Čínská medicína Cistanche Chemické složení a analýza složek v těle Ⅲ

Kapitola 2 Kvalitativní studie chemického složení Cistanche deserticola

Cistanche je suchá, šupinatá listová masitá lodyhaCistanche deserticola YC.Maa Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Je to jedna z nejznámějších tradičních čínských léčiv vyživujících ledviny-jang. Má funkcevyživující ledviny-jang, doplnění esence a krve a zvlhčení Působí projímavě a často se používá k léčbě impotence, neplodnosti, bolestivosti pasu a kolen, slabosti svalů a kostí, suchosti střev a zácpě atd. Má farmakologické účinky např. demence, antiparkinsonská nemoc, ochrana před mozkovou ischemií a zlepšení schopností učení a paměti. Za účelem objasnění materiálního základu proúčinnost Cistanche deserticolaTato kapitola využívá HPLC a LC-IT-TOF-MS ke komplexní charakterizacichemické složky Cistanche. Na základě systematického shrnutí pravidel krakování různých typů chemických složek jsou systematicky analyzovány vlastnosti Cistanche deserticola. Chemické složení, pro poskytování bohatých údajů ze spolehlivých zdrojůhloubkové objasněnío léčivých vlastnostechCistanche deserticolain vivo.

buy cistanche

JAK DLOUHO TRVÁ, NEŽ CISTANCHE PŮSOBÍ?

Část 1 Experimentální materiály

1.Nástroj

Kapalný hmotnostní spektrometr Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS (vybavený 2 čerpadly LC-20ADXR, automatickým vzorkovačem SIL-20AC, CTO-20AC kolonovou pecí, UV detektorem SPD-M20A, Dekontaminační plynový stroj DGU-20A3R, CBM-20A ovladač, ESI iontový zdroj, Shimadzu Company, Japonsko), systém čištění ultračisté vody Milli-Q (Milipore Company, USA): elektronické analytické váhy Mettler ME204 ( Mettler Toledo Company, Švýcarsko).

2. Činidla

Metanol, acetonitril a kyselina mravenčí pro hmotnostní spektrometrii čistoty pro chromatografii a hmotnostní spektrometrii byly zakoupeny od Thermo-Fisher Company (Pittsburgh, PA, USA). Voda byla ultračistá voda Milli-Q vyrobená v laboratoři (Millipore, Bedford, MA, USA). Všechny ostatní reagencie jsou analytické kvality.

Salidrosid, 6-deoxykatalpol, 8-epi-loganová kyselina, echinakosid, akteosid, isosid Verbascosid (isoakteosid) a pinoresinol- -D-glukopyranosid (pinoresinol- -D-glukopyranosid) obě poskytla výzkumná skupina profesora Tu Pengfeie v Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs na Pekingské univerzitě. Sarkosid F (cistanosideF) byl zakoupen od Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanosid A (cistanosid A), 2'-acetylakteosid (2'-acetylakteosid), 2'-acetylpoliumosid (2'-acetylpoliumosid), cistanosid Polyglukosid (poliumosid ), cistanoside E (cistanosideE), isocistanoside E (isocistanosideE), cistanoside C (cistanosideC), isocistanoside C (isocistanosideC) a cistanoside D (cistanosideD) byly všechny zakoupeny od Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., tubuloside A (tubulosideA) tubulosid B (tubulosid B) byly zakoupeny od Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.

Sekce 2 Experimentální obsah

1. Příprava vzorku

1.1 Příprava referenční látky

Přesně navažte vhodná množství různých referenčních látek ve výše uvedené "Sekci 1 Experimentální materiály" a připravte 10 mM zásobní roztoky s DMSO. Precizně napipetujte 2 ml každého zásobního roztoku a nařeďte jej 25% acetonitrilem, aby vznikl 2 μM smíšený kontrolní roztok. 1.2 Příprava zkušebního roztoku

Vodný extrakt z Cistanche deserticola byl vyroben naší laboratoří a vzorek je uložen ve Výzkumném centru modernizace tradiční čínské medicíny, School of Traditional Chinese Medicine, Peking University of Chinese Medicine. Vezměte 20 mg prášku Cistanche deserticola, přidejte 40 ml vody k rozpuštění, vortexujte a promíchejte, centrifugujte při 10 000 otáčkách za minutu po dobu 10 minut a odeberte supernatant. To znamená, že se získá testovací roztok.

3. Podmínky hmotnostní spektrometrie

Elektrosprejový iontový zdroj (ESI), režim skenování je skenovat kladné a záporné ionty současně a automaticky spouštět víceúrovňovou hmotnostní spektrometrii. Hmotnostní snímací rozsah MS'~MS' pro kladné ionty je m/z50~800 a pro záporné ionty je m/z100~1000. Napětí rozprašovací komory je 4,5 kV a -3,5 kV v tomto pořadí: průtok rozprašovacího plynu (Nz) je 1,5 lmin; tlak sušícího plynu je 110 MPa; detekční napětí je 1,55 kV; teploty zakřivené trubice desolventizeru (CDL) a topného modulu jsou obě 200 stupňů. Tlak kolizní komory je 1,5e-Pa; tlak iontové pasti je 2,8e-Pa; počet opakování kladného a záporného prvního stupně je 1 a doba akumulace iontů je 30 ms; počet opakování kladného a záporného druhého stupně je 2 a doba akumulace iontů je 20 ms. ; Disociační energie vyvolaná kolizí (CID) je 50 %.

Část 3 Výsledky a diskuse

Výběr sloupců

Abychom dosáhli lepší chromatografické separace, rozsáhle jsme prověřovali chromatografické kolony od různých výrobců a specifikací, jako je chromatografická kolona ACEUltraCore 2.5 SuperC8 (3.0x150 mm, 2,5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Skotsko), Shiseido Capcell Core Ci8 (2,1 mm x 150 mm, 2,7 μm), kolona Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, USA) a kolona Capcell Core ADME (2,1 x 150 mm, 2,7 μm, Shiseido Corporation Japonsko). Systematickým srovnáním bylo zjištěno, že při použití chromatografické kolony Capcell Core ADME (2,1 x 150 mm, 2,7 μm, Shiseido Co., Ltd., Japonsko) lze každý chromatografický signál lépe separovat (obrázek 3-1).

2. Výběr podmínek kapalné fáze

Vzhledem k tomu, že hlavní chemické složkyCistanche deserticolajsou fenylethanolové glykosidy, lignany, iridoidy a další sloučeniny, obecně lépe reaguje za podmínek negativních iontů. Aby bylo možné identifikovat nízkoúrovňové chemické složky ve vodním extraktu z Cistanche deserticola, spekuluje se, že může být nutné přidat kyseliny do mobilní fáze, aby se zvýšila síla. Proto tento experiment použil jako systémy mobilní fáze pro výzkum voda-methanol, voda-acetonitril, 0,1% kyselina mravenčí voda-methanol a 0,1% kyselina mravenčí voda-acetonitril. Bylo zjištěno, že 0,1% kyselina mravenčí voda-acetonitril měla nejlepší separační účinek s dobrým tvarem píku a velkou kapacitou píku, takže 0,1% kyselina mravenčí voda a acetonitril byly vybrány jako Mobilní fáze. 3. Kvalitativní analýza chemických složek. Použijte 19 existujících referenčních látek k prozkoumání pravidel fragmentace hmotnostní spektrometrie různých typů sloučenin v Cistanche deserticola. Směsné referenční látky jsou PDA chromatogramy při 340 nm na ADME koloně a BPC grafy v pozitivním a negativním iontovém módu. Viz obrázek 3-1. Zkontrolovali jsme příslušnou literaturu prostřednictvím PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP a Wanfang atd. a vytvořili jsme vlastní databázi chemických složek Cistanche deserticola. Na základě porovnání fragmentačních pravidel hmotnostní spektrometrie a retenčních časů známých sloučenin jsme předběžně identifikovali 45 sloučenin v Cistanche deserticola. sloučeniny, včetně 31 fenylethanolových glykosidů, 9 iridoidů, 3 benzylglykosidů a 2 lignanů, jak je uvedeno v tabulce 3-1.

buy cistanche

Porovnáním doby utajení, spektra MS a spektra MS referenční látky, sloučeniny 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 byly postupně přesně identifikovány jako genipin, cistanchein F, cistancheosid E, echinaceaside, chrysantosid, cistanchein A, tuberosin A, larchresinol 4-0- -D glukosid, mullein glykosidy, monocannabinoid acetyl'glykosid, pinoether glykosid oside C, isocistancosid C, tuberosin B a cistanche glykosid D.

Tento experiment využívá technologii HPLC-IT-TOF-MS k rychlé a přesné systematické analýze složitých chemických složek ve vodním extraktu Cistanche deserticola, což poskytuje základ pro komplexní analýzu kvality Cistanche deserticola a výzkum farmakologických látek in vivo.

buy cistanche