Polysacharidy Cistanche Deserticola mají neuroprotektivní účinek

další informace:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu a kol

Abstraktní:

Ischemická cévní mozková příhoda je onemocnění s vysokou morbiditou a mortalitou.Cistanchedeserticolapolysacharidy(CDP) má širokou škálu příznivých účinků, včetně hepatoprotekce a imunitní homeostázy. Pokud víme, ochranný účinek CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)na neuronech poraněných nedostatkem kyslíku a glukózy/reperfuzí (OGD/RP) nebyl zkoumán. V této studii poškodil OGD/RP buněčný model PC12. Stručně řečeno, CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) byl podán před reperfuzí. Ochranný účinek CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)byl poté hodnocen na základě buněčné životaschopnosti, úniku laktátdehydrogenázy (LDH), [Ca2 plus] I, potenciálu mitochondriální membrány (MMP) a buněčné apoptózy, andredoxního stavu po reperfuzi byl hodnocen testováním reaktivních forem kyslíku (ROS), katalázy ( CAT), glutathionperoxidázou (GSH-Px) a celkovou antioxidační kapacitou. Na základě skutečnosti, že protein DJ-1 spojený s Parkinsonovou chorobou se účastní endogenní antioxidace a provádíneuroprotektivníúčinky po ischemické mrtvici jsme zkoumali interakci mezi CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)a DJ{{0}}. Exprese DJ-1 byla detekována pomocí ELISA a analýzy Western blot a translokace DJ-1 byla hodnocena pomocí imunofluorescence. Výsledky ukázaly, že CDP (0,05, 0,5 a 5 ug/ml) zeslabil buněčnou smrt PC12, zachoval homeostázu MMP a vápníku; inhibuje oxidační stres a snižuje apoptózu buněk. Kromě toho CDP (5 ug/ml) výrazně stimuloval sekreci a expresi DJ{10}}. Celkově výsledky naznačovaly, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)vynakládá aneuroprotektivníúčinek proti poranění vyvolanému OGD/RP inhibicí oxidačního stresu a regulací DJ-1 dráhy

klíčová slova:Cistanche deserticola, Polysacharidy, Neuroprotektivum, Kyslíková glukózová deprivace/reperfuze, Oxidační stresDJ-1

Klikněte na produkty Cistanche UK

1. Úvod

Ischemická cévní mozková příhoda je celosvětově druhou hlavní příčinou mortality a primární příčinou dlouhodobé invalidity [1]. Očekává se, že počet úmrtí na mrtvici vzroste v roce 2030 na 7,8 milionu [2]. V Číně zemře každý rok na mrtvici 58 až 142 ze 100000 lidí. Musí být tedy vyvinuty účinné strategie, které zvrátijí ischemicko-reperfuzní poškození. Rozsáhlé důkazy podporují, že oxidační stres je hlavním faktorem, který podporuje rozvoj a progresi mozkového infarktu během reperfuze [3,4]. Proto objevování efektivníneuroprotektivníČinidla schopná snižovat ROS a potlačovat oxidační stres přitáhla značný zájem ve výzkumu. Protein DJ-1 spojený s Parkinsonovou nemocí zprostředkovává neuroprotekci stimulací antiapoptotické a antioxidační genové exprese [4,5]. DJ-1 může být translokován do mitochondrií oxidačním stresem a mitogenní stimulací a může být vylučován do extracelulární matrix za patologických podmínek, jako je rakovina prsu, melanom a poranění OGD/RP [6]. Kromě toho je DJ-1 užitečný v terapeutickém cílení pro ischemickou neurodegeneraci kvůli své kritické roli v antioxidaci [4,7]. Za posledních 10 let několik skupin potvrdilo, že DJ-1 anoneuroprotektivníúčinky na in vivofokální modely cerebrální ischemie a in vitro OGD/RP modely [6–9]. Mezitím některé léky, včetně cyklosporinu A a fenylbutyrátu sodného, ​​ruší smrt neuronových buněk prostřednictvím DJ-1 upregulace inischemická mrtvice [9,10 ].

Cistanchedeserticola, integrální sušená rostlinaCistanchedeserticolaYCMa a Cistanche tubulosa Wight se vyrábí především v pouštních oblastech severní a severozápadní Číny [11]. C. deserticola je jedlá a byla považována za „ženšen pouští“. Při předepisování akupunkturních bodů se zánět používá jako léčba chronického onemocnění ledvin, sexuální impotence, ženské neplodnosti, leukorey, metroragie a stařecké zácpy [12].C. deserticola polysacharidy, hlavní aktivní složka izolovaná zCistanche deserticola. CDP, moduluje imunitní funkci a rovnováhu lipidů a poskytuje ochranu proti stárnutí, oxidaci a poškození jater. Navíc CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)zabraňuje ischemicko-reperfuznímu poškození srdce a jater [13,14]. Nedávné studie uvedly, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)jsou netoxické[12,15,16] a další fytochemikálie extrahované z C. Deserticola, včetně echinakosidu, isoakteosidu, akteosidu a salidrosidu, vykazujíneuroprotektivníúčinky [11,12]. Potenciální použití CDP pro zmírnění poškození ischemickou cévní mozkovou příhodou však dosud nebylo popsáno.

V této studii předpokládáme, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)inhibuje oxidativní stres pro neuroprotekci. Potenciální ochranné účinky CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)poškození inischemickou mrtvicí bylo zkoumáno s použitím buněk PC12 poškozených OGD/RP. Poté byly prozkoumány základní interakce spojené s DJ-1.

2. Metody

2.1. Buněčná kultura a OGD/RP model

Buňky PC12 byly kultivovány v médiu RPMI 1640 obsahujícím 10 procent FBS při 37 stupních v normoxickém inkubátoru obsahujícím 5 procent C02. Médium bylo vyměňováno každých 48 hodin. Byl připraven OGD/RP model. Buňky PC12 byly promyty a vystaveny Earleově vyváženému solnému roztoku. Poté byly buňky přeneseny do anaerobní komory obsahující 5 procent CO2 a 95 procent N2 při 37 stupních po dobu 4 hodin a poté byly ponechány podstoupit reoxygenaci. Během tohoto kroku byl k buňkám přidán stejný objem kultivačního média. Po reoxygenaci byly buňky umístěny na 24 hodin do normoxického inkubátoru.

2.2. Podávání léků

CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)byl zakoupen od Yuanye Biological Technology Co., Shanghai, Čína (C23J7Y18405, > 98 procent čistota). Jako pozitivní kontrolní sloučenina byl použit nimodipin, lék první volby na prevenci ischemické cévní mozkové příhody [17–19]. Injekce nimodipinu byla od Bayer Company. Buňky byly náhodně rozděleny do šesti skupin, jmenovitě kontrolní, vehikulum (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)(0,05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)(0,5 ug/ml) a CDP (5 ug/ml). nimodipin a CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)byly přidány před reperfuzí. Kontrolní skupina byla kultivována v normálním médiu a inkubována za normoxických podmínek.

2.3. Životaschopnost buněk: MTT a NRU testy

Buňky PC12 (6 x 103 na jamku) byly nasazeny do 96-jamkové kultivační destičky. Buňky byly ošetřeny v souladu s požadavky každé skupiny. K buňkám byl přidán MTT (Solarbio, Čína) v koncentraci 5 mg/ml a inkubovány po dobu 4 hodin při 37 stupních. Formazan je produktem redukce sukcinátdehydrogenázy v živých buňkách [20]. K rozpuštění vzniklého modrého formazanu byl přidán DMSO. Absorbance při vlnové délce 490 nm byla detekována pomocí Microplate Reader (Thermo, USA) poté, co byly buňky třepány po dobu 10 minut při 25 stupních. Výsledky buněčné životaschopnosti se projevily jako procento kontrolní skupiny [21].

Test neutrálního vychytávání červeně (NRU) byl proveden podle dříve publikovaného protokolu [22]. Když byly reperfuzní periody dokončeny, byla k buňkám přidána neutrální červeň (Solarbio, Čína) v koncentraci 50 ug/ml. Směs byla inkubována po dobu 3 hodin. Poté byly buňky rychle promyty roztokem obsahujícím 0,5 procenta formaldehydu a 1 procento chloridu vápenatého. Buňky byly následně přidány do směsi obsahující 1 procento kyseliny ethylové a 50 procent bezvodého ethanolu. Destičky byly odečteny při absorbanci 540 nm poté, co byly buňky třepány po dobu 20 minut při 37 stupních. Výsledky buněčné životaschopnosti se projevily jako procento kontrolní skupiny.

Polysacharidy Cistanche deserticolamítNeuroprotektivní účinek

2.4. Hodnocení cytotoxicity

LDH je cytoplazmatický enzym katalyzující oxidaci laktát topyruvátu. LDH se rychle uvolňuje do extracelulární tekutiny, když je buněčná membrána poškozena. Proto se detekce LDH obvykle provádí pro hodnocení cytotoxicity. [23]. Experimentální postup se řídil instrukcemi komerční soupravy dodávané soupravou pro stanovení LDH (Jiancheng, Čína). Absorbance každého vzorku byla detekována při 440 nm pomocí čtečky mikrodestiček. Procento buněčné smrti bylo vypočteno pomocí následujícího vzorce: Životaschopnost (procenta)=(OD ošetření - ODT ošetření slepý pokus)/(OD Max LDH aktivita - OD Max LDH slepý pokus) × 100 procent.

2.5. Detekce intracelulární koncentrace Ca2 plus

Intracelulární koncentrace Ca2 plus byla měřena pomocí Fluo-3/AM [15]. Buňky PC12 byly třikrát promyty PBS a poté inkubovány s 2 uM Fluo{5}}/AM (Beyotime, Čína) po dobu 30 minut při 37 stupních ve tmě. Buňky byly poté třikrát promyty PBS pro odstranění extracelulárního barviva. Intenzita fluorescence Fluo{8}}/AM byla stanovena na laserovém skenovacím konfokálním mikroskopu (Olympus, Japonsko). Softwarový balík Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer a ImageJ byly použity pro výpočet hodnot šedé stupnice

2.6. Měření MMP

JC{0}} (5,5′,6,6′-tetrachlor-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidakarbocyanin; Beyotime, Čína) je pohodlná napěťově citlivá sonda obecně používaná pro barvení buněk a hodnocení MMP [24]. Buňky PC12 byly dvakrát promyty studeným PBS a poté inkubovány se směsí obsahující 50 procent média a 50 procent pracovní kapaliny po dobu 15 minut při 37 stupních ve tmě. Poté byla směs odstraněna a nahrazena čerstvým médiem. Červené a zelené fluorescenční obrazy byly zachyceny laserovou skenovací konfokální mikroskopií. Pro měření MMP byl použit relativní podíl červených a zelených fluorescenčních signálů [25]. Pro výpočet hodnot ve stupních šedi byl použit softwarový balíčekOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer a ImageJ.

2.7. Test detekce apoptózy, Hoechest33342, a analýza průtokovou cytometrií

Hoechst33342, barvivo vázající DNA, bylo použito pro vyšetření buněčné apoptózy [26]. Po reperfuzi byly buňky PC12 třikrát promyty PBS a inkubovány s Hoechst33342 (Beyotime, Čína) v koncentraci 5 ug/ml po dobu 15 minut při 37 stupních ve tmě. Poté byly buňky pozorovány pod laserovým skenovacím konfokálním mikroskopem. Theapoptotické buňky vykazovaly intenzivní modrou fluorescenci a kondenzaci jádra. Pro každý experiment barvení byla zachycena a kvantifikována tři náhodná pole. Pro výpočet hodnot šedé stupnice byly použity Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer a ImageJ. Procenta apoptotických buněk byla vypočtena pomocí následujícího vzorce: apoptotické množství/celkové množství × 100 procent [27].

2.8. Měření tvorby ROS

Fluorescenční sonda 2′,7′-dichlorfluorescein-diacetát (DCFH-DA;Jiancheng, Čína) může pronikat buněčnými membránami a může být hydrolyzována na nefluorescenční DCFH. DCFH je oxidován intracelulárním ROS na fluorescenční DCF [29]. Po reperfuzi byly buňky dvakrát promyty PBS a poté inkubovány s DCFH-DA v konečné koncentraci 10 uM po dobu 45 minut při 37 stupních ve tmě. Fluorescence byla pozorována afluorescenčním spektrofotometrem s excitační vlnovou délkou 485 nm a emisní vlnovou délkou 535 nm.

Polysacharidy Cistanche deserticolamítNeuroprotektivní účinek

2.9. Stanovení indikátorů oxidačního stresu: hladiny CAT, GSH-Px a T-AOC

Buňky byly seškrábány a resuspendovány v PBS. Získané buněčné suspenze byly sonikovány 45krát na ledu a centrifugovány při 1000 ot./min po dobu 10 minut při 4 stupních. Supernatanty byly uchovány a použity k detekci [24]. Celkový obsah proteinu v buněčném supernatantu byl měřen pomocí reagenční soupravy pro analýzu proteinů BCA (KeyGEN, Čína). Aktivita hladin CAT, GSH-Px a T-AOC byla měřena podle pokynů výrobce (Jiancheng, Čína). Absorbance každého vzorku byla detekována čtečkou mikrodestiček.

2.10. Měření extracelulární DJ-1 koncentrace

Buňky PC12 (6 × 103 na jamku) byly nasazeny na 96-jamkové kultivační destičky. Po reperfuzi byl buněčný supernatant shromážděn a analyzován soupravou DJ{4}}/PARK-7 ELISA Kit (Raybio, USA ) podle návodu výrobce [9]. Absorbance každého vzorku byla detekována pomocí Microplate Reader při duální vlnové délce 450 nm nebo 540 nm.

2.11. Western blot analýza

Buněčné proteiny byly extrahovány ledově chladným lyzačním pufrem podle pokynů výrobce (KeyGEN, Čína). Koncentrace proteinu byla stanovena pomocí reagenční soupravy pro analýzu proteinů BCA. Stejná množství proteinových lyzátů (20 ug) z každé skupiny byla rozdělena elektroforézou na 12% dodecylsulfátu sodného-polyakrylamidovém gelu a následně přenesena na nitrocelulózovou membránu. Membrána byla inkubována s PBS obsahujícím 5 procent odstředěného mléka po dobu 2 hodin při teplotě místnosti a poté sondována s anti-PARK7/DJ-1 protilátkami (ab76008, Abcam; ředění 1:1000) přes noc při 4 stupních. Poté byla membrána třikrát promyta PBST a inkubována se sekundární protilátkou kozí anti-králičí IgG (SA00001-2, Proteintech Group; ředění 1:5000) při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Protilátka anti- -tubulin (10759-1-AP, Proteintech Group; ředění 1:1000) byla považována za kontrolu. Proteinové pásy byly vizualizovány reakčními činidly zesílené chemiluminiscence (ECL). Hustoty pásů byly měřeny pomocí softwaru QuantityOne Analysis v.4.6.9.

2.12. Imunocytochemická analýza

Po reperfuzním ošetření byly buňky PC12 fixovány ve 4% paraformaldehydu po dobu 15 minut při pokojové teplotě [9]. Po odstranění nadměrného množství paraformaldehydu byly buňky inkubovány v PBS obsahujícím 0,3 % Triton X-100 po dobu 10 minut při teplotě místnosti. Poté byly buňky třikrát promyty PBS a poté byly inkubovány s 5% normálním kozím sérem po dobu 1 hodiny. Buňky pak byly inkubovány s králičím myším monoklonálním anti-ATP syntázovým řetězcem (MABS1304, EMD Millipore, ředění 1:200) pro barvení mitochondrií a následně inkubovány s anti-PARK7/DJ-1 protilátkou (ředění 1: 100) pro testování proteinového DJ-1. Buňky byly promyty a inkubovány s kozím anti-králičím IgG-Alexa 488 (zelená; A11034, Invitrogen; ředění 1:1000) a kozím anti-myším IgG-Alexa 594 (červená; A11032; Invitrogen; ředění 1:1000) po dobu 90 min. Nakonec byly buňky třikrát promyty PBS a upevněny na sklíčka s montážním médiem obsahujícím DAPI. Imunofluorescenční obrazy byly vizualizovány pomocí laserového skenovacího konfokálního mikroskopu.

Polysacharidy Cistanche deserticolamítNeuroprotektivní účinek

2.13. Data/statistická analýza

Všechny hodnoty byly uvedeny jako průměr ± SD. Významnost byla stanovena jednosměrnou analýzou rozptylu (ANOVA), po níž následoval Dunnettův multi-srovnávací test. p < 05="" bylo="" považováno="" za="" statistickou="" významnost.="" experimentální="" data="" byla="" analyzována="" pomocí="" statistického="" softwaru="" spss="">

3. Výsledky

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)inhibovaly poškození buněk indukované OGD/RP

Buňky PC12 vystavené působení OGD/RP vykazovaly významné snížení počtu. Tvar buňky byl změněn a buněčná membrána byla porušena. V testu MTT životaschopnost buněk v CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) byly 58,91 procenta ± 5,40 procenta, 61,13 procenta ± 3,81 procenta a 68,57 procenta ± 3,24 procenta v tomto pořadí, p < 0,05="" (obr.="" 1a)="" a="" to="" s="" vozidlem="" mělo="" 51,68="" procenta="" ±="" 3,89="" procenta.="" tyto="" hodnoty="" naznačovaly,="" že="">(Cistanchedeserticolapolysacharidy)chránila buňky před poškozením OGD/RP a snižovala buněčnou smrt. Kromě toho byla životaschopnost buněk ve skupině Nimo 77,02 procenta ± 5,22 procenta, což je téměř stejné jako u 5 ug/ml CDP.(Cistanchedeserticolapolysacharidy)léčená skupina.

V testu NRU životaschopnost buněk v CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) byly 52,03 procenta ± 4,72 procenta, 58,49 procenta ± 2,50 procenta a 69,17 procenta ± 3,91 procenta, v tomto pořadí, (obr. 1B) a to s vozidlem měl 47,14 procenta ± 2,88 procenta. Hodnoty ukazovaly na koncentraci závislý ochranný účinek CDP.

Na rozdíl od vozidla (44,73 procenta ± 3,30 procenta) bylo uvolňování LDH významně sníženo v CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny. V CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml), míry úniku LDH byly 32,41 procenta ± 3,70 procenta, 27,13 ± 2,79 procenta a 23,13 procenta ± 4,59 procenta v tomto pořadí, p < 0,01="" (obr.="" 1c).="" navíc="" míra="" úniku="" ldh="" ve="" skupině="" nimo="" byla="" 21,99="" procenta="" ±="" 4,02="" procenta,="" což="" bylo="" téměř="" stejné="" jako="" ve="" skupině="" léčené="" 5="" ug/ml="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)atenuovaný OGD/RP-indukovaný nárůst [Ca2 plus]i

Hladiny intracelulárního Ca2 plus v buňkách PC12 byly zvýšeny na 4146,60 ± 195,97 po poškození OGD/RP na rozdíl od kontrolní skupiny (373,62 ± 75,69). CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) mohly v závislosti na dávce snížit hladinu intracelulárního Ca2 plus na 2921,25 ± 222,19, 2015,85 ± 230,53 a 1768,43 ± 426,12 A, resp. ). Kromě toho se hladina Ca2 plus ve skupině léčené 5 ug/ml CDP snížila na hladinu srovnatelnou s hladinou ve skupině Nimo (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)atenuovaný OGD/RP-indukovaný rozptyl MMP

Ve srovnání s kontrolní skupinou (1,67 ± 0,89) vykazovala skupina s vehikulem (0,48 ± 0,10) více zelené fluorescence FL než červené FL fluorescence (obr. 2B a D). Poměry mezi červenou a zelenou fluorescencí FL byly sníženy na 1,11 ± 0,26 a 1,18 ± 0,16 v 0,5 a 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)ošetřené skupiny, p < 0,01.="" zelená="" fluorescence="" fl="" byla="" významně="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)zabránil OGD/RP-indukované buněčné apoptóze

Buňky vykazující kondenzované chromatiny nebo fragmentovaná jádra byly hodnoceny jako apoptotické buňky [30]. Výsledky testu Hoechst33342 odhalily výskyt kondenzovaných jader po OGD/RP (obr. 3A a C). Vysoká intenzita fluorescence FL byla pozorována v jádrech ve skupině s vehikulem. Intenzita fluorescence FL jader byla oslabena v 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)léčená skupina. Analyzovali jsme apoptotickou rychlost v buňkách PC12 pomocí cytometrie s použitím dvojitého barvení FITC-Annexin V/PI (obr. 3B a D). Kontrolní skupina měla 4,16 procenta ± 0,24 procenta apoptotické rychlosti buněk, zatímco skupina s vehikulem měla 22,98 procenta ± 0,66 procenta. Ve skupině léčené 5 ug/ml CDP byla míra apoptózy buněk 7.86 procent ± 1,16 procenta.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)zmírnil OGD/RP-indukovanou intracelulární akumulaci ROS a zachoval redoxní stav

Účinky CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)na oxidační stres byly prokázány na základě tvorby ROS, GSH-Px, CAT aktivit a hladin T-AOC. Hladiny ROS v buňkách PC12 poškozených OGD/RP se zvýšily a staly se významně vyššími než v kontrolní skupině (p < 0,01).="" mezitím="" se="" úrovně="" ros="" v="">(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupiny ({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) se snížily způsobem závislým na dávce (p < 0,01;="" obr.="" 4a).="" dále="" cdp="" také="" významně="" zvýšila="" hladiny="" t-aoc="" (p="">< 0,05;="" obr.="" 4b),="" cat="" (p="">< 0,05;="" obr.="" 4c)="" a="" gsh-px="" (p="">< 0,05;="" obr.="" 4d)="" ve="" srovnání="" s="" vehikulem="" skupina.="" aktivity="" endogenních="" antioxidantů="" v="">(Cistanchedeserticolapolysacharidy)skupin přibývalo.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)stimuloval sekreci DJ-1 a zlepšil výraz DJ-1

Byly detekovány změny koncentrace DJ-1 v buněčném supernatantu a odhalily možný vztah mezi DJ-1 a CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy). Uvolňování DJ{0}} bylo pozorováno z buněk PC12 poškozených OGD/RP (obr. 5). DJ-1 byl výrazně zvýšen v 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)-léčená skupina (38,66 ± 8,44 pg/ml) a došlo k signifikantnímu zvýšení než ve skupině s vehikulem (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) a kontrolní skupině (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01) .

Prozkoumat účinky CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)na intracelulární expresi DJ-1 jsme měřili hladiny proteinu DJ-1 pomocí Western blottingu. Hladiny exprese proteinu DJ-1 byly významně zvýšeny 24 hodin po reperfuzi. Naproti tomu 5 ug/ml CDP po léčbě významně zvýšilo nadměrnou expresi DJ-1 ve srovnání se skupinou s vehikulem (p < 0,01,="" obr.="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)vylepšená DJ-1 translokace do mitochondrií

Buňky PC12 byly obarveny protilátkami proti řetězci anti-PARK7/DJ-1 a anti-ATP syntáza (obr. 7 a 8). Protilátka anti-ATP syntáza - řetězec se váže s mitochondriálním komplexem I a vazebný antigen byly lokalizovány ve vnitřní membráně mitochondrií. Výsledky ukázaly, že DJ-1 se translokoval do mitochondriální vnitřní membrány po poškození OGD/RP (obr. 8). Mezitím výsledky dvojitého barvení DJ-1 a mitochondrií odhalily, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)usnadněná DJ- 1 mitochondriální translokace a společná lokalizace (obr. 8). Tyto výsledky naznačovaly přímou interakci mezi DJ-1 aneuroprotektivníúčinek CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)(obr. 9).

4. Diskuze

V této studii jsme z první ruky informovali o CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)účinně snižuje poškození buněk PC12 indukované OGD/RP prostřednictvím upregulace proteinu DJ-1. CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)zlepšená životaschopnost buněk, snížení poškození buněčné membrány, udržení intracelulární Ca2 plus homeostázy, zabránění ztrátě MMP, snížení apoptózy buněk, potlačení oxidačního stresu, podpora exprese DJ-1 a zvýšená translokace DJ-1 do mitochondrií. DJ-1 byl nedávno zapleten do regulaceneuroprotektivníúčinek a mitochondriální integrita. Tyto výsledky poskytly přesvědčivé důkazyneuroprotektivníúčinky CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)proti ischemii. Kromě toho interakce mezi CDP a DJ-1 hraje aneuroprotektivníroli v OGD/RP-indukovaném poškození buněk PC12. Výše uvedené výsledky mohou rozvinout naše chápání příznivého účinku CDP a mohou poskytnout užitečné informace pro budoucí terapii mrtvice.

Ischemická cévní mozková příhoda byla připisována komplexní řadě biochemických a molekulárních mechanismů, včetně excitotoxicity, přetížení vápníkem a oxidačního stresu [31]. OGD/RP je široce používán jako in vitro model ischemie-reperfuze a používá se pro zkoumání neurologických a biochemických změn. Buněčná linie PC12 je citlivá na poškození OGD/RP [2]. Vykazuje řadu vlastností a charakteristik sympatických neuronů [32] a tím široce používaných neuronových buněčných linií pro výzkum související s mechanismy neurologického poškození v důsledku mrtvice [33,34]. Četné studie ukázaly, že oxidační stres hraje zásadní roli při mrtvici a poškození mozkovou ischemií [35–37]. Protein DJ-1 spojený s Parkinsonovou chorobou může inhibovat ischemickou neurodegeneraci a behaviorální dysfunkci snížením poškození neuronů zprostředkovaného ROS [7]. Proto jsme ke zkoumání použili model buněk PC12 poškození OGD/RPneuroprotektivníúčinek CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy).

Stupeň poškození buněk PC12 indukovaného OGD/RP byl hodnocen pomocí testů uvolňování MTT, NRU a LDH. Správa CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)({{0}},05, 0,5 a 5 ug/ml) zlepšilo přežití buněk a snížilo uvolňování LDH. Mezi příznivé účinky léčby CDP patřilo také snížení intracelulárního přetížení vápníkem a zachování MMP. Abnormality intracelulární koncentrace Ca2 plus, zejména přetížení mitochondrií vápníkem, byly spojeny s apoptózou neuronů a smrtí způsobenou ischemickou mrtvicí [38]. MMP může odrážet účinnost elektronového transportního řetězce a byla indikována jako index patologické poruchy tohoto systému [39]. Jak zvýšení intracelulární koncentrace Ca2 plus, tak ztráta MMP mohou vést k destabilizaci struktury neuronů a nakonec vést k poškození buňky nebo buněčné smrti [21,40]. V této studii výsledky ukázaly, že CDP významně inhibuje intracelulární přetížení Ca2 plus a zvyšuje hladiny MMP v buňkách PC12 s poškozením OGD/RP. Apoptóza hraje zásadní roli v komplexní patofyziologii cerebrálního ischemicko-reperfuzního poškození. Rostoucí údaje naznačují, že apoptóza se podílí na mitochondriální dysfunkci; disipace MMP je časným jevem vedoucím k buněčné apoptóze [8,39]. Apoptóza je proces programované buněčné smrti závislé na energii za účelem odstranění nadbytečných buněk. Mnoho neuronů v ischemickém iktu podstoupí apoptózu [41]. V této studii jsme provedli barvení Hoechst33342 a Annexin V-FITC/PI, abychom prozkoumali účinek CDP na apoptózu [23,28]. Výsledky ukázaly, že CDP udržuje integritu jádra a snižuje rychlost buněčné apoptózy. Všechny tyto výsledky ukázaly, že antiapoptotická aktivita CDP přispěla k příznivému účinku při poškození neuronů v buňkách PC12.

Buňky podléhající ischemickému poškození způsobenému nadměrnou akumulací ROS, což může vést k peroxidaci lipidů, poškození buněčné membrány, přetížení vápníkem a mitochondriální dysfunkci, což nakonec vede k apoptóze a smrti buňky [42]. Konzumace endogenních antioxidantů, jako jsou SOD, CAT a GSH-Px, rovněž naznačovala výskyt Obr. 9. Možné mechanismy protektivních účinků CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)proti OGD/RP-indukovanému poškození buněk PC12. Léčba CDP potlačuje oxidační stres, stabilizuje koncentraci Ca2 plus a MMP, zvyšuje DJ-1 expresi a lokalizaci v mitochondriích. Y. Liu a kol. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678 oxidativního stresu během ischemie-reperfuze. V této studii skupina OGD/RP vykázala významné zvýšení ROS a snížení CAT, GSH-Px a T-AOC ve srovnání se skupinou léčenou 5 ug/ml CDP. Pozorovali jsme však podstatné snížení rychlosti tvorby ROS a spotřeby endogenních antioxidantů (CAT, GSH-Px a T-AOC) ve skupinách CDP. Příznivé účinky ve skupině 5 ug/ml CDP byly blízké účinkům ve skupině Nimo. Výsledky naznačují, že CDP inhibuje tvorbu ROS a obnovuje enzymatickou antioxidační obranu.

DJ-1 je klíčový redox-reaktivníneuroprotektivníprotein, který se podílí na regulaci oxidačního stresu při mrtvici. Příznivé účinky nadměrné exprese DJ{0}} zahrnují přežití buněk z ischemie-reperfuze a zachování mitochondriální funkce a morfologie, jako je precipitující otevření pórů přechodu permeability mitochondrií [39,43]. Předchozí studie ukázaly, že ochranný účinek DJ-1 v buňkách vystavených OGD/RP souvisí s jeho antioxidačními vlastnostmi a translokací mitochondrií [43–45]. DJ-1 provádí účinnou endogenní neuroprotekci při zmírňování mitochondriálních defektů prostřednictvím translokace [46]. Několik studií ukázalo, že DJ{10}} translokace může mít vliv na mitochondriální pohyb, posílit interakci mezi buňkami a podporovat další procesy pro přežití buněk.

DJ-1 ovlivňuje několik procesů, jako je migrace a adheze buněk, chemotaxe, proliferace a apoptóza, a to v modelech in vitro i in vivo [6,9,47,48]. Pomocí modelu mrtvice buněk PC12 poškozených OGD/RP jsme prozkoumali potenciální vztah mezi CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)a DJ-1. Nadměrná exprese DJ- 1 byla identifikována pomocí ELISA a Western blottingu. Spolu s touto funkcí hlavní zjištění v experimentech prokázalo, že k významné nadměrné expresi DJ-1 došlo, když CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)(5 ug/ml) byl podán před reperfuzí. To naznačovalo možnéneuroprotektivnívliv na vztah CDP a DJ-1. Navíc jsme pozorovali, že DJ-1 umístěný v mitochondriích za podmínek OGD/RP a hojné exprese DJ-1 snížil buněčnou citlivost k ROS a inhiboval oxidační stres [45]. Výsledky naznačují, že CDP reguluje a posiluje DJ-1, který působí jako molekulární spojení mezi dysfunkcí mitochondrií a oxidačním stresem a zajišťuje progresi sekundární buněčné smrti vlastní mrtvici [5,47,49–51]. V tandemu se stabilizací DJ-1 v mitochondriích, CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)léčba zvýšila přežití buněk, stabilizovala homeostázu Ca2 plus, zlepšila disipaci MMP a zabránila apoptóze související s mitochondriemi [43]. Celkově naše výsledky naznačují, že CDP představuje novinkuneuroprotektivnímechanismus v léčbě ischemické cévní mozkové příhody.

5. Závěr

Naše výsledky ukázaly, že CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)chrání buňky PC12 před poškozením vyvolaným OGD/RP prostřednictvím svých antioxidačních účinků, které jsou částečně připisovány dráze zprostředkované DJ-1. Tyto účinky zahrnují snížení rychlosti poškození buněčné membrány, zachování homeostázy [Ca2 plus] I, zlepšení disipace MMP, inhibice buněčné apoptózy, zeslabení intracelulárního ROS a modulace hladin DJ-1. Výsledky také ukázaly, že interakce mezi CDP a DJ-1 zesilují neuroprotekci a udržují mitochondriální integritu. Zranitelné neurony tedy mohou být chráněny pomocí CDP(Cistanchedeserticolapolysacharidy)prostřednictvím vylepšení exprese DJ-1 během ischemické mrtvice.

Poděkování

Tato studie byla podpořena Národní nadací pro přírodní vědy Číny (grant 81360649), Národním klíčovým programem pro vědu a technologie (grant 2015BAK45B01) a Programem podpory vědy a technologie autonomního regionu Ningxia Hui (grant 2016BZ07).

Polysacharidy Cistanche deserticolamít Neuroprotektivní účinek

Reference

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans chrání kortikální neurony před toxicitou vyvolanou hypoxií snížením regulace HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Cévní mozková příhoda 1-2-0: program rychlé reakce na mrtvici v Číně, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Nová léčba cévní mozkové příhody: Odhalení patofyziologie cévní mozkové příhody a její dopad na klinickou léčbu, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, patofyziologie související s NADPH oxidázou v experimentálních modelech mrtvice, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, Oxidační stavy DJ{{ 1}} diktovat buněčný osud v reakci na oxidační stres spouštěný 4-hpr: autofagie nebo apoptóza? Antioxidační redoxní znamení. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 zlepšuje smrt ischemických buněk in vitro možná prostřednictvím mitochondriální dráhy, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira a kol., DJ{{ 1}} chrání před neurodegenerací způsobenou fokální cerebrální ischemií a reperfuzí u potkanů, J. Cereb. Průtok krve. Se setkal. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, Primární nervové buňky potkana zbavené kyslíku vykazují translokaci DJ-1 do zdravých mitochondrií: silný terapeutický cíl iktu, CNS Neurosci. Ther. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Léčba cyklosporinem A ruší smrt neuronových buněk vyvolanou ischemií tím, že zachovává mitochondriální integritu prostřednictvím upregulace proteinu spojeného s Parkinsonovou chorobou DJ-1, CNS Neurosci. Ther. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu a kol., Pretreatment with sodium Phenylbutyrate Alleviates cerebral ischemia/ reperfuzní poškození upregulací DJ-1 proteinu, Front. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Neurofarmakologický přehled, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Jeden z nejlepších farmaceutických darů tradiční čínské medicíny, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Účinky a mechanismy čínské bylinné medicíny při zmírňování ischemicko-reperfuzního poškození myokardu, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches stimuluje buněčnou redoxní cyklizaci glutathionu pomocí reaktivních forem kyslíku generovaných mitochondriální respirací v kardiomyocytech H9c2, Pharm. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Pouštní ženšen": recenze, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolaodvar zmírňuje testikulární toxicitu vyvolanou hydroxymočovinou u myších samců, Asian J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of theneuroprotektivnídopad nimodipinu na buňky Neuro2a pomocí modelu stresu podobného chirurgickému zákroku, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotektivníúčinek noscapinu na mozkové poškození kyslíkem a glukózou, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberrosid A chrání před ischemickým poškozením v primární kultuře kortikálních neuronů potkana po následné kyslíkově-glukózové deprivaci reperfuzí, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Trans-cinnamaldehydem chráněné buňky PC12 proti nedostatku kyslíku a glukózy /reperfuzní (OGD/R)-indukované poškození prostřednictvím antiapoptózy a antioxidačního stresu, Mol. Cell Biochem. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Ochranné účinky aloinu na kyslík a poškození vyvolané deprivací glukózy v buňkách PC12, Brain Res. Býk. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol chrání ischemické buňky PC12 inhibicí transkripčních faktorů spojených s hypoxií a zvýšením hladin antioxidačních obranných enzymů, ACS Chem. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B chrání buňky PC12 před neuronální smrtí vyvolanou deprivací kyslíku a glukózy tím, že udržuje mitochondriální homeostázu prostřednictvím indukce závislé na ubikvitinu degradace proteinu p53, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu a kol., Ochranné účinky aloperinu na neonatální krysy primární kultivované hipokampální neurony poškozené kyslíko-glukózovou deprivací a reperfuzí, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib chrání myší kortikální neurony proti neurotoxicitě vyvolané OGD/R up-regulací Bcl-2, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabilizuje expresi HER2 a udržuje populaci rakovinných kmenových buněk v buňkách rakoviny vaječníků, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Chrání buňky RGC-5 před H(2)O( 2) indukované urážky oxidačního stresu aktivací signální dráhy PI3K/Akt/eNOS, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, Dichlormethanové extrakty propolisu chrání buňku před oxidativním stresem vyvolaným nedostatkem kyslíku a glukózy Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679prostřednictvím snížení apoptózy, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotektivníúčinek neuroserpinu v astrocytech potkanů ​​ošetřených kyslíkově-glukózovou deprivací a reoxygenací in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Lithiové ionty zeslabují apoptózu indukovanou nedostatkem séra v buňkách PC12 prostřednictvím regulace signalizace Akt/FoxO1 cesty, Psychopharmacology (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., Shrnutí statistiky srdečních chorob a cévní mozkové příhody za rok 2016. Zpráva od American Heart Association, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Regulace vazebných míst muskarinového ligandu nervovým růstovým faktorem v buňkách feochromocytomu PC12, Nature 297 (1982) 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanolone zeslabuje apoptózu vyvolanou vysokou glukózou a zabraňuje experimentální diabetické neuropatické bolesti: studie in vitro a in vivo, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol chrání buňky PC12 proti apoptóze vyvolané OGD/R prostřednictvím mitochondriálně zprostředkované signální dráhy, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oxidázy jako zdroj oxidačního stresu a molekulární cíl v ischemii/reperfuzi zranění, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Orgánově ochranné účinky extraktu z červeného vína, resveratrol, při reperfuzním poškození zprostředkovaném oxidačním stresem, Oxid. Med. Cell Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedková, Výrazné mechanismy aktivace mPTP v ischemicko-reperfuzi: příspěvky Ca2 plus plus, ROS, pH a anorganického polyfosfátu, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Předkondicionování nízkou dávkou ethanolu chrání před deprivací kyslíku a glukózy / poškozením neuronů vyvolaným reoxygenací aktivací velké vodivosti , Ca2 plus plus -aktivovaný K plus plus Kanály in vitro, Neurosci. Býk. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Vliv inhibice mitochondriálního štěpení na energetický metabolismus v hipokampálních neuronech potkana během ischemického/reperfuzního poškození, Neurol. Res. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun a kol., Ochranné účinky Lycium barbarum polysacharid na neonatálních potkaních primárních kultivovaných hipokampálních neuronech poraněných nedostatkem kyslíku a glukózy a reperfuzí, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptotické mechanismy po cerebrální ischemii, Mrtvice 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin chrání astrocyty před hypoxií in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, proteinkináza závislá na vápníku/kalmodulinu reguluje PINK1/Parkin a DJ{{3} } dráhy mitofágie během sepse, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/PARK7 je důležitým mediátorem buněčných odpovědí vyvolaných hypoxií, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Proteinová kináza závislá na vápníku/kalmodulinu reguluje PINK1/ Parkin a DJ-1 dráhy mitofágie během sepse, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrosylation from DJ-1 to PTEN zeslabuje smrt neuronálních buněk v modelech Parkinsonovy choroby, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 chrání před buněčnou smrtí po akutním ischemicko-reperfuzním poškození srdce, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} je spolehlivý sérový biomarker pro rozlišení vysoce rizikového karcinomu endometria, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan a kol., DJ-1 chrání nigrostriatal osy z neurotoxinu MPTP modulací dráhy AKT, Proč. Natl. Akad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, DJ proteinu Parkinsonovy nemoci-1 jeneuroprotektivníkvůli mitochondriální lokalizaci řízené cystein-sulfinovou kyselinou, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Hyperglykemií indukovaná inhibice DJ-1 exprese kompromitovala účinnost ischemické postkondicionační kardioprotekce u krys, Oxid. Med. Cell Longev. (2013) (2013) 564902.