakt, mohu poskytnout obojí.
