Polysacharidy Cistanche inhibují proliferaci buněk rakoviny prostaty a indukují apoptózu prostřednictvím tvorby ROS a potlačení antioxidačních genů
Jun 10, 2025
Abstraktní:
Objektivní:Prozkoumat účinky a základní mechanismyCistanche polysacharidyna proliferaci a apoptózebuňky rakoviny prostaty.
Metody:
Buňky lidské rakoviny prostaty DU145 byly ošetřeny nízkými, středními a vysokými koncentracemiCistanche polysacharidy(20, 40 a 80 mg/ml, v daném pořadí). Buněčná proliferace byla hodnocena pomocíMTT testa apoptóza byla hodnocena pomocíprůtoková cytometrie. Intracelulárníreaktivní formy kyslíku (ROS)hladiny byly měřeny průtokovou cytometriíglutathion (GSH)hladiny byly stanoveny pomocíELISA. Hladiny exprese mRNA a proteinůkatalytická podjednotka glutamát-cystein ligáza (GCLC), podjednotka modifikátoru glutamát-cystein ligázy (GCLM)athioredoxin reduktáza 1 (TXNRD1)byly analyzovány podleRT-PCRaWestern blot, resp.
Výsledky:
Polovina maximální inhibiční koncentrace (IC50)Cistanche polysacharidyna buňkách DU145 byla 40,35 mg/ml, takže 40 mg/ml bylo vybráno jako dávka média pro následující experimenty. Nízké, střední a vysoké dávky byly definovány jako 50 %, 100 % a 200 % IC50, v daném pořadí.
Všechny léčebné skupiny vykazovaly významně zvýšenou míru apoptózy ve srovnání s kontrolní skupinou. Theskupina s vysokou dávkou Cistanchevykazovaly největší inhibici buněčné proliferace a nejvyšší míru apoptózy, následované skupinami se střední a nízkou dávkou (P< 0,01). Hladiny ROS byly významně zvýšené a hladiny GSH byly u všech významně sníženySkupiny ošetřené cistancheversus kontrola. Zejména,skupina s vysokou dávkouměly výrazně vyšší ROS a nižší hladiny GSH než skupiny se střední a nízkou dávkou (P< 0,05); skupina se střední dávkou vykazovala podobné rozdíly ve srovnání se skupinou s nízkou dávkou (P< 0,05).
Úrovně vyjádřeníGCLC, GCLMaTXNRD1(jak mRNA, tak protein) byly významně downregulovány ve všech skupinách léčených Cistanche ve srovnání s kontrolou (P< 0,05). Theskupina s vysokou dávkouprokázaly nejvýznamnější potlačení těchto genů a proteinů souvisejících s antioxidanty, následované skupinami se střední a nízkou dávkou (P< 0,05).
Závěr:
Cistanche polysacharidyinhibují expresi antioxidačních faktorůGCLC, GCLMaTXNRD1, čímž se snížíSyntéza GSH, propagaciakumulace ROSa nakonec přimějeapoptóza v buňkách rakoviny prostaty. Tato zjištění tomu nasvědčujíCistanchemůže sloužit jako apřírodní terapeutické činidlopro rakovinu prostaty prostřednictvímmechanismy zprostředkované oxidativním stresem.
Extrakt z cistanche s vysokým obsahem polysacharidů
Podpůrná služba Wecistanche – kontaktujte nás a získejte velkoobchodní cenu
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Pozadí a metody
Rakovina prostatyodpovídá přibližně7,1 % všech mužských malignit, přičemž vrchol incidence nastává po 60. roce věku. Vzhledem k tomu, že čínská populace stále stárne, očekává se, že výskyt tohoto onemocnění dále poroste [1]. Studie naznačují, že vysoká prevalence rakoviny prostaty u starších mužů může souviset sdegenerativní změny v prostatě, genetická predispozice, dietní návykyafaktory životního stylu [2].
Chirurgická resekcezůstává základem léčby rakoviny prostaty s cílem odstranit většinu nádorové hmoty. Je však spojena se značnými komplikacemi, jako je kupřinkontinence moči, sexuální dysfunkcea co je nejdůležitější,recidivy a metastázy nádoru, které jsou hlavními příčinami špatné prognózy [3].
v posledních letechTradiční čínská medicína (TCM)získává stále větší pozornost pro svou roli v léčbě rakoviny. TCM může pomociposílit imunitu, působí proti vedlejším účinkům chemoterapie/radioterapieaposílit detoxikaci. Vystavují i některé léčivé bylinypřímé protinádorové vlastnostivčetně inhibice růstu nádoru aindukce apoptózy v rakovinných buňkách [4].
Mezi tytoCistanche (Cistanche deserticola)je tradiční tonizující bylina známá pro svéimunomodulační, antioxidačníaprotinádorové účinky. Jeho hlavní bioaktivní složky jsoupolysacharidyafenylethanoidové glykosidy. Tato studie zkoumá účinky a základní mechanismusCistanche polysacharidynaproliferace a apoptóza buněk rakoviny prostaty DU145.
1. Materiály a metody
1.1 Hlavní materiály a činidla
DU145 lidské buňky rakoviny prostatybyly získány od Tongpai Biotech (Shanghai, Čína).
Cistanche polysacharidy(Č. šarže: 0287181) byly zakoupeny od Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, Čína).
Fetální hovězí sérum, penicilin/streptomycinaDMEMposkytla společnost Zeta Life (USA).
MTT test, Soupravy pro apoptózu annexinu V/PI, RIPA lyzační pufr, Soupravy pro kvantifikaci proteinů BCAbyly získány od Elabscience (Shanghai, Čína).
Souprava pro detekci reaktivních forem kyslíku (ROS).aGSH ELISA soupravybyly zakoupeny od BioLab (Shanghai, Čína).
Trizol činidlo, soupravy pro reverzní transkripciaPCR soupravybyly získány od společnosti NeuroSym (Hangzhou, Čína).
Protilátky protiGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktina odpovídající sekundární protilátky byly zakoupeny od UnivBio (Shanghai, Čína).
1.2 Test buněčné kultury a proliferace
Buňky DU145 byly kultivovány vDMEM doplněný 10 % FBS a 1 % penicilin/streptomycinv CO₂ inkubátoru. ProMTT testbuňky DU145 s logaritmickou fází byly nasazeny do 96jamkových destiček a ošetřenyRoztoky polysacharidů Cistanchepři koncentracích10, 20, 40 a 80 mg/ml. Kontrolní skupina dostávala pouze médium DMEM.
Po 24 hodinách léčby,20 ul 5 mg/ml MTTDo každé jamky bylo přidáno a inkubováno po dobu 4 hodin. Supernatant byl odstraněn a150 ul DMSObylo přidáno. Po protřepávání po dobu 10 minut byla měřena absorbance při490 nmpomocí čtečky mikrodestiček. TheIC50byla vypočtena a20, 40 a 80 mg/mlbyli vybráni jakonízké, střední a vysoké dávkypro následné experimenty. Therychlost inhibice buněčné proliferacebyla vypočtena jako:
Míra inhibice (%)=(OD_kontrola - OD_léčená) / OD_kontrola × 100
1.3 Test apoptózy
Log-fáze DU145 buňky byly ošetřeny různými koncentracemiCistanche polysacharidypodle seskupení. Po fixaci a obarvení,Annexin V-FITCaPIbyly použity ke značení apoptotických buněk.Průtoková cytometriebyla provedena pro detekci fluorescenčních signálů a bylo zaznamenáno procento apoptotických buněk.
1.4 Detekce intracelulárních hladin ROS a GSH
Hladiny ROS byly měřeny pomocí aROS fluorescenční sondaa průtokovou cytometrií. Hladiny GSH byly kvantifikovány pomocíELISA. A standard curve was prepared using known concentrations of GSH standards, and absorbance was measured to calculate GSH concentrations in samples.
1,5 RT-PCR pro expresi mRNA GCLC, GCLM, TXNRD1
Celková RNA byla extrahována pomocíTrizola byla syntetizována cDNA. PCR byla provedena pomocí specifických primerů:
GCLC:
Vpřed: 5'-GTCGGTGTCAAATACGGAGTTCCA-3'
Reverzní: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'
GCLM:
Vpřed: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'
Reverzní: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'
TXNRD1:
Vpřed: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'
Reverzní: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'
- aktin (vnitřní kontrola):
Vpřed: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'
Reverzní: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'
Podmínky zesílení: 95 stupňů po dobu 60 s, následuje 30 cyklů 95 stupňů po dobu 30 s, 60 stupňů po dobu 30 s a 72 stupňů po dobu 60 s. Produkty PCR byly analyzovány pomocígelová elektroforézaa relativní genová exprese byla normalizována na-aktin.
1.6 Western blotting pro expresi proteinu
Celkový protein byl extrahován pomocíRIPA pufra koncentrace proteinu byla stanovena pomocíBCA test. Proteiny byly odděleny pomocíSDS-PAGE, převedeno naPVDF membrány, blokovány a inkubovány přes noc při 4 stupních s primárními protilátkami protiGCLC, GCLM, TXNRD1a-aktin. Po inkubaci sSekundární protilátky konjugované s HRP, pásy byly vizualizovány pomocíchemiluminiscencea kvantifikovánoSoftware ImageJ.
1.7 Statistická analýza
Všechna data byla analyzována pomocíSPSS 25.0. Jednosměrná ANOVA aLSD-t testybyly použity ke stanovení statistické významnosti.
