Kapitola 1: Imunitní reakce na SARS-CoV-2 infekci a očkování u dialyzovaných pacientů a příjemců transplantace ledvin

Pro více informací Kontakttina.xiang@wecistanche.com

Abstraktní: Dialyzovaní pacienti atransplantace ledvinPříjemci (KTX) trpí narušeným imunitním systémem a vykazují sníženou odpověď na očkování proti těžkému akutnímu respiračnímu syndromu proti koronaviru typu 2 (SARS-CoV-2). Provedli jsme retrospektivní analýzu 1505 sérologických měření SARS-CoV-2 získaných od 887 dialyzovaných pacientů a 86 příjemců KTX. Výsledky byly rozděleny podle podskupin pacientů (dialýza/KTX) a také podle stavu SARS-CoV-2. Posledně uvedené kritérium zahrnovalo pacienty dosud neléčené SARS-CoV s očkováním COVID nebo bez něj{12}} a pacienty v rekonvalescenci, kteří dostávali posilovací dávku. Jako referenční skupina sloužily sérologie 27 očkovaných zdravých jedinců. Vakcínou indukovaná buněčná imunitní odpověď byla kvantifikována testem uvolňování interferonu u 32 příjemců KTX. U dialyzovaných pacientů očkovaných buď BNT162b2, mRNA-1273 nebo AZD1222 jsme určili míru sérokonverze 92,6 procenta, 93,4 procenta a 71,4 procenta. Titry protilátek proti SARS-CoV-2 vyvolané očkováním byly u dialyzovaných pacientů nižší než u zdravých jedinců a očkování pomocí mRNA-1273 indukovalo vyšší titry než BNT162b2. Počáteční míra sérokonverze byla 39,5 procenta u příjemců KTX očkovaných BNT162b2. Model lineární regrese identifikoval léčbu mykofenolát-mofetilem/kyselinou mykofenolovou jako nezávislý rizikový faktor chybějící sérokonverze. V rámci kohorty 32 příjemců KTX byla buněčná a humorální imunitní reaktivita na SARS-CoV-2 detekovatelná pouze u tří pacientů. Míra sérokonverze vyvolaná vakcínou byla u dialyzovaných pacientů podobná ve srovnání se zdravými jedinci, ale byla silně narušena u příjemců KTX. Titry anti-SARS-CoV-2 IgG vyvolané dvojitou aktivní imunizací byly významně nižší v obou kohortách ve srovnání se zdravými jedinci a imunitní reakce na očkování rychle mizely.

Klíčová slova: COVID-19;imunosuprese; ochrana; titr; protilátky; nemoc ledvin

Kliknutím sem se dozvíte, k čemu se cistanche používá

1. Úvod

Hemodialyzovaní (HD) pacienti a příjemci transplantace ledvin (KTX) jsou ohroženi závažným koronavirovým onemocněním-19 (COVID-19)[1,2]. Překvapivě, i když je počet omezený, observační studie neodhalily žádný rozdíl v imunitní odpovědi na těžký akutní respirační syndrom koronavirus typu 2 (SARS-CoV-2) po přirozené infekci u chronicky imunosuprimovaných pacientů a imunokompetentních jedinců [3]. Věk a křehkost, stejně jako počet a závažnost již existujících komorbidit – více než farmakologická imunosuprese – jsou prognostickými faktory těžkéonemocnění COVID-19průběh jak u imunokompromitovaných, tak u imunokompetentních pacientů [4,5]. Bez ohledu na to evropské údaje o veřejném zdraví naznačujíchronické onemocnění ledvin(CKD) a dialýza jako kritické prognostické komorbidity spojené se zvýšenou úmrtností po infekci SARS-CoV-2 [6]. Kromě toho zhoršená sérokonverze a dlouhověkost SARS-CoV-2imunitní reakcepo infekci dále ohrožuje HD a KTX pacienty [4,7,8].

Aktivní imunizace proti SARS-CoV-2, zejména vakcínami s mediátorovou ribonukleovou kyselinou (mRNA), je považována za nejúčinnější preventivní strategii k ochraně zranitelných jedinců před infekcí a těžkými kursy COVID-19 [9]. Jak intenzita, tak trvání imunitní odpovědi po očkování u specifických skupin pacientů však nebyly plně charakterizovány. Ve srovnání s běžnou populací se má za to, že HD pacienti mají snížené titry protilátek SARS-CoV-2 a mají opožděnou imunitní odpověď [10-12]. Po druhé injekci může být míra sérokonverze až 90 procent a buněčná imunitní odpověď může být detekována přibližně u 80 procent očkovaných jedinců[13-15]. Přibývající dostupné údaje z různých studií o účinnosti očkování proti SARS-CoV-2 u příjemců transplantace solidních orgánů (SOT) odhalily silně narušenou humorální a buněčnou imunitní odpověď ve srovnání s běžnou populací s hlášenou sérokonverzí pod 45 procenta a navíc zhoršená buněčná odpověď [16-19].

Doposud se stále intenzivně zkoumá definice titru protilátek poskytujícího ochranu a stanovení hladin protilátek se rutinně neprovádí [20]. Systematicky jsme analyzovali míru sérokonverze a titr protilátek u 681 pacientů s HD a příjemců 86 KTX, abychom charakterizovali humorální odpověď na infekci SARS-CoV-2 potvrzenou PCR a očkování (BNT162b2(BioNTech/Pfizer, Mainz , Německo/New York, NY, USA), mRNA-1273 (Moderna, CA, USA) a AZD1222 (AstraZeneca/University of Oxford, Cambridge/Oxford, Spojené království)) retrospektivně. Sérologie 27 zdravých jedinců očkovaných mRNA sloužily jako referenční skupina. Dále byla prospektivně kvantifikována buněčná imunitní odpověď u 32 příjemců KTX, aby se plně charakterizovala ochrana vyvolaná mRNA vakcínou.

2. Materiály a metody

2.1. Návrh studie, pacienti a etické prohlášení

Abychom charakterizovali humorální odpověď na infekci i očkování, retrospektivně jsme analyzovali sérologie SARS-CoV-2 od pacientů na dialýze a KTX provedených ve Fakultní nemocnici v Kolíně nad Rýnem v Německu, počínaje začátkem pandemie COVID-19 od dubna 2020 do června 2021. Tato kohorta obsahovala 206 SARS-CoV-2-naivních dialyzovaných pacientů, u kterých byly každé tři měsíce po dobu jednoho roku od dubna 2020 do dubna 2021 vyšetřovány protilátky proti SARS-CoV{10}}. Pokud jde o očkování, měření protilátek byla získána mezi březnem 2021 a červnem 2021 od 627 SARS-CoV-2-naivních dialyzovaných pacientů, z nichž 475 dostalo BNT162b2(BNT162b2(BioNTech/Pfizer, Mainz, Německo/New York, NY, USA), k dispozici bylo 138 mRNA-1273 (Moderna, CA, USA) a 14 AZD1222 (AstraZeneca/University of Oxford, Cambridge/Oxford, Spojené království). Kromě toho byly k dispozici sérologie 54 dialyzovaných pacientů se zotavil ze SARS-CoV-2

bylo získáno, z nichž 38 dostalo posilovací dávku (všechny BNT162b2). Pokud jde o SARS-CoV-2-naivní příjemce KTX, byla získána séra od 86 pacientů pro sledování očkování BNT162b2. Sérologie 27 zdravých jedinců očkovaných mRNA-1273 sloužila jako kontrolní skupina. Všechny vakcíny byly podávány v klinické rutině podle uvážení ošetřujícího lékaře a podle doporučení výrobců. Všechna měření byla prováděna v klinické praxi a analyzována retrospektivně po schválení místní institucionální kontrolní radou (Etická komise Lékařské fakulty Univerzity v Kolíně nad Rýnem, Německo, EK21-1398). Kromě toho byly humorální a buněčné imunitní odpovědi prospektivně zkoumány u 32 SARS-CoV-2-naivních příjemců KTX v období od června do září 2021. Tato studie byla také schválena etickou komisí Lékařské fakulty Univerzity v Kolíně nad Rýnem v Německu ( EK21-1112) a byla provedena v souladu s Helsinskou deklarací.

2.2.Sérologické testy pro detekci anti-SARS-CoV-2 protilátek

Anti-SARS-CoV-2 IgG zacílený na spike (S) protein byl detekován semikvantitativní Euroimmun anti-SARS-CoV-2 IgG ELISA pomocí Euroimmun Analvzer I (Eu-roimmun Diagnostik, Lübeck, Německo ) a kvantitativní IDKeanti-SARS-CoV-2 IgG ELISA (Immundiagnostik AG, Bensheim, Německo) s použitím DYNEX DSX (Dynex Technologies, Chantilly, VA, USA), obě využívající rekombinantní antigen S1 hrotu protein nebo chemiluminiscenční mikročásticový imunotest od Abbott pro kvantitativní detekci anti-spike RBD (receptor binding domain)IgG (SARS-CoV-2 IgG II Quant) pomocí automatizovaného systému Alinity i(Abbott, Abbott Park, IL , USA). Výsledky kvantitativních testů IgG zaměřených na S1 nebo RBD byly vyjádřeny v BAU/ml (jednotka vazebné protilátky) s použitím konverzního faktoru generovaného z interního standardu Světové zdravotnické organizace (WHO) a poskytnutého každým výrobcem. Kromě toho bylo 29 pacientů z hemodialyzované skupiny paralelně vyšetřeno pomocí těchto dvou kvantitativních testů SARS-CoV-2 IgG, aby se zjistilo, zda dodávají srovnatelné titry IgG. Protilátky zacílené na nukleokapsidový (NC) protein byly detekovány pan-imunoglobulinovým imunotestem Elecsys anti-SARS-CoV-2 elektrochemiluminiscenční imunotest (ECLIA) za použití Cobas 8000 (Roche Diagnostics, Mannheim, Německo). Všechny testy byly interpretovány podle doporučení výrobce.

2.3. Určení reakce T-buněk na SARS-CoV-2

CD4 plus a CD8 plus T-buňkami zprostředkovaná odpověď na SARS-CoV-2 byla měřena komerčním testem uvolňování interferonu z plné krve (IFN-) （IGRA） QuantiFERON⑧ SARS-CoV-2 RUO( QIAGEN GmbH, Hilden, Německo). T-buňky byly stimulovány epitopy S1 a S2 podjednotek spike proteinu SARS-CoV-2 (antigen 1 a 2). Koncentrace IFN-y byla měřena chemiluminiscenční imunoanalýzou (CLIA), jak bylo popsáno dříve [21]. Hladina IFN-y > 0,15 IU/ml byla hodnocena jako reaktivní [22].

2.4.Statistika

Statistické analýzy byly provedeny pomocí softwaru GraphPad Prism verze 5 (Graph-Pad Prism Software Inc. San Diego, CA, USA) a SPSS verze 27.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Nenormální distribuce titrů protilátek byly vyjádřeny jako medián ± interkvartilní rozmezí a porovnány pomocí Kruskal-Wallis/Mann-Whitney U testů a Spearmanovy korelace. Co se týče charakteristik pacientů, kategoriální proměnné byly shrnuty do absolutních čísel a četností a numerické proměnné do mediánu a interkvartilního rozmezí. Kategorické proměnné byly analyzovány pomocí chí-kvadrát testu a numerické proměnné pomocí Mann-Whitneyho U testu popisným způsobem. Korelace – upravené pro použitý test, věk a dobu mezi událostí a vzorkem krve – byly vypočteny pomocí lineárního regresního modelu se Spearmanovou analýzou. p<0.05 was="" considered="" statistically="" significant.="" to="" examine="" the="" comparability="" of="" the="" two="" immunoassays,="" a="" passing-bablok="" regression="" was="" carried="" out="" using="" the="" software="" analyze-it="" v5.50(analyse-it="" software,="" ltd.="" leeds,="">