Esenciální olej Camellia Japonica inhibuje produkci melaninu indukovanou MSH a aktivitu tyrosinázy v buňkách melanomu B16F10

Kontakt: ali.ma@wecistanche.com

Si Young Ha, Ji Young Jung a Jae-Kyung Yang

Esenciální oleje jsou aromatické oleje extrahované z listů, stonků, slupek, okvětních lístků a kořenů aromatických rostlin pěstovaných v přírodě nebo pěstovaných ekologickými metodami a jako přírodní látky mají různé léčebné účinky. Esenciální olej extrahovaný ze semen Camelliajaponica vykazuje různé funkční vlastnosti; nicméně, jehotyrosinázainhibiční aktivita nebyla rozsáhle zkoumána. Tato studie se provádí za účelem zkoumání chemického složení a inhibiční aktivity tyrosinázyEsenciální olej z kamélie japonské(CJS-EO). Hexamethylcyklotrisiloxan (42,36 procenta) a oktamethylcyklotetrasiloxan (23,28 procenta) jsou dvě primární složky CJS-EO, jak byly identifikovány pomocí plynové chromatografie-hmotnostní spektrometrie.The inhibiční aktivityCJS-EOa pozitivní kontrola arbutin jsou dále hodnoceny proti houbové tyrosináze.ThVýsledky ukazují, že CJS-EO a arbutin inhibujítyrosinázaaktivita. Navíc CJS-EO významně inhibuje melanogenezi ve skupině léčené -melanocyty stimulujícím hormonem a je potlačeno významné množství melaninu. Zjistit příčinu CJS-EOtyrosinázainhibiční efekt a melaninredukční efekt, provádí se genetické a proteinové analýzy. Na základě našich výsledků předběžně docházíme k závěru, žeCJS-EOmůže inhibovat melanocyty před škodlivými faktory, jako je protein související s tyrosinázou. Tyto výsledky ukazují, že CJS-EO má aktivitu potencantityrosinázy a může být dobrým kožnímběleníčinidlo.

Klikněte naCistanche UK pro inhibitory tyrosinázy.

Úvod

Barvu kůže ovlivňují pigmenty, jako je melanin v epidermis, hemoglobin v krevních cévách dermis a karoten v podkoží. Mezi nimi je vnější barva kůže určena množstvím a distribucí melaninového pigmentu [1]. Enzymy zapojené do syntézy inmelaninu jsou dobře známé jakotyrosináza, protein související s tyrosinázou-1 (TRP-1) a dopachromová tautomeráza (DCT, TRP-2) [2]. Mezi nimi je tyrosináza enzym působící v počáteční reakci, která je krokem určujícím rychlost syntézy melaninu, a oxiduje tyrosinázu na DOPA chinon [3]. Tedy látky, které inhibujítyrosináza,TRP-1 a TRP-2 mohou inhibovat syntézu melaninu, a tak mít pleťbělenífunkce [4]. Melanin hraje důležitou roli při ochraně pokožky před UV zářením a vnějšími škodlivými faktory lidské kůže. Pokud je však produkován v přebytku a hromadí se na kůži, může způsobit melasma, pihy, kožní skvrny atd. a může vést k buněčné smrti v důsledku toxicity prekurzorů melaninu a nemocí, jako je rakovina kůže [5–7].

Kyselina L-askorbová, arbutin a kyselina mléčná byly vyvinuty jako reprezentativní inhibitory produkce melaninu, ale jejich použití je přísně regulováno kvůli podráždění kůže nebo bezpečnostním problémům. Proto se aktivně provádí výzkum s cílem najít přírodní bělicí prostředek, který je bezpečný a účinný [8].

Je známo, že rostlinné esenciální oleje vykazují různé funkční vlastnosti, jako je silná antibakteriální aktivita a účinky proti stárnutí a regeneraci pokožky [9, 10]. Esenciální olej Cinnamomum cassia [4], esenciální olej Polygonum odoratum [11] a esenciální olej z listů Vitex negundo Linn [12] údajně obsahujítyrosinázainhibiční aktivity.

Camellia japonica (japonský název „tsubaki“) je v Japonsku oblíbeným stromem jako zahradní rostlina i zdroj olejného materiálu a lidové medicíny [13]. V Koreji, C. japonica je stálezelený strom patřící do čeledi Theaceae a rodu Camellia [14]. Olej ze semen C. japonica má dlouhou historii používání jako kosmetický ochranný prostředek k zajištění zdraví pokožky a vlasů a jako zklidňující prostředek [15]. Olej z C. japonicaseed vykazuje různé biologické aktivity, včetně antioxidační aktivity [16], antibakteriální aktivity [17], protizánětlivé aktivity [18] a kožní bariéry [19]. Navzdory širokému použití jen málo studií zkoumalo účinky oleje ze semen C. japonica na pokožku.bělení-přidruženétyrosinázaaktivita.

Proto v této studii chemické složení C. Esenciální olej japonica (CJS-EO) byl zkoumán pomocí plynové chromatografie-hmotnostní spektrometrie (GC-MS) atyrosinázabyla zkoumána inhibiční aktivita tohoto esenciálního oleje. Chcete-li řešit tuto inhibiční aktivitu, účinkyCJS-EOByla hodnocena melanogeneze stimulovaná -MSH a inhibice tyrosinázy v buňkách melanomu B16F10.

2. Materiály a metody

2.1. Rostlinné materiály.

Semena C. japonica byla zakoupena v březnu 2021 od Seohyeon Herbal Medicine FarmingAssociation, Nonsan, Jižní Korea. Rostlinné materiály identifikoval Hee-Gon Kang, zástupce z experimentálního lesa Gyeongsang National University.

Cistanche patří mezi tradiční čínskou medicínu

2.2. Reagencie.

Houbatyrosinázabyla zakoupena od T-3824 (Sigma–Aldrich, USA) a myš B16F10 mela noma byla zakoupena od CRL-6475 (AmericanType Culture Collection, Manassas, VA, USA). Média a činidla potřebná pro buněčnou kulturu byla zakoupena od Invitrogen (USA), Sigma (USA) a Nunc (USA). Byly použity forwestern blot, souprava western blot a polosuchý přenosový systém (Bio-Rad, USA) a výsledky byly potvrzeny pomocí systému analýzy obrazu (Bio-Rad, USA). Protilátky byly zakoupeny od Santa Cruz Biotech (USA). sulfoxid (DMSO) byl zakoupen od Sigma--Aldrich (St. Louis, MO, USA).

2.3. Extrakce a příprava vzorků.

Extrakce byla provedena pomocí metody publikované dříve s mírnými úpravami [4]. Stručně, semena C. japonica (500 g) byla umístěna do nádoby a extrahována destilací za použití 2000 ml vody po dobu 4 hodin. Vzniklá pára byla ochlazena pomocí uzavřeného chladicího systému a výsledná kapalina byla shromažďována v nádobě. -e olej plaval směrem k horní části destilované kapaliny, zatímco voda se usazovala ve spodní fázi kapaliny; proto,CJS-EObyla získána odstraněním horní fáze kapaliny, která obsahovala požadovaný olej, a poté skladována při -20 stupních až do použití. Pro buněčné experimenty byl použit 500 ppm zásobní roztok CJS-EO v DMSO.

2.4. Analýza GC-MS.

Těkavé složkyCJS-EObyly analyzovány pomocí GC-MS (Clarus 600 GC-MS, PerkinElmer, Shelton, CT, USA). Použitý analytický sloupec byl PerkinElmer Elite-5 ms (3{{10}} mm × 0,3 mm × 0,25 μm). Jako mobilní fáze bylo použito plynné helium (1,0 ml/min). Teplota pece byla zvýšena ze 40 stupňů na 100 stupňů rychlostí 10 stupňů/min a poté udržována po dobu 1,0 minuty. Dále byla teplota zvýšena na 230 stupňů rychlostí 10 stupňů/min a poté udržována po dobu 5 minut. Teplota vstřikovače byla nastavena na 200 stupňů a teplota detektoru byla nastavena na 250 stupňů. Analyzované výsledky byly identifikovány pomocí programu NIST Mass Spectral Search Program (verze 2,0 g, National Institute of Standards and Technology, Gaithersburg, MD, USA).

2.5. Buněčná kultura.

B16F10 myší melanomové buňky byly zakoupeny od Korea Cell Line Bank. Buněčná kultura byla provedena pomocí DMEM (WELGENE, Daegu, Korea) doplněného 10 procenty FBS (fetální bovinní sérum, WEL GENE, Daegu, Korea) a 1 procentem penicilin-streptomycin (Gibco BRL) při 37 stupních a 5 procentech CO2. Aby se vyřešil fenomén nadměrné hustoty způsobený proliferací počtu buněk, kultivované buňky B16F10 byly udržovány ve vhodném počtu pomocí trypsinu (Hyclone, USA).

2.6. Test buněčné životaschopnosti.

Buňky melanomu B16F10 byly nasazeny v množství 3 x 104/ml do 6-jamkové destičky pro buněčnou kulturu.CJS-EObyla ošetřena vhodnou koncentrací (31,25 ppm až 500 ppm) na jamku. - médium bylo odstraněno po 72 hodinách a 200 μl roztoku 3-(4,{8}}dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromidu (MTT) (Promega, Madison, WI, USA). MTT činidlo bylo čistě odstraněno po inkubaci v 37stupňovém CO2 inkubátoru po dobu 2 hodin. Pro obarvené buňky byly ošetřeny 2 ml DMSO, aby se rozpustil veškerý formazan vytvořený v jamkách. Životaschopnost buněk byla měřena absorbancí při 540 nm pomocí čtečky ELISA (SpectraMax190, Molecular Devices LLC, San Jose, CA, USA).

2.7. Test tyrosinázové aktivity.

tyrosinázaaktivita byla odhadnuta měřením rychlosti oxidace L-DOPA [20].CJS-EOa kultivován 3 dny. Buňky byly sklizeny, byl přidán lyzační pufr (1 procento Triton X-100, 0,1 M PMSF) a poté byly buňky lyžovány reakcí při 4 stupních po dobu 1 hodiny. -e supernatant byl shromážděn centrifugací při 12,000×g po dobu 15 minut. Po kvantifikaci proteinu v sebraném supernatantu bylo přidáno 10 mmol/ml L-DOPA. Dále byly buňky inkubovány v CO2 inkubátoru při 37 stupních po dobu 30 minut a absorbance při 490 nm byla zaznamenána pomocí absorbančního mikrodestičkového čtečky (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, San Jose, CA, USA). Získaná data byla vypočtena za použití následujícího vzorce: aktivita tyrosinázy (procenta) � (OD490 vzorku/OD490 kontroly) x 100.

2.8. Test obsahu melaninu.

Buňky B16F10 byly nasazeny do asijmkové destičky (2 x 105 buněk/jamka) po dobu 12 hodin po obnovení kultivačního média buněk ošetřených různými koncentracemi CJS-EO a -MSH po dobu 48 hodin a promytí dvakrát PBS [21]. Buňky B16F10 byly ošetřeny -MSH aCJS-EOspolečně, kultivovány po dobu 3 dnů a buňky byly sklizeny a dvakrát promyty fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem (PBS). Poté byl zpracován 1N NaOH obsahujícím 10 procent DMSO a nechal reagovat při 80 stupních po dobu 1 hodiny. Pro analýzu obsahu melaninu byla absorbance měřena při 475 nm pomocí absorbanční čtečky mikrodestiček (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, San Jose, CA, USA). -e procentuální hodnota buněk ošetřených CJS-EO byla vypočtena s ohledem na negativní kontrolu. Podrobně byla pro stanovení koncentrace proteinu v každém vzorku použita souprava BCA Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA). - obsah emelaninu byl normalizován na koncentraci buněčného proteinu (absorbance melaninu/ug proteinu).

2.9. Zkoumání genů.

Buňky melanomu B16F10 byly naočkovány do 100 mm misky v hustotě 1 x 106 buněk inDMEM (GIBCO, USA) doplněném 10 procenty hovězího séra a 1 procentem antibiotik; následně byly inkubovány v 5% CO2 při 37 stupních. Po změně na čerstvé 10 procent DMEMmedium,CJS-EObyl přidán na kultivační misku a kultivován po dobu 3 dnů a bylo přidáno 1 procento Amisoftu jako povrchově aktivní látky v množství odpovídajícím 1/1,000 objemu média. Po 3 dnech byl 1 ml TRIzolu (Invitrogen, USA ) byla přidána k buňkám, aby se prozkoumala hladina exprese mRNAbělenía RNA byla izolována pomocí izolační metody Invitrogen'sRNA. Po kvantifikaci množství RNA při 260 nm pomocí ultrafialového detektoru byla provedena reverzní transkripce-polymerázová řetězová reakce (RT-PCR). Pro RT-PCR byla použita sada all-in-one RT-PCR (Super Bio, Korea), experiment byl proveden na základě pokynů výrobce a podmínky reakce a primerů byly následující: sekvence aktinu byla 5'- GAG ACC TTC AAC ACC CCA GCC-3';antisense, 5′-GGC CAT CTC TTG CTC GAA GTC-3';reverzní transkripce při 50 stupních po dobu 30 minut; reverzní transkriptáza inaktivovaná při 96 stupních po dobu 3 minut, 94 stupních 30 s a 62 stupních 1 min, následovaných 25 cykly při 72 stupních po dobu 1 minuty. Posloupnosttyrosinázabyl 5'-GGC CAG CTT TCA GGC AGA GGT 3'; antisense, 5'-TGG TGC TTC ATG GGC AAA ATC-3';denaturováno při 90 stupních po dobu 30 s; reverzní transkripce při 60 stupních po dobu 30 minut; reverzní transkriptáza inaktivovaná při 94 stupních po dobu 1 min. Poté byla provedena PCR po dobu 30 cyklů při 94 stupních po dobu 30 s, 56 stupních 30 s a 72 stupních 1 minutu. -e sekvence proteinu 1 souvisejícího s tyrosinázou (TRP-1) byla 5'-GCT GCA GGAGCC TTC TTT CTC-3'; antisense, 5′-AAG ACG CTG CACTGC TGG TCT-3'; denaturováno při 90 stupních po dobu 30 s; reverzní transkripce při 60 stupních po dobu 30 minut; reverzní transkriptáza inaktivována při 94 stupních po dobu 1 minuty. Poté byla provedena PCR po 30 cyklů při 94 stupních po dobu 30 s, 56 stupních 30 s a 72 stupních 1 minutu. -e posloupnosttyrosináza-příbuzný protein 2 was5'-TGA CCG TGA GCA ATG GCC-3'; antisense, 5′-CGGTTG TGA CCA ATG GGT GCC-3'; reverzní transkripce při 50 stupních po dobu 30 minut; inaktivace reverzní transkriptázy při 96 stupních po dobu 3 minut, 94 stupních 1 min a 60 stupních 1 min. Následně bylo provedeno 72 PCR reakcí ve 25 cyklech po dobu 1 minuty.

2.10. Zkoumání exprese proteinů.

Buňky myšího melanomu B16F10 byly naočkovány do 100 mm misky při hustotě 5 x 105 buněk v DMEM doplněném 10 procenty FBS a 1 procentem antibiotik a poté kultivovány v 5 procentech CO2 při 37 stupních po dobu 1 dne. Následně byly vyměněny za nové médium aCJS-EObyl ošetřen v různých koncentracích a kultivován po dobu 3 dnů. Byl přidán 1% vodný roztok Amisoftu jako povrchově aktivní látky v objemu odpovídajícím 1/10}00 objemu média. -e kultivované buňky byly promyty PBS a přeneseny do 1,5 ml mikrozkumavky a poté do pufru pro narušení buněk (40 mM Tris-Cl [pH 7,4], 10 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0,1 procenta NP-40, 1 mM PMSF a koktejl inhibitorů proteázy). Poté, co byly buňky zničeny přidáním, byla provedena centrifugace při 15, 000 otáčkách za minutu při 4 stupních po dobu 10 minut a supernatant byl odebrán k oddělení proteinů. Izolované proteiny byly kvantifikovány pomocí metody Sigma'sBCA a byla provedena SDS-PAGE. Po přenesení SDS-PAGE gelu na PVDF membránu byl protein značen pomocí sekundární protilátky konjugované s primární protilátkou a peroxidázou a poté exponován na rentgenový film pomocí detekční soupravy western blot (Intron, Korea). Následně byly analyzovány hladiny exprese.

3. Výsledky

3.1. Chemické složení CJS-EO.

CJS-EO byl získán ve výtěžku 18 procent hmotn./hmotn. Chemické složení CJS-EO bylo analyzováno pomocí GC-MS (tabulka 1). -e píky byly separovány pomocí GC a 17 sloučenin bylo identifikováno pomocí MS, což představovalo 90 procent celkové plochy píku (tabulka 1). - hlavní chemické složkyCJS-EObyly hexamethylcyklotrisiloxan (42,36 procenta), oktamethylcyklotetrasiloxan (23,28 procenta), dekamethylcyklopentasiloxan (5,81 procenta), kyselina hexandiová (5,56 procenta) a vanilin (2,96 procenta). V předchozím výzkumu GC-MS analýza detekovala hexamethylcyklotrisiloxan v extraktech listů a stonků Bauhinia acuminataLinn [22]. Těkavé složky v Moringa oleifera se skládaly hlavně z esterů, kyselin, aldehydů a uhlovodíků a uhlovodíky jsou hlavně hexamethylcyklotrisiloxan [23]. Podobně byl v naší studii potvrzen hexamethylcyklotrisiloxan jako hlavní chemická složka CJS-EO. Jedna z hlavních chemických složek CJS-EO, vanilin, byla detekována v esenciálním oleji Eugenia caryophyllata a Ocimum basilicum[24], esenciálním oleji Hyssopus officinalis L. (Lamiaceae) [25] a silice Calea clematidea [26]. V předchozích studiích byl inhibiční účinek vanilinu na aktivity monofenolázy a difenolázy obsažené vtyrosinázabylo dříve hlášeno [27]. Je zajímavé, že nízkomolekulární cyklické těkavé methylsiloxanové sloučeniny včetně hexamethylcyklotrisiloxanu byly použity v různých kosmetických výrobcích a výrobcích osobní péče a mnoha dalších spotřebitelských výrobcích [28]. V budoucnu má být sloučenina zodpovědná za inhibici produkce melaninu a aktivity tyrosinázy extrahována a mohla by být použita v přírodní kosmetice nebo medicíně.

3.2. Buněčná životaschopnost melanomových buněk indukovaná CJS-EO.

Naše výsledky ukázaly, že buňky myšího melanomu B16F10 ošetřené koncentrací 31,25 až 500 ppmCJS-EOpo dobu 24 hodin nevyvolalo žádné změny v životaschopnosti buněk. Při koncentraci 31,25 až 500 ppm byla životaschopnost buněk 90 procent až 100 procent, což indikovalo nízkou cytotoxicitu (obrázek 1). - Proto byly všechny koncentrace (31,25 až 500 ppm) vhodné pro další hodnocení účinků CJS-EO natyrosinázaaktivitu a syntézu melaninu v buňkách B16F10.

3.3. Inhibice intracelulární tyrosinázové aktivity CJS-EO.

ÚčinekCJS-EOna oxidaci bytrosinázy katalyzované L-DOPA a také na oxidaci arbutinu, dobře známéhotyrosinázainhibitor, byl zkoumán. Jak je znázorněno na obrázku 2, CJS-EO andarbutin vykazoval silné inhibiční účinky na aktivitu L-DOPA oxidázy způsobem závislým na dávce. Výsledky ukazují, že CJS-EO a arbutin vykazovaly podobné inhibiční aktivity tyrosinázy. Na základě statistické analýzy měl arbutin významně vyšší inhibiční aktivitu vůči tyrosináze než CJS-EO při 125 a 500 ppm. Avšak při 31,25, 32,50 a 250 ppm byly na tyrosinázu indikovány podobné inhibiční účinky (nevýznamné) ve srovnání s inhibiční aktivitou CJS-EO na tyrosinázu na dobře známý inhibitor tyrosinázy arbutin.

3.4. Vliv CJS-EO na obsah melaninu v buňkách B16F10.

Pro potvrzení, zda CJS-EO přispěl k inhibici produkce melaninu, byl rozdíl v sekreci melaninu po ošetření každou koncentrací CJS-EO analyzován v prostředí podporujícím produkci melaninu stimulací -MSH.CJS-EObyl zpracován v koncentracích 31,25, 62,5, 125, 250 a 500 ppm, stejným způsobem jako utyrosinázaaktivita. CJS-EO významně inhiboval melanogenezi ve skupině léčené -MSH a významné množství melaninu bylo potlačeno (obrázek 3(b)). - bylo podobné pozorování u pozitivní kontroly, arbutinu (obrázek 3(a)). Zejména při nejnižší koncentraci 32,25 ppm v léčené skupině se obsah melaninu významně snížil ve srovnání s neošetřenou skupinou (0 ppm). Proto byl učiněn závěr, že CJS EO účinně inhibuje syntézu nebo sekreci buněk melanininu B16F10. Ve skupinách léčených 31,25, 62,5, 125, 250 a 500 ppm CJS-EO se obsah melaninu snížil 1,1, 1,5, 2,6, 2,7 a 4,3krát, v tomto pořadí, ve srovnání s neléčenou skupinou, což ukazuje na výraznou inhibici sekrece melaninu účinek. - Výsledky testu cytotoxicity, testu inhibice tyrosinázy a testu obsahu melaninu naznačují, že CJS-EO je extrémně cenný jako přírodní materiál vběleníkosmetika.

3.5. Genetické vyšetřování.

K určení genu vCJS-EOkterý inhibuje biosyntézu melaninu ovlivněním exprese genů zapojených do dráhy biosyntézy melaninu, byl experiment proveden pomocí metody RT-PCR a výsledky jsou uvedeny na obrázku 4. -MSH byl použit jako anegativní kontrola a CJS-EO vykazoval inhibiční účinky na exprese tyrosinázy, TRP-1 a TRP-2 ve všech koncentracích. Konkrétně CJS-EO inhiboval expresi tyrosinázy o více než 50 procent při 125 ppm nebo vyšší. Zjistili jsme, že inhibiční účinnosttyrosináza, exprese TRP-1 a TRP{1}} se snižovala s rostoucí koncentrací CJS EO. Výsledky tohoto experimentu naznačují, že inhibiční účinek CJS-EO na melanogenezi přispěl k inhibici exprese tyrosinázy, TRP-1 a TRP-2.

3.6. Zkoumání exprese proteinů.

Účinek CJS-EO na expresi proteinů účastnících se biosyntézy melaninu byl potvrzen pomocí western blottingu a výsledky jsou uvedeny na obrázku 5. Když byl CJS-EO srovnán se skupinou léčenou -MSH, která byla negativní kontrolní skupinou, bylo to potvrdilCJS-EOvykazovaly inhibiční účinek; ve skutečnosti CJS-EO vykazoval nejvýraznější inhibiční účinek na tyrosinázu a TRP-2. -e stupeň inhibice byl 46,6 procent a 40,7 procent při 500 ppm tyrosinázy a TRP-2, v tomto pořadí, ve srovnání se skupinou léčenou -MSH. Ačkoli TRP-1naznačovala nejmenší inhibiční účinek, vykazovala významný pokles ve srovnání se skupinou léčenou -MSH. Proto analýza proteinů ukázala stejný trend jako genová analýza a bylo potvrzeno, že CJS-EO stimulovaltyrosináza, TRP-1 a TRP-2 k navození redukce melaninu.

4. Diskuze

tyrosinázaje enzym zapojený do produkce melaninu prostřednictvím enzymatické oxidační dráhy, která určuje barvu kůže, vlasů a očí, stejně jako hnědnutí některých potravin [29]. Chemická činidla, která prokazují antityrosinázovou aktivitu, se v klinické medicíně používají k léčbě dermatologických poruch spojených s hyperpigmentací melaninu [30]. Produkce melaninu může přispívat k některým histopatologickým rysům výlučně u maligního karcinomu [31]. Proto mohou antityrosinázové látky usnadnit léčbu rakoviny kůže. V posledních letech získává stále větší zájem používání přírodních produktů namísto chemických nebo syntetických sloučenin, protože jsou ekonomičtější, šetrnější k životnímu prostředí a bezpečné [32]. Kromě toho je důležitý výzkum a vývoj zelených technologií a levných surovin. V nedávné době byla popsána antityrosinázová aktivita některých rostlin [33]. Údaje týkající se esenciálních olejů přírodních rostlin jsou však vzácné. Proto identifikace rostlinných esenciálních olejů, které mají vysokou antityrosinázovou aktivitu, vzbudila značný zájem. Etiologie pigmentace není dobře objasněna. Biosyntéza melaninu je katalyzována enzymy specifickými pro melanocyty, jako jsou TRP-1 a TRP-2 [34].tyrosinázaje životně důležitý pro biosyntézu melaninu v melanocytech a je znám již mnoho desetiletí [34]. Proto je tyrosináza důležitým indexem pro léčbu pigmentace. V naší studii CJS-EO snižoval melaninsyntézu a ovlivňoval antityrosinázovou aktivitu; proto jsme došli k závěru, že antimelanogeneze pomocí CJS-EO může být spojena s jinými enzymy (TRP-1 a TRP-2). Bylo popsáno, že těkavé látky vykazují vysokou antioxidační aktivitu [35]. Jako těkavé látky se CJS-EO vyznačuje štiplavým zápachem. Je syntetizován rostlinami jako sekundární metabolity a je široce používán díky svým baktericidním, virucidním, fungicidním, protirakovinným, antioxidačním a antidiabetickým účinkům [36]. -e CJS-EO zkoumaný v této studii byl primárně složen z hexamethylcyklotrisiloxanu, který tvořil 42,36 procenta celkového chemického obsahu. Bylo prokázáno, že Toxicodendron vernicifluum obsahující hexamethylcyklotrisiloxan vykazuje různé biologické a farmakologické aktivity, včetně centrálních, antimikrobiálních a protinádorových aktivit [37]. V naší studii vysoké koncentrace CJS-EO naznačovaly pouze mírné cytotoxické účinky na melanocyty. Proto byl pozorován inhibiční účinek CJS-EO na -MSH-indukovanou propagaci buněk B16F10. Výsledky ukázaly, že předběžné ošetření CJS-EO snížilo -MSH-indukované množení buněk způsobem závislým na dávce (obrázek 3), a tyto výsledky byly podobné s čistým arbutinem použitým jako pozitivní kontrola. Ve většině přírodních esenciálních olejů používaných v tradiční medicíně se místo čistých sloučenin používají extrakty obsahující komplexní sloučeniny. Tyto přírodní esenciální oleje obvykle neobsahují těkavé sloučeniny s vysoce specifickými biologickými aktivitami, ale těkavé sloučeniny s širšími interakcemi [38]. Proto je obtížné, aby CJS-EO, který obsahuje mnoho složek, měl vyšší antimelanogenetický účinek než čistý arbutin. V budoucnu je nutné oddělit těkavé složky obsažené vCJS-EOa studovat antimelanogenetický účinek na separovanou jedinou složku. Na základě našich výsledků jsme předběžně došli k závěru, že CJS-EO může inhibovat melanocyty před škodlivými faktory, jako je TRP-1 (obrázky 4 a 5).Thproto jsme předpokládali, že hexamethylcyklotrisiloxan byl hlavní biologicky aktivní sloučeninou v CJS-EO. Stávající studie týkající sebělenívlastnost CJS-EO je nedostatečná; proto může být použit jako základní údaje v budoucích studiích týkajících se hlavních složek, které vykazují bělící účinnost.

5. Závěry

Podle našich nejlepších znalostí se jedná o první studii, která uvádí účinnost CJS-EO při inhibici produkce melaninu v buňkách melanomu B16F10. Naše pozorování ukázala, že CJS-EO inhiboval -MSH-indukovanou melanogenezi prostřednictvímtyrosinázainaktivaci a současnou supresi exprese proteinů zapojených do biosyntézy melaninu v buňkách melanomu B16F10.CJS-EOje známo, že je bezpečný, a v této studii jsme potvrdili, že je necytotoxický.ThProto může být CJS-EO potenciálně použit jako účinný kožníběleníprostředek pro budoucí vývoj aromaterapie na bázi komplementární a alternativní medicíny.