Centrální Fbrózní oblasti: Změny glomerulárních vaskulárních pólových lézí související s věkem a onemocněním

Abstraktní

1. Účel

Centrální fibrózní oblasti (CFA) jsou malé, hyalinózní, monotónní nodulární oblasti pozorované u glomerulárních vaskulárních lézí. Pokusili jsme se objasnit vztah mezi tvorbou CFA a věkem u zdravých ledvin au ledvin postižených imunoglobulinovou A (IgA) nefropatií.

2. Metody

Retrospektivně byly odebrány vzorky biopsie z nula hodin od žijících dárců ledvin (135 případů) a vzorky biopsie IgA nefropatie (67 případů). Pozorovali jsme každý bioptický vzorek a stanovili jsme celkový počet glomerulů, celkovou úroveň glomerulosklerózy, počet pozorovatelných glomerulárních vaskulárních pólů, počet glomerulů s CFA, hladinu sérového kreatininu a odhadovanou rychlost glomerulární filtrace (eGFR). Kromě toho jsme vypočítali míru glomerulární sklerózy (GSR), míru výskytu cévních pólů (PAR) a míru CFA (CFAR), abychom vyhodnotili vztah mezi těmito faktory a věkem pacienta.

3. Výsledky

Byla zde signifikantně negativní korelace mezi věkem pacienta a eGFR pro obě hodiny nula (str<0.0001 in Spearman, p=0.0009 in multiple regression, the same hereafter) and IgA (p=0.0022, p=0.0001) groups. In the zero-hour group, we observed a significant positive correlation between patient age and GSR (p=0.0001, p<0.0001); however, there was no such correlation in the IgA group. In both groups, there was a significant positive correlation between patient age and CFAR (zero-hour group: p=0.0003, p=0.0091, IgA group; p<0.0001, p=0.0004). The slope of the regression line of the IgA group formula was also significantly higher than that of the zero-hour group formula (p<0.01).

4. Závěr

Tato zjištění naznačují, že CFA může být užitečným indikátorem stárnutí ledvin, zejména u pacientů s onemocněním ledvin způsobeným IgA nefropatií.

5. Klíčová slova

Centrální fibrózní oblast · Stárnutí · Renální dárce · IgA nefropatie

Kliknutím sem zjistíte, jaký je účinek přípravku Cistanche

Úvod

Změny na vaskulárních pólech renálních glomerulů byly hlášeny mnohem méně často než změny na jiných částech glomerulů, jako jsou mezangiální léze [1] a ty, které postihují podocyty [2–4] a bazální membránu glomerulů [1, 3, 5, 6]. Někdy však byly u lézí glomerulárních cévních pólů pozorovány malé hyalinózní nodulární oblasti. Tyto uzliny jsou monotónní a jsou zbarveny modře Massonovým barvením, jsou slabě pozitivní na barvení periodickou kyselinou Schif (PAS) a mohou být imunohistochemicky pozitivní na imunoglobulin M (IgM) (obr. 1).

Obr. 1 Světelný mikroskopický nález centrálních fibrózních oblastí (CFA) I stejné glomeruly (a–c) a imunohistochemické barvení imunoglobulinu M (IgM) jiného glomerulu (d). Malý monotónní hyalinotický uzlík v lézi glomerulárního vaskulárního pólu (šipka). Uzel byl obarven modře Massonovým barvením (a) a vykazoval slabě pozitivní barvení kyselinou jodistou Schif (PAS) (d), negativní nebo slabě pozitivní barvení kyselinou jodistou stříbrem-methenamin (PAM) (c) a imunohistochemicky pozitivní barvení IgM (šipka ) (d)

Několik zpráv popsalo tyto uzliny. Naše rešerše identifikovala pouze jednu zprávu Inomaty [7] publikovanou v roce 1986, ve které autor označil léze jako vaskulární pólová depozita (VPD). Tyto noduly jsme však pozorovali v renálních histopatologických vzorcích s určitou frekvencí. Domníváme se proto, že uzliny se tvoří v důsledku některých významných účinků na ledvinovou tkáň. V této studii jsme definovali noduly jako centrální fibrózní oblasti (CFA).

Dosud nebyly hlášeny žádné statistické důkazy o souvislosti mezi tvorbou CFA a věkem pacienta. Proto jsme se v této studii pokusili objasnit vztah mezi tvorbou CFA a stárnutím pomocí vzorků renální biopsie. Pokusili jsme se také zhodnotit vliv glomerulárního onemocnění (reprezentovaného imunoglobulinovou A (IgA) nefropatií) na tvorbu CFA. Vzhledem k tomu, že jsme pozorovali, že CFA jsou běžné v ledvinové tkáni starších pacientů, předpokládali jsme, že stárnutí ledvinové tkáně podporuje tvorbu CFA.

Materiály a metody

Od žijících dárců ledvin z Urologické kliniky Tokijské ženské lékařské univerzity a pacientů s IgA nefropatií, kteří podstoupili první biopsii ledvin na Klinice nefrologie nebo Klinice dětské nefrologie téže univerzity, byla provedena biopsie v období od ledna 2014 do června 2015. Všichni dárci podstoupili biopsii biopsie v nulté hodině během nefrektomie dárce. Všichni dárci a pacienti s IgA nefropatií s diabetem a/nebo glomerulárním onemocněním jiným než IgA nefropatie byli vyloučeni, aby se eliminovaly vnější faktory, které by mohly v co největší míře ovlivnit strukturu ledvin. Pacienti, kterým byla předepsána antihypertenziva, byli zahrnuti, pokud byl jejich krevní tlak úspěšně kontrolován.

Účastníci byli rozděleni do dvou skupin následovně: skupina s nultou hodinou, kterou tvořili dárci bez IgA nefropatie, a skupina IgA, která zahrnovala pacienty s IgA nefropatií. Do skupiny IgA byli zařazeni i dárci s diagnózou IgA nefropatie při provedení biopsie v nulté hodině.

Informace týkající se věku, pohlaví, sérového kreatininu (sCr) a odhadované glomerulární filtrace (eGFR) byly retrospektivně přezkoumány ze zdravotních záznamů pacienta těsně před operací dárce nebo biopsií ledviny. Použili jsme údaje o eGFR od pacientů, kteří byli v době provedení biopsie ledviny starší nebo rovni 18 let, protože vzorec pro výpočet eGFR pro děti mladší 18 let se lišil od vzorce pro dospělé a eGFR nebylo pro většinu dětí vypočteno. pacientů.

Standardizované Cistanche

Patologická vyšetření

Použili jsme připravené vzorky ze zásob, které byly dříve klinicky diagnostikovány. Vzorky biopsie dárce v nulté hodině byly odebrány pomocí klínové biopsie. Biopsií jehlou byly odebrány vzorky renální biopsie z Kliniky nefrologie nebo Kliniky dětské nefrologie.

Bioptické vzorky byly fixovány v 10% pufrovaném formaldehydu a uloženy do parafinových bloků. Vzorky byly nakrájeny na řezy o tloušťce 2-μm a obarveny hematoxylinem-eosinem (HE), Massonem, Elastica-Massonem, PAS a stříbrným methenaminem kyseliny jodové (PAM)-HE. Tyto vzorky byly pozorovány pomocí světelného mikroskopu, aby se zjistil počet celkových glomerulů, celkový stupeň glomerulosklerózy, přítomnost glomerulů s pozorovatelným vaskulárním pólem a přítomnost glomerulů s CFA v jejich lézi cévního pólu. Zjistili jsme, že CFA byla přítomna, když byla pozorována monotónní nodulární léze ve dvou sériových řezech stejného glomerulu.

míra sklerózy (GSR) byla míra glomerulosklerózy k celkovému počtu glomerulů. CFA jsou histopatologické nálezy, které lze rozpoznat pouze v glomerulech s pozorovatelným vaskulárním pólem. Z tohoto důvodu by měl být počet glomerulů s pozorovatelnou lézí cévního pólu v každém vzorku jmenovatelem pro numerické hodnocení vzhledu CFA. Vypočítali jsme poměry glomerulů s pozorovatelným vaskulárním pólem k nesklerotickým glomerulům a výsledek jsme pak nominovali jako míru výskytu vaskulárního pólu (PAR). Poté jsme vypočítali poměry glomerulů s CFA ke glomerulům s pozorovatelnou lézí vaskulárního pólu v každém vzorku a výsledek jsme označili jako míru CFA (CFAR).

Vzorce pro GSR, PAR a CFAR jsou následující: GSR=počet glomerulosklerózy/celkové glomerulární číslo, PAR=počet glomerulů s pozorovatelným cévním pólem/(celkové glomeruly – celkové s glomerulosklerózou), a CFAR=počet glomerulů s CFA/počet glomerulů s pozorovatelným vaskulárním pólem.

Statistická analýza

Vypočítali jsme klíčové statistiky každého klinického a histopatologického parametru pro skupiny nulté hodiny a IgA. Spojité proměnné byly vyjádřeny jako střední standardní odchylka (SD). Pro srovnání dat mezi skupinami s nultou hodinou a IgA jsme použili dvoustranné Mann–Whitney U-testy s výjimkou poměru muži/ženy, pro který byl použit test 2 × 2 chí-kvadrát.

K vyhodnocení vztahů mezi věkem pacienta a sCr, eGFR, GSR a CFAR v každé skupině byly použity Spearmanovy koeficienty pořadové korelace (dvoustranné) a vícenásobná regresní analýza. Pro hodnocení eGFR jsme však použili pouze data od pacientů ve věku nad 18 let nebo rovných pro 135 případů nultých hodin a 58 případů IgA. Kromě toho jsme hodnotili rozdíl mezi regresními křivkami skupiny v nulté hodině a IgA skupiny pomocí kovariátní analýzy.

Statistická významnost byla stanovena na str<0.05. Statistical analyses were performed using Microsoft Excel version 16 (Microsoft Corporation, USA).

Etické úvahy

Studie byla provedena na základě Helsinské deklarace z roku 2013. Před operací dárce nebo biopsií ledviny bylo získáno písemné komplexní povolení od pacientů nebo rodičů nezletilých pacientů. Informovaný souhlas byl získán formou opt-out na webu Tokyo Women's Medical University. Lékařský etický výbor Tokijské ženské lékařské univerzity schválil tento protokol studie (schválení č. 3802-R2).

Herba Cistanche

Diskuse

Toto je první studie, která kvantitativně měří CFA pomocí vzorků renální biopsie. Snažili jsme se ověřit hypotézu, že stárnutí ledvinové tkáně podporuje tvorbu CFA. K dosažení tohoto cíle jsme kvantitativně měřili CFAR v každém vzorku renální biopsie a statisticky vyhodnotili vztah mezi věkem pacienta a CFAR. Výsledky studie ukázaly, že starší ledvinová tkáň vykazovala CFA častěji než mladší ledvinová tkáň jak ve skupině s nultou hodinou, tak ve skupině IgA. Kromě toho CFAR rostl s věkem výrazněji ve skupině IgA než ve skupině s nulovou hodinou.

Strukturální a funkční změny v tkáni ledvin související se zdravým stárnutím byly pozorovány různými způsoby. GFR se během zdravého stárnutí postupně snižuje [3, 5, 6, 8]. Studie na relativně zdravých lidech uvádějí, že GFR klesá o 0,4–0,75 ml/min/1,73 m2/rok [5, 8] nebo o 6,3–10 ml/min/1,73 m2 /dekáda [1, 3]. Také jsme pozorovali, že starší dárci vykazovali nižší eGFR (snížení přibližně o 0,45 ml/min/rok), což odráží proces zdravého stárnutí.

Některé zprávy podporují názor, že glomerulární objem se zvyšuje se zdravým stárnutím [1, 2, 4, 9], ale jiné studie přinesly kontrastní výsledky [3, 8]. Ke změnám ve struktuře nefronů dochází během stárnutí [1–3, 8] a zdá se, že staré ledviny vykazují zvětšení tubulů [3, 8]. Průměrné procento pojivové tkáně u nesklerotizovaných glomerulů se v průběhu stárnutí zvyšuje [1] a podocyty také procházejí změnami souvisejícími s věkem [2, 3]. Výzkumníci předpokládali, že progresivní redukce životaschopných a normálně fungujících podocytů vede k glomerulárnímu zastarávání a zhoršení integrity membrány štěrbinových pórů v glomerulech [3]. Hodgin a kol. pozorovali, že celkový glomerulární objem a glomerulární objem na podocyt se zvyšují s věkem [2]. Kromě toho je u starších ledvin častěji pozorován určitý specifický podocytový stres a podocytopatie. Tyto nálezy naznačují, že podocytopatie může být významným indikátorem stárnutí ledvin. Vztah mezi závažností podocytopatie a renálním onemocněním však zůstává nejasný.

Několik studií hodnotilo změny v glomerulárních vaskulárních pólech související s věkem. V roce 1986 společnost Inomata zkoumala vzorky z biopsie ledvin a pozorovala globulární hyalinní depozita kolem glomerulárního vaskulárního pólu, přičemž tyto léze označovala jako VPD [7].

Inomata vytvořila dvě hypotézy týkající se generace VPD. Jednou z hypotéz je, že plazmatické proteinové materiály pronikají vaskulární intimou léze glomerulárního vaskulárního pólu a stabilizují lokální vaskulární stěnu. Druhým je, že mezangiální depozita v glomerulech se přesouvají do léze vaskulárního pólu přes mezangiální kanál a tam se hromadí. Autor však neuvedl žádnou korelaci mezi tvorbou VPD a imunitními reakcemi. Celý zkoumaný bioptický vzorek skutečně vykazoval určitou formu onemocnění ledvin, takže VPD mohly být postiženy onemocněním ledvin.

V této studii jsme pozorovali, že CFA byly častější a větší u starších ledvin než u mladších ledvin (obr. 6). Na základě těchto pozorování jsme předpokládali, že CFA se vyvíjejí během stárnutí. Proto jsme zkoumali vztah mezi CFA a věkem ledvin pomocí dárcovských tkání ledvinového transplantátu. Bohužel jsme v této studii neměřili velikost CFA, i když se domníváme, že jde o důležitý parametr, který by měl být zkoumán v budoucích studiích.

U ledvin dárce v nulté hodině jsme pozorovali významnou pozitivní korelaci mezi věkem a GSR; u ledvin s IgA nefropatií jsme však nepozorovali žádnou významnou korelaci mezi věkem pacienta a GSR. Je možné, že glomeruloskleróza způsobená IgA nefropatií způsobila změny v GSR pacientů, což se mohlo jevit jako změna v důsledku stárnutí. Zjistili jsme však, že u starších pacientů byl CFAR významně vyšší jak ve skupině s nultou hodinou, tak ve skupině IgA. Na rozdíl od skupiny s nultou hodinou jsme pozorovali pozitivní vztah mezi věkem pacienta a CFAR ve skupině IgA a CFAR ve skupině IgA vykazoval významně rychlejší nárůst podle věku než CFAR ve skupině s nultou hodinou.

Kapsle Cistanche

Mechanismus tvorby CFA byl zkoumán jen zřídka. Je však známo, že glomerulární kapiláry, včetně lézí cévních pólů, jsou v průběhu času vystaveny různým typům tlaku a pohybu. Glomeruli odolávají vaskulárnímu hydrostatickému tlaku (60–65 mmHg), plazmatickému koloidnímu osmotickému tlaku (25 mmHg na aferentním konci a až 35 mmHg na eferentním konci) a hydrostatickému tlaku v močovém prostoru (20–25 mmHg) [10]. Předpokládáme, že trvale vysoký tlak ovlivňující léze glomerulárních cévních pólů hraje roli při tvorbě CFA.

Neal a kol. zkoumali trojrozměrnou strukturu glomerulárních kapilár dospělého člověka [10]. Zjistili, že glomerulární cévy u lézí cévních pólů se rozšiřují ve větší míře než spojovací tepny, které se nazývají aferentní a eferentní cévní komory (VC). Tyto struktury VC nebyly pozorovány ani v ledvinách hlodavců, ani v ledvinách kojenců, ve kterých jsou glomeruly menší než glomeruly dospělého člověka, což naznačuje, že VC jsou spojeny s velkými glomeruly dospělých. Tito autoři simulovali hemodynamiku v glomerulech a předpokládali, že VC hrají roli v zajištění rovnoměrné distribuce krve do každého z glomerulárních laloků.

Jak jsme pozorovali, CFA je strukturální změna, ke které dochází ve stěně VC, potenciálně kvůli degradaci komponent stěny VC vystavením po desetiletí vysokotlakému prostředí, což vede k tvorbě CFA ve starých glomerulech. IgA nefropatie je forma glomerulonefritidy s IgA-dominantním ukládáním imunokomplexu v glomerulárních mezangiálních a para mezangiálních lézích. Mnoho tkání ledvin s IgA nefropatií vykazuje proliferativní endokapilární změny, tvorbu srpku a poškození tubulointersticiálního prostoru, navíc k expanzi mezangiální matrix a proliferaci mezangiálních buněk. Tyto strukturální změny v glomerulech mohou narušit glomerulární průtok krve u pacientů s IgA nefropatií. Žádné studie však neprobíraly skutečný glomerulární průtok krve v kontextu IgA nefropatie. Budoucí studie by měly zkoumat vztahy mezi glomerulární strukturou, glomerulárním průtokem krve, IgA nefropatií a tvorbou CFA.

Zbývá tedy určit, zda IgA nefropatie souvisí se stárnutím ledvin. Oxfordská klasifikace IgA nefropatie je široce používána jako histopatologický indikátor k predikci klinických výsledků u pacientů s IgA nefropatií [11]. Klasifikace zahrnuje histopatologická kritéria, intersticiální fibrózu/tubulární atrofii a arteriosklerózu a tato kritéria jsou také uznávána jako změny související se stárnutím. Výzkum ukázal, že pacienti s IgA nefropatií, u kterých se odhaduje, že mají více změn souvisejících se stárnutím, vykazují horší klinické výsledky, jako je vyšší věk [12, 13], vyšší hladiny sérového kreatininu, intersticiální fibróza a tubulární atrofie [13].

Ledvinová tkáň s IgA nefropatií může podporovat změny související s věkem nebo změny podobné stárnutí. Například klotho je transmembránový protein, který působí jako koreceptor pro hlavní fosfátovací, fibroblastový růstový faktor -23 (FGF23), který je považován za protein proti stárnutí [5, 14, 15]. Klotho má různé role při zmírňování vaskulární kalcifikace, tkáňové hypoxie a fibrózy ledvin [5, 14]. Jedna studie zahrnující kohortu zdravých lidí ve věku 70–79 let rozdělila účastníky podle jejich hladin rozpustného klotho a uvedla, že vyšší hladiny klotho byly spojeny s nižší pravděpodobností relativního snížení funkce ledvin [14]. Naproti tomu exprese klotho v renální tkáni postižené IgA nefropatií klesala s progresí její histopatologické závažnosti [15]. Ve skutečnosti nemáme jasnou odpověď ohledně vztahu mezi IgA nefropatií a stárnutím tkání.

Cistanche tubulosa

Závěr

Tato studie ukázala, že stárnutí je nezávislým faktorem, který podporuje tvorbu CFA. Jak ve skupině s nultou hodinou, tak ve skupině IgA vykazovaly bioptické vzorky od starších pacientů významně vyšší CFAR a skupina IgA vykazovala větší nárůst CFAR s věkem než skupina s nultou hodinou. Na druhé straně byl GSR nejvýznamnějším markerem stárnutí ve skupině s nultou hodinou; ve skupině IgA však nebyl žádný vztah mezi GSR a věkem pacienta. Tato zjištění naznačují, že CFA může být užitečným indikátorem stárnutí ledvin, zejména u ledvin postižených IgA nefropatií. K objasnění jeho užitečnosti je však nutné další zkoumání.

Reference

1. Stojanovic VR, Janovic ID, Ugrenovic SZ, Vasovic LP, Zivkovic VS, Jocic MV, Kundalik BK, Pavlovic MN (2012) Morfometrická analýza velikosti nesklerotizovaných glomerulů a obsahu pojivové tkáně během procesu stárnutí. Sci World J 2012:845046. https://doi.org/10.1100/2012/845046

2. Hodgin JB, Bitzer M, Wockman L, Afshinnia F, Wang SQ, Conner CO, Yang Y, Meadowbrooke C, Chowdhury M, Kikuchi M, Wiggins JE, Wiggins RC (2015) Glomerulární stárnutí a fokální globální glomeruloskleróza: fotometrická perspektiva . J Am Soc Nephrol 26:3162–3178. https://doi.org/10.1681/ASN.2014080752

3. Denic A, Glassock RJ, pravidlo AD (2016) Strukturální a funkční změny se stárnutím ledvin. Adv Chronic Kidney Dis 23:19–28. https://doi.org/10.1053/j.ackd.2015.08.004

4. Puelles VG, Douglas-Denton RN, Cullen-McEwen LA, Li J, Hughson MD, Hoy WE, Kerr PG, Bertram JF (2015) Počet podocytů u dětí a dospělých: asociace s velikostí glomerulů a počty dalších glomerulárních rezidentních buněk . J Am Soc Nephrol 26:2277–2288. https://doi.org/10.1681/ASN.2014070641

5. O'Sullivan ED, Hughes J, Ferenbach DA (2017) Renální stárnutí: příčiny a důsledky. J Am Soc Nephrol 28:407–420. https://doi.org/10.1681/ASN.2015121308

6. Glassock RJ, pravidlo AD (2012) Důsledky anatomických a funkčních změn stárnoucí ledviny: s důrazem na glomeruly. Kidney Int 82:270–277. https://doi.org/10.1038/ki. 2012,65

7. Inomata I (1986) Klinicko-patologická studie depozit cévních pólů pozorovaných ve vzorcích renální biopsie. Jikeikai Med J 101:1009–1020 ((v japonštině))

8. Hommos MS, Glassock RJ, Rule AD (2017) Strukturální a funkční změny v lidských ledvinách se zdravým stárnutím. J Am Soc Nephrol 28:2838–2844. https://doi.org/10.1681/ASN.2015121308

9. Tan JC, Workeneh B, Busque S, Blouch K, Derby G, Myers BD (2009) Glomerulární funkce, struktura a počet v renálních aloštěpech od starších zemřelých dárců. J Am Soc Nephrol 20:181–188. https://doi.org/10.1681/ASN.2008030306

10. Neal CE, Arkill KP, Bell JS, Betteridge KB, Bates DO, Winlove CP, Salmon AHJ, Harper SJ (2018) Nové hemodynamické struktury v lidském glomerulu. Am J Physiol Renal Physiol 315:F1370–F1384. https://doi.org/10.1152/ajprenal.00566.2017

11. Roberts ISD, Cook HT, Troyanov S, Alpers CE, Amore A, Barratt J, Berthoud F, Bonsib S, Bruijn JA, Cattran DC, Rosanna Coppo R, D'Agati V, et al (2009) Oxfordská klasifikace IgA nefropatie: definice patologie, korelace a reprodukovatelnost. Kidney Int 76:546–556. https://doi.org/10.1038/ki.2009. 168

12. Duan Z, Cai G, Chen Y, Liang S, Liu S, Wu J, Qiu Q, Lin S, Zhang X, Chen X (2013) Stárnutí podporuje progresi IgA nefropatie: systematický přehled a metaanalýza. Am J Nephrol 38:241–252. https://doi.org/10.1159/000354646

13. Sevillano AM, Diaz M, Caravaca-Fontàn F, Barrios C, Bernis C, Cabrera J, Calviño J, Castillo L, Cobelo C, Delgado-Malleñ P, Espinosa M, Fernandez-Juarez G, et al (2019) IgA nefropatie u starších pacientů. Clin J Am Soc Nephrol 14:1183–1192. https://doi.org/10.2215/CJN.13251118

14. Drew DA, Katz R, Kritchevsky S, Ix J, Shlipak M, Gutiérrez OM, Newman A, Hoofnagle A, Fried L, Semba RD, Sarnak M (2017) Asociace mezi rozpustným klotho a změnou funkce ledvin: zdravotní stárnutí a studium tělesného složení. J Am Soc Nephrol 28:1859–1866. https://doi.org/10.1681/ASN.2016080828

15. Yamada K, Doi S, Nakashima A, Kawaoka K, Ueno T, Doi T, Yokoyama Y, Arihiro K, Kohno N, Masaki T (2015) Exprese faktorů souvisejících s věkem při rozvoji renálního poškození u pacientů s IgA nefropatie. Clin Exp Nephrol 19:830–837. https://doi.org/10.1007/s10157-014-1070-2

Yukiko Kanetsuna1 · Kazunari Tanabe2 · Motoshi Hattori3 · Kosaku Nitta4 · Takahito Moriyama4 · Shigeru Horita5 · Yutaka Yamaguchi6

1 Ústav patologie, International University of Health and Welfare, Atami Hospital, 13-1 higashi-kagan-cho, Atami, Shizuoka 413-0012, Japonsko

2 Urologická klinika, Tokyo Women's Medical University, 8-1 Kawada-cho Shinjuku-ku, Tokio 162-8666, Japonsko

3 Ústav dětské nefrologie, Tokyo Women's Medical University, 8-1 Kawada-cho Shinjuku-ku, Tokio 162-8666, Japonsko

4 Ústav nefrologie, Tokyo Women's Medical University, 8-1 Kawada-cho Shinjuku-ku, Tokio 162-8666, Japonsko

5 Kidney Center, Tokyo Women's Medical University, 8-1 Kawada-cho Shinjuku-ku, Tokio 162-8666, Japonsko

6 Yamaguchi's Patological Laboratory, 1-31-20 Minoridai Matsudo-shi, Chiba 270-2231, Japonsko