APOBEC3-zprostředkovaná mutageneze u rakoviny: příčiny, klinický význam a terapeutický potenciál

Abstraktní

Apolipoprotein B mRNA-editující enzym, katalytické polypeptidy (APOBEC) jsou cytosindeaminázy zapojené do vrozené a adaptivní imunity. Někteří členové rodiny APOBEC však mohou také deaminovat hostitelské genomy za účelem vytvoření onkogenních mutací. Výsledné mutace, především signatury 2 a 13, se vyskytují u mnoha typů nádorů a patří mezi nejčastější mutační signatury u rakoviny. Tento přehled shrnuje současné důkazy implikující APOBEC3 jako hlavní mutátory a nastiňuje exogenní a endogenní spouštěče exprese a mutační aktivity APOBEC3. Přehled také pojednává o tom, jak mutageneze zprostředkovaná APOBEC{5}} ovlivňuje vývoj nádoru prostřednictvím mutagenních i nemutagenních cest, včetně indukce řidičských mutací a modulace imunitního mikroprostředí nádoru. Přechod od molekulární biologie ke klinickým výsledkům, přehled končí shrnutím rozdílného prognostického významu APOBEC3 napříč typy rakoviny a jejich terapeutického potenciálu v současné a budoucí klinické krajině.

Klíčová slova APOBEC, Rakovina, Somatické mutace, Genetika zárodečné linie, Nádorové mikroprostředí, Biomarkery, Imunoterapie

Čínská bylina cistanche rostlina-Protinádorová

Pozadí

polypeptidy (APOBEC) jsou třídou cytosindeamináz s jedenácti členy primární rodiny: APOBEC1, aktivací indukovaná deamináza (AID), APOBEC2, APOBEC3 (A–H) a APOBEC4. Alternativní sestřih APOBEC3B, APOBEC3H a APOBEC3F dále diverzifikuje superrodinu APOBEC [1–4]. Zatímco všichni členové rodiny APOBEC sdílejí konzervovanou katalytickou doménu, mají odlišné funkce, mutační substráty a vzorce tkáňové exprese [5]. AID je například exprimována v aktivovaných B buňkách a usnadňuje diverzifikaci protilátek deaminací imunoglobulinových genů [6]. Naproti tomu APOBEC1 je exprimován v tenkém střevě a upravuje mRNA tak, aby umožnila tkáňově specifickou expresi zkráceného, ​​ale funkčně důležitého gastrointestinálního proteinu [7– 9]. APOBEC3 jsou mnohem více exprimovány v lidských tkáních a deaminují – a tím poškozují – virové genomy jako součást vrozené imunitní odpovědi [10]. Ačkoli APOBEC3 chrání buňky před virovou infekcí, také činí hostitelskou DNA zranitelnou vůči mutacím. Mutageneze zprostředkovaná APOBEC3-začíná deaminací cytosinu a všechny APOBEC3 mohou deaminovat jednovláknovou DNA (ssDNA) s různou úrovní enzymatické aktivity [11–13]. Substráty ssDNA pro APOBEC3 mohou přechodně vznikat ve dvouvláknovém genomu během normálních buněčných procesů, jako je replikace DNA, transkripce a oprava genomu. Například APOBEC3A i APOBEC3B mohou během replikace DNA deaminovat templáty zaostávajících vláken [14–16]. APOBEC3A může také působit na vlásenkové smyčky, které se tvoří během replikace DNA, zatímco APOBEC3B přednostně deaminuje R smyčky během transkripce [17, 18]. APOBEC3G může podobně působit na ssDNA během transkripce, zejména v rámci 5′ UTR [15]. Navíc bylo prokázáno, že APOBEC3G deaminuje rozvinutou a volně složenou ssDNA (obr. 1) [19].

Obr. 1 Mechanismy a preferované substráty pro APOBEC3-zprostředkovanou mutagenezi. Horní panel: APOBEC3 deaminují ssDNA a zanechávají uracil v templátu DNA. Chybné cesty replikace a opravy pak mohou generovat mutační signatury 2 a 13. Oprava polymerázou translezní syntézy (TLS) REVI generuje mutaci C-to-G (signatura 13), zatímco oprava jinými enzymy, jako je DNA polymeráza δ, DNA polymeráza ε, a TLS polymeráza κ generuje mutaci C-to-T (podpis 2) [20]. Spodní panel: Hlavní mutátory mezi superrodinou APOBEC3 mají odlišné substrátové preference definované hlavně trinukleotidovým kontextem a sekundární strukturou ssDNA.

V rámci ssDNA různé APOEBC3 deaminují cytosiny v odlišných trinukleotidových kontextech. Například APOBEC3A a APOBEC3B – což jsou hlavní mutátory – deaminují thiamin předcházející motivy cytosinu (TpC); APOBEC3A přednostně působí na TpC motivy po pyrimidinech, zatímco APOBEC3B má tendenci deaminovat TpC motivy po purinech [20–23]. Po deaminaci mohou různé buněčné procesy vytvořit mutace C-toT a C-to-G, které jsou v COSMIC definovány jako signatury 2 a 13 [24–26]. Dřívější přechod C-to-T je častější a vzniká aberantní replikací templátů DNA obsahujících uracil, přičemž k oběma substitucím může dojít chybnou opravou abazických míst generovaných aktivitou uracil glykosylázy (obr. 1) [20, 27–29 ]. Kromě těchto konvenčně definovaných APOBEC3-indukovaných mutačních signatur může APOBEC3G způsobit C-to-T přechody v motivech TCC, GCC, CCC, CCT a GCG (obr. 1) [30]. Mutace vyvolané APOBEC3-jsou u rakoviny všudypřítomné a mohou se vyskytovat rozptýlené v celém genomu nebo ve shlucích. Více než 75 % kataegis v nádorových genomech bylo připisováno aktivitě APOBEC3, ve srovnání s 15 % difuznější hypermutace omikli [31, 32]. Celkově mohou APOBEC3-navozené mutace tvořit až 68 % nádorových mutací a nacházejí se u více než poloviny všech nádorů; Častější jsou pouze signatury související s věkem [26, 27, 33]. Mnohé z těchto změn vyvolaných APOBEC3-jsou vysoce recidivujícími hnacími mutacemi ovlivňujícími onkogeny a supresory nádorů a APOBEC3 mohou také ovlivnit průběh onemocnění prostřednictvím nemutagenních cest, jako je imunitní modulace v mikroprostředí nádoru.

Tabulka 1 Nadměrná exprese a korelace APOBEC3 s mutační zátěží napříč rakovinami

APOBEC3 mohou podporovat imunitně aktivované nebo imunosuprimované fenotypy, což může částečně vysvětlit jejich různý prognostický význam napříč typy rakoviny. Na základě klinických asociací a preklinických studií by APOBEC3 mohly být použity jako biomarkery a cíleny pro terapie. Příčiny a klinické důsledky mutageneze zprostředkované APOBEC3-jsou proto důležitými oblastmi výzkumu a středem zájmu tohoto přehledu.

Exprese APOBEC3 u rakoviny

APOBEC3 jsou exprimovány v nízkých hladinách v mnoha zdravých tkáních, ale často jsou nadměrně exprimovány v nádorech. Většina studií používala k detekci exprese APOBEC3 profilování založené na RNA a analýzy založené na proteinech byly omezenější (tabulka 1). APOBEC3B je obecně exprimován ve vyšších hladinách než ostatní členové rodiny APOBEC3 a analýza více druhů rakoviny odhalila obohacení APOBEC3B u osmi typů nádorů: močového měchýře, prsu, hlavy a krku, adenokarcinom plic, spinocelulární karcinom plic, prostata, ledviny z jasných buněk, a dělohy [34]. Vysoká exprese APOBEC3B byla také pozorována u rakoviny děložního čípku a kůže, ačkoli zdravá tkáň nebyla pro srovnání k dispozici [34]. Podobně vysoké hladiny APOBEC3B byly hlášeny u nádorů močového měchýře, žlučovodů, plic, žaludku, jícnu, neuroendokrinních a ovariálních nádorů [35–43]. Exprese jiných APOBEC3 může být také dysregulována u rakoviny. Například APOBEC3G byl nalezen ve vysokých hladinách u nádorů tlustého střeva a pankreatu [49, 50]. U rakoviny prsu studie odhalily obohacení APOBEC3A, APOBEC3B a APOBEC3H [27, 48]. Vysoká exprese APOBEC3 byla také pozorována u četných hematologických rakovin. Například obohacení APOBEC3A bylo zaznamenáno u leukémie a APOBEC3B i APOBEC3C byly nalezeny ve zvýšených hladinách u primárního efuzního lymfomu [45, 52].

Výhody cistanche tubulosa-Antitumor

APOBEC3A a APOBEC3B jako hlavní mutátory

Nadměrná exprese APOBEC3 pravděpodobně podporuje mutagenezi, protože četné studie identifikovaly korelace mezi expresí APOBEC3 a zátěží mutací specifickou pro signaturu (tabulka 1). V kombinované analýze více typů nádorů byla exprese APOBEC3B silně spojena s vyšší mutační zátěží vyvolanou APOBEC3-; APOBEC3A, APOBEC3F a APOBEC3G vykazovaly podobné, ale slabší korelace [27]. Vysoká exprese APOBEC3B byla také spojena s větším počtem mutací indukovaných APOBEC{11}} u rakoviny plic, zatímco hladiny APOBEC3A i APOBEC3B korelovaly s mutacemi indukovanými APOBEC3- u rakoviny prsu [22, 47, 53, 54]. Podobné souvislosti byly pozorovány u rakoviny močového měchýře, která má jednu z nejvyšších mutací vyvolaných APOBEC{19}} [1, 27, 34, 46]. U cholangiokarcinomu byla pouze exprese APOBEC3A spojena s APOBEC3-indukovanou mutační zátěží [43]. Tyto korelace naznačují, že APOBEC3A i APOBEC3B přispívají k mutagenezi, ale relativní význam těchto členů rodiny zůstává kontroverzní [47, 58]. APOBEC3B se často považuje za hlavní mutátor vzhledem k jeho vyšší expresi v mnoha nádorech [22, 26, 34–36, 45, 48, 59]. APOBEC3A má však větší enzymatickou aktivitu, což mu může umožnit generovat více mutací navzdory obecně nižší tkáňové expresi [47, 60]. V souladu s tím srovnání APOBEC3 knockout buněčných linií zjistilo, že deficit APOBEC3A má největší vliv na mutagenezi [58]. Tento výsledek potvrzuje dřívější nálezy u kvasinek, které nejprve rozlišily mutace indukované APOBEC3A a APOBEC3B a zjistily, že první z nich jsou hojnější v genomech nádorů [23]. Další implikující APOBEC3A jako predominantního mutátoru, delece zárodečné linie APOBEC3B, která vytváří chiméru kódující oblasti APOBEC3A fúzovanou s 5′ UTR APOBEC3B, byla spojena s větším počtem mutací indukovaných APOBEC u některých rakovin [61–64]. Jiní členové rodiny APOBEC3 pravděpodobně vyvolávají mutace, protože detekovaná in vitro analýza pokračovala – i když se významně snížila – v získávání signatur 2 a 13, přestože vyřadily APOBEC3A i APOBEC3B [58]. APOBEC3H může přispívat k této reziduální mutagenezi, zejména u rakovin s APOBEC3H haplotypem I, který má silnou enzymatickou aktivitu a zvýšenou jadernou lokalizaci [65]. APOBEC3G by také mohl být mutagenní, protože jeho exprese byla spojena s výrazným mutačním podpisem [30]. Mnohočetné APOBEC3 tak mohou indukovat mutace u rakoviny, přičemž nejvýznamnější mutátory se mohou napříč nádory lišit.

Exogenní a endogenní spouštěče mutageneze zprostředkované APOBEC3

Virová infekce

APOBEC3 jsou interferony stimulované geny indukované širokou škálou virů, včetně polyomavirů, parvovirů, herpesvirů a virů hepatitidy B [66]. Mnoho nádorů souvisejících s virem má tedy vysokou zátěž mutačních signatur 2 a 13. Rakovina děložního čípku je například způsobena lidským papilomavirem (HPV) ve více než 95 % případů a má hojné mutace vyvolané APOBEC3- [67 , 68]. Mutace indukované APOBEC jsou běžné také u spinocelulárního karcinomu hlavy a krku (HNSCC), se silnou korelací mezi pozitivitou HPV a mutačními signaturami 2 a 13 [69]. Virové infekce mohou také přispívat k mutagenezi zprostředkované APOBEC{14}}u některých rakovin, které nejsou tradičně chápány jako viry. Podle hypotézy „hit and run“ může virová infekce vyvolat aktivitu APOBEC3 časně v tumorigenezi, ale je odstraněna před detekcí tumoru [70]. Tento předpoklad by mohl být relevantní pro některé případy karcinomu močového měchýře, protože anamnéza moči pozitivní na BK polyomavirus (BKPyV) byla spojena se zvýšeným rizikem karcinomu močového měchýře [71]. Bylo také prokázáno, že infekce BKPyV indukuje expresi APOBEC3 a deaminační aktivitu v in vitro modelu normálního lidského urotelu [72]. Potenciální riziko karcinogeneze močového měchýře vyvolané BKPyV může být zvláště vysoké u imunokompromitovaných populací, konkrétně u příjemců transplantovaných orgánů. Virémie BKPyV nebo jiné komplikace související s polyomavirem jsou tedy spojeny se čtyřnásobně vyšším rizikem rakoviny močového měchýře po transplantaci ledviny [73–77].

Hluboké sekvenování genomů tumoru močového měchýře od příjemců transplantovaných orgánů rovněž odhalilo integraci BKPyV [78–80]. Zatímco některé virové infekce mohou u některých tradičně nevirových rakovin přispívat k mutagenezi zprostředkované APOBEC3-, vzhledem k pokračujícímu získávání mutací vyvolaných APOBEC3-pozdě ve vývoji nádoru a pravděpodobně po odstranění infekce jsou pravděpodobně důležité další faktory [22, 56, 81, 82]. Takové nevirové faktory mohou také vysvětlit prevalenci APOBEC{10}}indukovaných mutací u rakovin, u nichž je virová etiologie hit-and-run méně pravděpodobná.

cistanche výhody pro muže-posilují imunitní systém

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Enhance Immunity

【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Zánět

Zánět může vyvolat nesčetné množství faktorů, které mohou zvýšit expresi APOBEC3 prostřednictvím signalizace NF-κB – hlavní zánětlivé dráhy. Na podporu této hypotézy byla v promotoru APOBEC3B detekována tři vazebná místa NF-κB a heterodimery p65/p50 a p65/c-Rel – které jsou součástí kanonické dráhy NF-κB – se ukázaly jako důležité pro transkripci APOBEC3B [83]. . Nekanonická signalizace NF-KB může také regulovat expresi APOBEC3, protože promotor APOBEC3B obsahuje vazebné místo RelB. Mnoho známých induktorů APOBEC3, jako jsou LPS a IL-4, jsou také silnými aktivátory NF-κB, což dále implikuje NF-κB jako transkripční ovladač APOBEC3 během zánětu [84]. Signalizace NF-KB může také zvýšit expresi APOBEC3 nepřímo prostřednictvím transkripce prozánětlivých mediátorů. Například bylo prokázáno, že cílový gen NF-κB IL-6 indukuje expresi APOBEC3B u hepatocelulárního karcinomu prostřednictvím signalizace JAK/STAT [85, 86]. Podobně bylo zjištěno, že TNF- podporuje expresi APOBEC3A v keratinocytech [87, 88]. Studie cholangiokarcinomu a rakoviny žlučníku potvrdila tato zjištění a zjistila zvýšenou regulaci APOEBC3A i APOBEC3B při expozici IL-6 a TNF [43]. IFN- se navíc předpokládá jako hnací síla exprese APOBEC3B u nádorů močového měchýře a adenokarcinomu plic [46, 89]. Signalizace NF-κB – se schopností působit jak přímo prostřednictvím transkripce APOBEC3, tak nepřímo prostřednictvím jiných zánětlivých mediátorů – je tedy pravděpodobnou hnací silou mutageneze zprostředkované APOBEC3- u rakoviny (obr. 2). Tato APOBEC3-indukující role NF-κB může být zvláště důležitá u imunologicky „horkých“ nádorů s vysoce zaníceným mikroprostředím.

Expozice drogám a replikační stres

Expozice určitým lékům může také vyvolat APOBEC3-zprostředkovanou mutagenezi a chemoterapie, jako je bleomycin, cisplatina, etoposid, 5-fluorouracil, gemcitabin, hydroxymočovina, afidikolin, kamptotecin, všechny prokazatelně indukují expresi APOBEC3 u rakoviny buněčné linie [1, 61, 90, 91]. Signalizace NF-κB pravděpodobně zprostředkovává indukci APOBEC3 v reakci na některá z těchto léků, ale hlavní roli může hrát také replikační stres a signalizace PI3K (obr. 2) [1, 90, 92, 93]. Kromě zvýšení exprese APOBEC3 mohou genotoxická léčiva dále podporovat mutagenezi zprostředkovanou APOBEC{16}} tím, že indukují poškození genomu, a tím vytvářejí substráty ssDNA (obr. 3). I v nepřítomnosti genotoxických léků mohou rakovinné buňky zažít APOBEC3-indukující replikační stres v důsledku nahromaděného poškození DNA a specifických onkogenních mutací. U karcinomu prsu se například ukázalo, že deplece PTEN a amplifikace HER2 indukují replikační stres a zvyšují aktivitu APOBEC3B in vitro [90]. U rakoviny plic byla ztráta FHIT1 – běžné genetické změny, která způsobuje replikační stres – spojena s vyšší mutační zátěží vyvolanou APOBEC3- [53]. Tyto mutace vyvolávající replikační stres mohou být obzvláště silnými spouštěči mutageneze zprostředkované APOBEC{26}}, protože způsobují trvalé buněčné změny na rozdíl od přechodnější indukce APOBEC3 po virové infekci nebo expozici léku. V pozitivní zpětnovazební smyčce může zvýšená exprese APOBEC3 zhoršit replikační stres v důsledku dalšího poškození DNA, zpomalených replikačních vidlic a zástavy buněčného cyklu [52, 97–99]. V kontextu replikačního stresu mohou být APOBEC3 – zejména APOBEC3B – obzvláště náchylné k tomu, aby způsobovaly kataegis spíše než difúznější mutace. V souladu s tím bylo prokázáno, že APOBEC3B indukuje kataegis v rakovinných buněčných liniích během telomerové krize [94]. APOBEC3B byl podobně asociován s kataegis v p53-deficientních buněčných liniích a pan-kancerogenní analýza zjistila, že exprese APOBEC3B pozitivně korelovala s kataegis [31, 99].

cistanche tubulosa-zlepšuje imunitní systém

Somatické a zárodečné změny

Somatické mutace ve více genech byly spojeny se zvýšenou mutagenezí zprostředkovanou APOBEC{0}}, ale celogenomové sekvenační analýzy nezjistily opakující se somatické jednonukleotidové varianty v kódujících nebo regulačních oblastech APOBEC3 [100, 101]. Somatické mutace, které zvyšují deaminační aktivitu APOBEC3, jsou tedy nepravděpodobné, stejně jako mutace, které mění expresi APOBEC3 prostřednictvím zvýšené aktivity promotoru nebo zesilovače. Zvýšená exprese APOBEC3 se však může objevit v důsledku amplifikace počtu kopií u rakoviny. Ačkoli byla zaznamenána pouze u jednoho typu rakoviny, variace počtu kopií APOBEC3 byla nalezena u ~30 % plicních nádorů [36, 102]. Tato genetická změna byla spojena se zvýšenou expresí APOBEC3B a vyšší mutační zátěží vyvolanou APOBEC [36]. Zárodečné varianty v lokusu genu APOBEC3 se zdají být běžnější a mohou ovlivnit expresi APOBEC3 a riziko rakoviny. Například jednonukleotidový polymorfismus (SNP) rs1014971 – který se nachází před shlukem genů APOBEC3 – je spojen se zvýšenou expresí APOBEC3B, obohacením APOBEC3-indukovaných mutací a vyšším rizikem rakoviny močového měchýře [61, 63, 103]. U rakoviny prsu je deleční polymorfismus, který generuje chiméru APOBEC3A/B, spojen se zvýšeným rizikem onemocnění, větším počtem mutací vyvolaných APOBEC{26}}a špatnou diferenciací nádoru (známka negativní prognózy) [47, 61, 62, 64 104, 105]. Stejný deleční polymorfismus může přispívat k hypermutaci vyvolané APOBEC3-u akutní lymfoblastické leukémie [62]. U karcinomu plic byla kombinace šesti SNP, které definují APOBEC3H haplotyp I, spojena se zvýšeným rizikem onemocnění [65] (tabulka 2). Genetické variace v rámci tohoto haplotypu mohou dále zvýšit riziko rakoviny plic [106]. Navíc se ukázalo, že varianta rs2267401 zvyšuje riziko rakoviny žlučníku a hepatocelulárního karcinomu, pravděpodobně zvýšenou expresí APOBEC3B, která vzniká zvýšenou aktivitou promotoru a IL-6 odpovědí [43, 86]. Naproti tomu stejný SNP rs2267401 byl u tohoto typu nádoru spojen se sníženým rizikem cholangiokarcinomu a nižší aktivitou promotoru APOBEC3B, pravděpodobně v důsledku nadměrné exprese transkripčního represoru TFAP2A [43]. Další varianta, rs12157810, byla také spojena s nižším rizikem cholangiokarcinomu a rakoviny žlučníku, ačkoli bylo zjištěno, že zvyšuje aktivitu promotoru APOBEC3A [43]. Shodné výsledky byly pozorovány u karcinomu ledvin [108]. Další SNP rs139293 byl spojen se sníženým rizikem rakoviny plic [107]. Tato varianta se nachází v exonu a vytváří potenciálně aktivitu snižující změnu aminokyselin v APOBEC3H a může snížit expresi APOEBEC3H a APOBEC3C [107] (tabulka 2).

Obr. 2 Transkripční regulace genů APOBEC3. NF-KB signalizace je sdílená dráha pro endogenní a exogenní spouštěče APOBEC3. K indukci APOBEC3 působí signalizace NF-KB přímo prostřednictvím transkripce APOBEC3 a nepřímo prostřednictvím transkripce jiných zánětlivých mediátorů. Mezi klíčové zánětlivé mediátory patří interferony, TNF- a IL-6, které mohou řídit transkripci APOBEC3 prostřednictvím signalizace NF-κB a JAK/STAT. Replikační stres může navíc aktivovat signalizaci NF-KB prostřednictvím PI3K/Akt, aby se podpořila exprese APOBEC3

Obr. 3 Dvoufaktorový model pro APOBEC3-zprostředkovanou mutagenezi. Ve dvoufaktorovém modelu potřebuje mutageneze zprostředkovaná APOBEC3-jak indukci exprese APOBEC3, tak dostupnost ssDNA. Faktory, jako je expozice lékům, krize telomer a procesy opravy DNA, mohou generovat ssDNA, zatímco transkripční spouštěče mohou upregulovat expresi APOBEC3 [94–96]

Retrotransposonová aktivita, krize telomer a poškození DNA

Rakovinné buňky mají obecně nestabilní genomy, které mohou pohánět mutagenezi zprostředkovanou APOBEC3- prostřednictvím několika různých cest. Konkrétně může nestabilita genomu podporovat aktivitu retrotranspozonu a tím spouštět epizodické výbuchy mutageneze zprostředkované APOBEC3- [112]. Genomická nestabilita je také spojena s telomerovou krizí a chromothripsí, u kterých bylo prokázáno, že generují body zlomu ssDNA deaminované APOBEC3B [94] (obr. 3). Mutageneze zprostředkovaná APOBEC{6}} může být spuštěna upregulací APOBEC3 během replikačního stresu vyvolaného poškozením DNA a souvisejících procesů opravy nesprávného párování, jako je nehomologní spojování konců (NHEJ) a homologní rekombinace (HR), které generují meziprodukty ssDNA [90 , 95, 96, 113–116] (obr. 3). Vzhledem k tomu, že APOBEC3 mohou deaminovat templáty zaostávajících vláken, rychle se dělící rakovinné buňky mohou mít často exponovanou ssDNA a tím podporovat APOBEC3- zprostředkovanou mutagenezi [14]. Tyto endogenní procesy v rakovinných buňkách mohou řídit pokračující získávání APOBEC3-indukovaných mutací v pozdní fázi vývoje nádoru bez vystavení exogenním spouštěčům [81]. Důležitost poškození DNA a dostupnost substrátu ssDNA může také vysvětlit, proč jsou APOBEC3 exprimovány v nízkých hladinách v mnoha zdravých tkáních a typicky nezpůsobují značné mutace podobné nádorovému genomu. Významná mutace vyvolaná APOBEC3-nebyla detekována ve zdravé tkáni jícnu nebo endometriální žlázy, ačkoli nízké hladiny takových mutací byly nalezeny v podskupině nerakovinných střevních krypt a bronchiálních epiteliálních buněk [59, 117–120 ]. Dvoufaktorový model pro aktivitu APOBEC3 je tedy pravděpodobný u mnoha rakovin, se zvýšenou expresí APOBEC3 a již existujícím poškozením DNA pro mutagenezi zprostředkovanou APOBEC3- (obr. 3).

Kouření?

Kouření je hlavním rizikovým faktorem pro mnohočetné druhy rakoviny s vysokou mutací vyvolanou APOBEC3-. Například kouření představuje více než 50 % rizika rakoviny močového měchýře a odhaduje se, že způsobuje 80–90 % nádorů plic [121, 122]. Kouření je nejsilněji spojeno s mutačními znaky 4, 5 a 29, ale četné studie testovaly, zda expozice tabáku souvisí také s příznaky 2 a 13 vyvolanými APOBEC3- [24–26, 123, 124]. Výsledky však byly rozporuplné. Při analýze plicního adenokarcinomu byly signatury 2 a 13 obohaceny o nádory od kuřáků [123]. U karcinomu močového měchýře byl signatura 13 obohacena o tumory od bývalých kuřáků [125]. Samostatná analýza pouze svalově invazivních tumorů močového měchýře však zjistila, že signatura 13 byla obohacena u nekuřáků a negativně korelovala se signaturou 5 [124]. Kromě toho studie in vitro na normálním lidském urotelu zjistila, že expozice benzo[a]pyrenu – prokarcinogenu v cigaretovém kouři – nevyvolala signaturu 2 nebo 13. Tato studie má však omezení v tom, že používala pouze jeden prokarcinogen, zatímco tabákový kouř obsahuje přibližně 60 karcinogenů [126]. Pokud kouření zvyšuje mutagenezi zprostředkovanou APOBEC{29}}, je tento účinek pravděpodobně způsoben generalizovaným poškozením DNA, které zvyšuje dostupnost substrátu ssDNA [123]. Ačkoli nikotinová složka tabáku může vyvolat zánět a signalizaci NF-kB, neexistuje žádný důkaz, že tabákový kouř přímo zvyšuje expresi APOBEC3. Jediná studie nemalobuněčného karcinomu plic testovala tuto hypotézu, ale nenašla žádnou souvislost mezi kouřením a expresí mRNA APOBEC3B [54]. Nicméně prevalence kouření jako běžného rizikového faktoru pro rakovinu, kde je široce funkční mutageneze zprostředkovaná APOBEC{36}}, může ztěžovat rozpoznání jakýchkoli interakcí mezi kouřením a APOBEC3.

Tabulka 2 Zárodečné varianty ovlivňující APOBEC3 a riziko rakoviny

Tabulka 2 (pokračování)

Dopad APOBEC3 prostřednictvím mutagenních a nemutagenních cest APOBEC3 indukované onkogenní kódující mutace

Mutace vyvolané APOBEC3-jsou u rakoviny všudypřítomné a mohou řídit karcinogenezi aktivací onkogenů nebo inaktivací nádorových supresorů (tabulka 3). Například APOBEC3-indukovaná mutace FGFR3 S249C – nejběžnější mutace FGFR3 u rakoviny močového měchýře – způsobuje konstitutivní aktivaci kódovaného receptoru růstového faktoru k podpoře buněčné proliferace [127, 128]. I když je S249C méně recidivující u jiných typů nádorů, byl také detekován u rakoviny plic, děložního čípku a hlavy a krku [129–132]. Kromě aktivace receptorů mohou mutace vyvolané APOBEC{11}}ovlivňovat downstream signální dráhy a vytvářet vysoce onkogenní mutační synergie. Mutace PIK3CA E545K indukovaná APOBEC{12}} například způsobuje aberantní aktivaci dráhy PI3K podporující růst a byla detekována u nádorů močového měchýře, prsu, děložního čípku, kolorektálního, jícnu, hlavy a krku a plic [39, 132–137]. Velmi podobná mutace PIK3CA E542K byla nalezena u rakoviny močového měchýře, prsu, děložního čípku, kolorektálního karcinomu, jícnu, hlavy a krku a plic [39, 132, 133, 135, 137–140]. Mutace indukované APOBEC3-a další onkogen aktivující mutace mohou umožnit nekontrolovanou proliferaci rakovinných buněk v přítomnosti dalších mutací v genech potlačujících nádory – z nichž některé pocházejí z mutageneze zprostředkované APOBEC3-. Například inaktivační mutace R505G FBXW7 lze připsat APOBEC3 a byla detekována u HNSCC, rakoviny horního zažívacího traktu, rakoviny močového traktu a rakoviny plic [132, 143]. Subklonální APOBEC3-indukované mutace byly také pozorovány v tumor supresorových genech PTEN a TP53 v nádorech močového měchýře, prsu, hlavy a krku a plic [148]. Jiné mutační procesy mohou také inaktivovat nádorové supresory a vysoká aktivita APOBEC3 může vytvářet selektivní tlak zvýhodňující takové mutace. APOBEC3 vytvářejí vysokou celkovou zátěž nádorovými mutacemi, takže buňky s narušenou odpovědí na poškození DNA (DDR) v důsledku nádorových supresorových mutací s větší pravděpodobností odvrátí apoptózu a pokračují v proliferaci. Mutace TP53 – které většinou nejsou indukované APOBEC{42}} – byly častější u buněčných linií rakoviny močového měchýře, adenokarcinomů plic a lymfomu B-buněk s vysokou zátěží mutacemi indukovanými APOBEC3- [46, 89 , 149]. Podobně vysoká exprese APOBEC3B byla spojena s větším počtem mutací p53 u karcinomu prsu a adrenokortikálního karcinomu [22, 44]. Kromě selekčního tlaku by tento trend mohl vzniknout z vyšší exprese APOBEC3 v p53-mutovaných nádorech, protože p53 může potlačovat transkripci APOBEC3B prostřednictvím proteinů p21 a DREAM [150].

Tabulka 3 Recidivující APOBEC3-indukované somatické mutace a změny počtu kopií u rakoviny

Rekurentní nekódující mutace vyvolaná APOBEC3

lační oblasti jsou také vysoce recidivující a mohou přispívat k rozvoji nádoru modulací exprese genů souvisejících s rakovinou (tabulka 3). Například mnoho nádorů močového měchýře a prsu obsahuje APOBEC 3-indukované „hotspoty dvojité mutace“ v promotorech PLEKHS1 a TBC1D12, což jsou potenciální onkogeny spojené s invazivním onemocněním a špatnou prognózou [33, 144, 147, 151, 152 ]. Mutace zesilovače ADGR6/GPR126 indukované APOBEC{11}}, které se podílejí na angiogenezi, byly také detekovány u rakoviny močového měchýře [33, 145]. Mezi další geny s nekódujícími mutacemi, které lze připsat APOBEC3 u karcinomu močového měchýře, patří LEPROTL1 a potenciálně tumor supresor WDR74 [144, 153, 154]. Navíc mnoho T-buněčných akutních lymfoblastických leukémií obsahuje mutaci indukovanou APOBEC3- upstream od místa startu transkripce pro onkogen LMO1 [146]. Bylo zjištěno, že několik takových mutací je funkčních a mají potenciální onkogenní roli u karcinomu prsu [155]. Co však spouští APOBEC3-zprostředkovanou mutagenezi v nekódujících intergenových a promotorových oblastech, nebylo objeveno, ale pravděpodobně k tomu dochází během replikace DNA a iniciace transkripce.

Kromě generování bodových mutací v regulačních oblastech mohou APOBEC3 dále dysregulovat genovou expresi podporou zvýšeného počtu kopií onkogenu (tabulka 3). Například vyšší exprese APOBEC3 byla spojena se zvýšenou variací počtu kopií více regulačních genů Ras/MAPK, jako jsou ATP2B4, MAPKAPK2 a USP15 u gliomu [51]. Amplifikace EGFR a CDK4 – obou známých onkogenů – byla také pozorována u APOBEC3-high gliomů [51]. Mechanismy, kterými APOBEC3 usnadňují změny počtu kopií, zůstávají neznámé. Je však pravděpodobné, že kataegis vyvolaná APOEBC3- podporuje chromozomální nestabilitu a dvouřetězcové zlomy, což vytváří příležitosti pro změny počtu kopií [156, 157].

Výhody cistanche tubulosa-Antitumor

Vývoj nádoru

Although some APOBEC3-induced mutations are likely important for initial tumor formation, many occur later in tumor evolution. Supporting this paradigm, episodic bursts of APOBEC3-mediated mutagenesis were observed during prolonged culture of numerous cancer cell lines [81, 112]. This repeated APOBEC3 activity can create a high overall tumor mutation burden and fuel subclone heterogeneity in a tumor context. Accordingly, APOBEC3s have been identified as primary drivers of subclonal mutations in bladder, breast, head neck, and lung cancers [48, 148]. In bladder cancer, over 45% of subclonal mutations in driver genes may be attributable to APOBEC3s [148]. Additionally, APOBEC3-induced mutation load has been strongly associated with tumor heterogeneity in metastatic thoracic cancers [89]. APOBEC3-induced tumor heterogeneity can promote resistance to cancer therapies. While the continued acquisition of signatures 2 and 13 is often part of natural tumor evolution, chemotherapy treatment may further fuel APOBEC3-mediated mutagenesis by triggering APOBEC3 expression and inducing DNA damage [1, 81, 90, 91]. Specific therapy resistance mutations can also arise due to APOBEC3 activity. For example, the APOEBC-induced MEK2 L46F mutation may confer resistance to BRAF inhibitors such as vemurafenib and dabrafenib in melanoma [82, 142]. In lung cancer, the potentially APOBEC3-induced C>Mutace T EGFR T790 může podporovat rezistenci na inhibitory EGFR gefitinib a erlotinib [82, 141]. Podobně některé mutace indukované APOEBC3-pozorované u relabujícího refrakterního mnohočetného myelomu mohou přispět k získání rezistence na léčbu [158]. Nemutagenní dráhy Mutace indukované APOBEC3-jsou významnými hnacími silami tumorigeneze, ale APOBEC3 mohou také hrát roli v rakovině prostřednictvím nemutagenních drah. Jako příklad důležitosti těchto drah studie hepatocelulárního karcinomu zjistila, že nadměrná exprese katalyticky neaktivního APOBEC3B zvyšuje buněčnou proliferaci, buněčnou migraci a buněčnou invazi in vitro [159]. V přítomnosti mutací K-Ras může APOEBC3A také podporovat STING-dependentní metastázy a chromozomální nestabilitu na základě myšího modelu pankreatického duktálního adenokarcinomu [157]. Nadměrná exprese katalyticky neaktivního APOBEC3B byla také spojena s častějším „únikem G1“, což naznačuje, že APOBEC3B přispívá k dysregulaci buněčného cyklu [159]. Podobná progrese buněčného cyklu zprostředkovaná APOBEC3B byla pozorována u karcinomu močového měchýře [159, 160]. APOBEC3 mohou také inhibovat buněčnou smrt prostřednictvím mnoha mechanismů: APOBEC3G inhibuje anoikis prostřednictvím aktivace Akt u rakoviny pankreatu a APOBEC3B může snížit buněčnou smrt u rakoviny žaludku inhibicí funkce PDCD2 a snížením aktivity ATM a Chk1/2 [38, 49]. Kromě toho mohou APOBEC3 ovlivnit expresi onkogenů a nádorových supresorů prostřednictvím epigeneticky spojených mechanismů. Například bylo prokázáno, že APOBEC3B řídí nadměrnou expresi estrogenového receptoru (ER) u rakoviny prsu prostřednictvím přechodné remodelace chromatinu [161]. Jako další důkaz epigenetické regulace zprostředkované APOBEC3-je vysoká exprese APOBEC3B spojena s větší metylací LINE1 (zástupce globální metylace DNA) u rakoviny jícnu [39].

Modulace nádorového imunitního mikroprostředí

APOBEC3 mohou také ovlivnit růst nádoru prostřednictvím nemutagenních cest, které formují mikroprostředí imunitního systému nádoru (tabulka 4). APOBEC3 jsou imunosupresivní u některých rakovin a vyšší exprese APOBEC3B je spojena s menší infiltrací imunitních buněk u adrenokortikálního karcinomu a rakoviny žaludku [37, 162]. Exprese APOBEC3 byla také spojena s větší infiltrací imunosupresivních mediátorů, jako jsou myeloidní supresorové buňky (MDSC) a makrofágy spojené s nádorem (TAM) v myším modelu hepatocelulárního karcinomu [163]. Opačný účinek byl pozorován u jiných typů rakoviny, přičemž APOBEC3 podporují imunitní aktivaci. V pan-kancerogenní analýze byla vysoká exprese APOBEC3B spojena se zvýšenou imunitní aktivací u kožního melanomu a rakoviny prsu [162]. Další studie u rakoviny prsu zjistily podobné výsledky. Vysoká exprese APOBEC3B byla spojena s větším počtem lymfocytů nafukujících nádor a indukce APOBEC3B řídila robustní imunitní odpověď zprostředkovanou T buňkami na myším modelu [164, 165]. Hladiny APOBEC3C-H také korelovaly s větším počtem CD8+ T buněk v mikroprostředí nádoru, zvýšenou diverzitou receptorů T buněk a větší cytolytickou aktivitou [48, 64]. Podobná imunitní aktivace byla pozorována u rakoviny močového měchýře, přičemž četné studie detekovaly zvýšené imunitní podpisy a interferonovou signalizaci u APOBEC3-high tumorů [35, 46, 160]. U rakoviny plic byla imunitní aktivace zprostředkovaná T buňkami spojena s vysokou expresí APOBEC3B nebo vysokou mutační zátěží vyvolanou APOBEC3- [36, 166]. U rakoviny vaječníků byla zvýšená exprese APOBEC3B a APOBEC3G spojena s větší infiltrací imunitních buněk [41, 167]. Ačkoli ne v nádoru samotném, ukázalo se, že zvýšená exprese APOBEC3A posouvá polarizaci makrofágů do prozánětlivého, imunitu aktivujícího stavu [168].

Tabulka 4 Imunomodulační účinky APOBEC3 podle typu rakoviny

Klinický a terapeutický význam APOBEC3 u rakoviny

Souvislost se špatnou prognózou u mnohočetných rakovin

Imunosuprese může u některých druhů rakoviny synergizovat s mutagenezí zprostředkovanou APOBEC{0}}, což umožňuje akumulaci onkogenních mutací a řízení tumorigeneze a zároveň odvrácení imunitní odpovědi hostitele. V souladu s tímto modelem studie u adrenokortikálního karcinomu a karcinomu žaludku – které obě vykazují imunosupresi pomocí APOBEC3 – zjistily, že vyšší exprese APOBEC3B koreluje s kratším přežitím (tabulky 4 a 5) [37, 38, 44]. Zvýšená exprese APOBEC3 byla také spojena s nepříznivými klinickými výsledky u nazofaryngeálního karcinomu, karcinomu ledviny z jasných buněk a neuroendokrinních nádorů, ačkoli o APOBEC3-zprostředkovaných imunitních účincích u těchto rakovin je známo jen málo (tabulka 5) [55, 169] . Vysoká exprese APOBEC3 nebo zátěž vyvolaná mutacemi mohou také předpovídat nepříznivé výsledky u rakoviny prsu, ačkoli některé zprávy nalezly nekonzistentní výsledky (tabulka 5). Protože APOBEC3 indukují imunitní aktivaci u rakoviny prsu, musí tuto zvýšenou imunitní reakci překonat další faktory, aby řídily tumorigenezi (. 4). Větší aktivace estrogenového receptoru (ER) je pravděpodobným mechanismem, protože bylo prokázáno, že APOBEC3B podporuje nadměrnou expresi ER u rakoviny prsu [161]. V souladu s tím jsou asociace mezi vysokou expresí APOBEC3B a nepříznivými klinickými výsledky silnější u onemocnění ER+ (tabulka 5).

Tabulka 5 Asociace exprese APOBEC3 a mutací vyvolaných APOBEC3-s klinickými výsledky podle typu rakoviny

Tabulka 5 (pokračování)

Obr. 4 Účinky APOBEC3-indukovaných faktorů na prognózu se u různých typů rakoviny liší. APOBEC3 mohou ovlivnit tumorigenezi mutagenními a nemutagenními cestami, které mohou mít opačné účinky na průběh onemocnění. Relativní síla těchto účinků může určovat prognostický význam APOBEC3, což vysvětluje různý klinický dopad APOBEC3 podle typu rakoviny (tabulka 5). Jsou uvedeny příklady specifických typů rakoviny.

APOBEC3 mají podobně škodlivé účinky u tradičně léčených rakovin plic. Mimo kontext imunoterapie četné studie zjistily, že exprese APOBEC3B nebo indukovaná mutace je spojena s agresivním onemocněním nebo špatnou prognózou (tabulka 5). U rakoviny plic tak další faktory, jako jsou APOBEC3-indukované mutace, které podporují rezistenci na terapii, pravděpodobně převáží APOBEC3-zprostředkovanou imunitní aktivaci, což vede ke špatným klinickým výsledkům [141] (obr. 4).

Souvislost s příznivými výsledky imunoterapie a léčby na bázi platiny

U rakoviny plic byla imunitní aktivace zprostředkovaná APOBEC3-spojena se zlepšenou odezvou na terapie blokády imunitního kontrolního bodu (tabulka 5). Podobné výsledky byly pozorovány pro imunoterapeutickou odpověď u rakoviny prsu, močového měchýře a plic, které všechny vykazovaly imunitní aktivaci pomocí APOBEC3 (tabulky 4 a 5). U těchto nádorů APOBEC3-zprostředkovaná imunitní aktivace pravděpodobně synergizuje s vysokou APOBEC3-indukovanou neoantigenní zátěží, což vede k citlivosti na imunoterapii (obr. 4) [164, 187]. APOBEC3 jsou také spojeny se zlepšenou odpovědí na imunoterapii u rakoviny žaludku, ale tento typ rakoviny paradoxně vykazoval imunosupresi s APOBEC3 [37]. Ačkoli současná data jsou poněkud nejasná, APOBEC3 mohou také usnadnit lepší přežití rakoviny močového měchýře i při tradiční chemoterapii (tabulka 5). Rakovina močového měchýře se často léčí DNA alkylační látkou cisplatinou, která může mít zvýšenou aktivitu v přítomnosti APOBEC3. Mechanicky mohou APOBEC3 zprostředkovat odpověď na cisplatinu deaminací lékem indukovaných extrahelikálních cytosinů a APOBEC3B může indukovat další genotoxické účinky během chemoterapií indukované opravy chybného párování [188]. Kromě toho mohou APOBEC3 generovat vysokou zátěž mutací pozadí, která senzibilizuje buňky k dalšímu poškození DNA vyvolanému cisplatinou. Klinický přínos APOBEC3 u karcinomu močového měchýře by však mohl být omezen na pozdější stádium onemocnění, protože vyšší exprese APOBEC3B může přispět k progresi od neinvazivního k svalovému onemocnění [1]. APOBEC3 byly podobně spojeny se zlepšenými klinickými výsledky u rakoviny vaječníků, které jsou léčeny jako rakovina močového měchýře pomocí terapií na bázi platiny cisplatiny a karboplatiny (tabulka 5). Například vysoká mutace vyvolaná APOBEC3-byla spojena se zlepšeným přežitím bez progrese a celkovým přežitím u pacientek s karcinomem ovárií z jasných buněk [186]. Vysoká exprese APOBEC3 korelovala se zlepšeným přežitím u subtypů serózních nádorů vaječníků vysokého stupně [41, 42, 167]. Podobně jako u rakoviny močového měchýře, tyto výhody přežití spojené s APOBEC{42}}u rakoviny vaječníků pravděpodobně vyplývají z imunitní aktivace a zvýšené citlivosti na terapie na bázi platiny (obr. 4).

APOBEC3 jako biomarkery

Exprese APOBEC3 a mutace vyvolaná APOBEC3-byly spojeny s klinickými výsledky u různých druhů rakoviny a léčebných kontextů, což odůvodňuje jejich použití jako prognostických biomarkerů (tabulka 5). Několik studií karcinomů léčených cisplatinou/karboplatinou uvádělo souvislosti mezi APOBEC3 a příznivými výsledky, takže APOBEC3 si zaslouží další hodnocení jako biomarkery pro tuto běžnou chemoterapii [41, 46, 61, 167, 170, 186]. APOBEC3 by mohly být také použity jako biomarkery pro imunoterapii na základě existujících údajů o rakovině plic, močového měchýře a prsu [37, 160, 166, 174, 180, 181]. Kromě těchto klinických asociací podpořily četné předklinické studie argumenty pro APOBEC3 jako potenciální biomarkery terapie na bázi platiny a imunoterapie (tabulka 6). Navíc by APOBEC3 mohly být zvláště plodnými biomarkery pro cílené terapie (tabulka 6). Vysoká exprese APOBEC3B byla spojena se špatnou odpovědí na inhibitory Raf u gliomu a určité mutace vyvolané APOBEC3- mohou předpovídat rezistenci vůči inhibitorům Raf a inhibitorům EGFR u mnohočetného myelomu a rakoviny plic [82, 158]. U ER+ karcinomu prsu může vysoká exprese APOBEC3B predikovat rezistenci na endokrinní terapii tamoxifenem [192]. Na základě preklinických studií mohou APOBEC3 také předpovídat příznivou odpověď na cílený kontrolní bod replikace a inhibitory DDR, pravděpodobně kvůli syntetickým zranitelnostem, které indukují poškození cytotoxické DNA [52, 99, 157, 191]. Celkově existuje přesvědčivý důkaz, že testování nádorů pacientů na expresi APOBEC3 nebo indukovanou mutační zátěž by mohlo vést k rozhodování o léčbě. Existuje však značná mezera mezi laboratoří a klinikou a bude nezbytné stanovit smysluplné parametry, které definují „pozitivitu APOBEC“. Za tímto účelem budou muset budoucí studie vyhodnotit expresi APOEBC3 nebo skóre mutačních signatur, které mohou být případně použity v klinických studiích. Jako vodítko lze použít skórovací a profilovací systémy pro PD-L1/PD1 a celkovou zátěž nádorovými mutacemi [195–199].

Inhibice APOBEC3 pro léčbu rakoviny

Protože APOBEC3 mohou řídit tumorigenezi mutagenními a ne mutagenními cestami, mohlo by být prospěšné inhibovat APOBEC3 ve specifických, ale pravděpodobně četných onkogenních kontextech (tabulka 6). Inhibitory APOBEC3 by například mohly potenciálně zabránit progresi nesvalově invazivního karcinomu močového měchýře do svalově invazivního onemocnění, které má vyšší mutační zátěž vyvolanou APOBEC3- [1, 200]. Inhibitory APOBEC3 by také mohly zpomalit metastázy závislé na STING, zejména v kombinaci s nově se objevujícími inhibitory STING [157, 201]. Inhibice APOBEC3G by také mohla podporovat anoikis, protože bylo prokázáno, že APOBEC3 narušují tuto formu buněčné smrti [49]. Inhibitory APOBEC3 by navíc mohly být použity zejména u rakoviny, kde APOBEC3 předpovídají špatnou prognózu, k omezení evoluce nádoru, heterogenity subklonů a rezistence na chemoterapii [82, 148]. Inhibitory APOBEC3 nejsou v současné době dostupné pro klinické použití, ale nedávné pokroky v řešení molekulárních struktur enzymů APOBEC3 položily důležité základy pro případný vývoj této třídy léčiv [202]. Bylo ukázáno, že mnoho sloučenin s katecholovými skupinami inhibuje APOBEC3G s chemickými modifikacemi podporujícími omezenější zacílení APOBEC3A [203]. Nedávno identifikovaný inhibitor s malou molekulou, který může cílit na katalytické kapsy AID, APOBEC3A a APOBEC3B, byl také popsán a může vést k návrhu inhibitorů specifických pro každý enzym APOBEC [205]. Kromě inhibitorů s malou molekulou zahrnují další potenciální strategie ke snížení aktivity APOBEC3 terapie umlčující geny, analogy 2'-deoxyzebularinu obsahující ssDNA a alternativní modulátory sestřihu [204]. Druhý přístup je možný, protože některé izoformy APOBEC3 jsou nemutagenní a bylo prokázáno, že inhibice SF3B1 posouvá expresi na nemutagenní izoformu APOBEC3B indukcí přeskočení exonu 5 [1]. Navíc se ukázalo, že zmírnění replikačního stresu prostřednictvím suplementace nukleosidů a inhibice chk1 snižuje expresi APOBEC3B in vitro [90].

Tabulka 6 Biomarker a terapeutický potenciál APOBEC3s

Tabulka 6 (pokračování)

Aktivace APOBEC3 pro léčbu rakoviny

Zatímco inhibice APOBEC3 může být prospěšná u mnoha rakovin, zdánlivě kontraintuitivní strategie zvýšení aktivity APOBEC3 v určitých kontextech může nabídnout jedinečnou terapeutickou příležitost. Například cílená nadměrná exprese APOEBC3 může být výhodná s imunoterapeutickými činidly. Na podporu tohoto přístupu se ukázalo, že indukce APOBEC3B zvyšuje odezvu na terapii blokádou imunitního kontrolního bodu u myších modelů melanomu a rakoviny prsu [164, 187]. Tato APOBEC3-indukovaná senzibilizace může nastat prostřednictvím více synergických drah (obr. 5). Za prvé, APOBEC3 mohou generovat vysokou celkovou zátěž nádorových mutací, což vede k tvorbě neoepitopů a imunitní aktivaci u některých typů nádorů [187]. Za druhé, APOBEC{10}}zprostředkované zvýšení exprese PD-L1 může také zvýšit imunoterapeutickou odpověď [64, 171, 189]. Mechanicky mohou APOBEC3 podporovat expresi PD-L1 poškozením DNA, které aktivuje signalizaci JNK/c-JUN [190]. Synergie mezi APOBEC3 a IFN- mohou dále zvýšit expresi PD-L1 na rakovinných buňkách a aditivně zvýšit senzibilizaci k imunoterapii [206, 207]. Protože APOBEC3 indukují vysokou úroveň poškození DNA, jejich cílená nadměrná exprese v rakovinných buňkách může být také cytotoxická [208]. Aktivace APOBEC3A může specificky způsobit apoptózu in vitro, protože má nejvyšší deaminační aktivitu mezi APOBEC3 [43, 108]. Kromě toho může být cílená nadměrná exprese APOBEC3 zvláště cytotoxická pro nádory se zhoršenou funkcí uracil glykosylázy nebo ztrátou abazického místa senzoru HCES – mutace, které by vytvořily syntetickou vulnerabilitu [209, 210]. APOBEC3-aktivační terapie by také mohly ovlivnit použití genotoxických léků. Například induktory APOBEC3 by mohly připravit nádory tak, aby reagovaly na chemoterapie na bázi platiny a inhibitory DDR. Jako důkaz konceptu in vitro studie rakoviny prsu zjistila, že indukce APOBEC3 v buněčných liniích s nízkou výchozí expresí významně zvýšila citlivost na cisplatinu [188]. Ukázalo se také, že nadměrná exprese APOBEC3 zvyšuje odezvu na cílené inhibitory ATR a Chk1/2 u buněčných linií akutní myeloidní leukémie a osteosarkomu [52, 191]. Podobně nadměrná exprese APOBEC3B senzibilizovala p53-deficientní buňky k inhibici CHEK1/2, WEE1 a PARP [99]. Zvýšená citlivost na inhibitory PARP byla také pozorována při upregulaci APOBEC3A v buňkách rakoviny pankreatu [157]. Navzdory tomu, že má v některých kontextech terapeutický potenciál, indukce APOBEC3 nemusí usnadnit imunoterapeutickou odpověď u všech rakovin, zejména u nádorů, kde byla vyšší exprese APOBEC3 spojena s imunosupresí (tabulka 4). Léky zlepšující APOBEC{57}}musí být také zkoumány s opatrností vzhledem k rizikům nových řidičských mutací, zvýšené heterogenitě nádorů a odolnosti vůči chemoterapii. Nicméně aktivace a inhibice aktivity APOBEC3 jsou slibnými přístupy, které by mohly vytvořit nové možnosti léčby pro zítřejší klinickou krajinu.

Obr. 5 Aktivace APOBEC3 pro zesílení odpovědi na imunoterapii. Zvýšení aktivity APOBEC3 by mohlo zvýšit imunoterapeutickou odpověď prostřednictvím tvorby neoepitopu, zvýšené exprese PD-L1 a imunitní aktivace, jak bylo prokázáno studiemi s použitím myších modelů

Závěry

APOBEC3 jsou hlavními mutagenními hybateli rakoviny a APOBEC3A a APOBEC3B jsou pravděpodobně nejvýznamnějšími mutátory mezi superrodinou APOBEC3. APOBEC3A a APOBEC3B jsou nadměrně exprimovány u mnoha rakovin a jejich exprese koreluje s vyšší mutační zátěží vyvolanou APOBEC3-. Detekce reziduální deaminační aktivity po vyřazení obou členů rodiny však naznačuje, že další APOBEC3 jsou také aktivními mutátory. Lepší pochopení toho, jak každý APOBEC3 přispívá k rakovině, dále objasní etiologii nádoru a může se stát terapeuticky relevantním pro cílení na APOBEC3.

Obr. 6 Příčiny, důsledky a klinické aspekty APOBEC3-zprostředkované mutageneze u rakoviny. Řada exogenních a endogenních faktorů může indukovat APOBEC3, které pak mohou ovlivnit růst rakoviny prostřednictvím mutagenních a nemutagenních cest. Tyto účinky zprostředkované APOBEC3-mohou utvářet klinické výsledky a být relevantní v současném i budoucím terapeutickém prostředí

Komplexnější pochopení faktorů, které vyvolávají mutagenezi zprostředkovanou APOBEC3-, by také mohlo vést ke zlepšení strategií prevence rakoviny. V současnosti známé spouštěče exprese APOBEC3 zahrnují virovou infekci, zánět a určité genotoxické léky, ačkoli zvýšená exprese samotná nemusí způsobit vysoké úrovně mutageneze (obr. 6). Ve dvoufaktorovém modelu ssDNA – která může vzniknout z expozice genotoxickým lékům, genomové nestability atd. – vytváří primární mutační substráty pro APOBEC3 a usnadňuje mutagenezi. Ačkoli je mutageneze ústřední pro roli APOBEC3 při rakovině, APOBEC3 mohou také přispívat k tumorigenezi prostřednictvím nemutagenních cest, jako je modulace buněčného cyklu, epigenetická regulace, STING-dependentní metastázy a inhibice buněčné smrti (obr. 6). Kromě toho mohou APOBEC3 modulovat imunitní mikroprostředí nádoru, přičemž účinek se liší podle typu rakoviny. APOBEC3 byly spojovány s imunitní aktivací u rakoviny prsu, plic a močového měchýře, zatímco imunosuprese zprostředkovaná APOBEC{12}} byla pozorována u rakoviny jater, žaludku a adrenokortikálního karcinomu. Imunomodulační účinky APOBEC3 pravděpodobně ovlivňují průběh onemocnění, ale imunitní aktivace zprostředkovaná APOBEC{15}}ne vždy vede ke zlepšení klinických výsledků, protože jiné faktory, jako jsou řidičské mutace a inhibice buněčné smrti, mohou mít opačné účinky. Imunitní aktivace zprostředkovaná APOBEC{16}}, zvýšená zátěž neoepitopem a vyšší exprese PD-L1 se mohou synergicky zvýrazňovat k posílení odpovědi na imunoterapie (obr. 6). APOBEC3 mohou také usnadnit odezvu na terapie na bázi platiny. Několik klinických asociací spolu s preklinickými studiemi naznačuje, že APOBEC3 by mohly být použity jako biomarkery pro v současnosti dostupné imunoterapie a chemoterapie, zatímco nové strategie pro aktivaci APOBEC3 by mohly připravit určité nádory na zvýšenou terapeutickou odpověď (obr. 6).

Výhody cistanche tubulosa- posílení imunitního systému

Naproti tomu inhibice APOBEC3 by mohla zpomalit evoluci nádoru, snížit heterogenitu subklonů a zabránit rezistenci vůči terapii u některých rakovin a v souvislosti se specifickými typy léčby. APOBEC3 jsou dysregulovány v široké škále a vysokém podílu lidských nádorů, takže výzkum v těchto oblastech má velký potenciál a mohl by vést k novým možnostem léčby mnoha typů rakoviny.

Reference

1. Rouf Banday A, Onabajo OO, Lin SHY, Obajemu A, Vargas JM, Delviks Frankenberry KA, et al. Zaměření na přirozenou plasticitu sestřihu APOBEC3B omezuje jeho expresi a mutagenní aktivitu. Commun Biol.

2. 2021;4(1):386. Ebrahimi D, Richards CM, Carpenter MA, Wang J, Ikeda T, Becker JT a kol. Genetický a mechanický základ pro alternativní sestřih APOBEC3H, restrikci retrovirů a působení HIV-1 proteázy. Nat Commun.

3. 2018;9(1):4137. Harari A, Ooms M, Mulder LCF, Simon V. Polymorfismy a sestřihové varianty ovlivňují antiretrovirovou aktivitu lidského APOBEC3H. J Virol. 2009;83(1):295–303.

4. Lassen KG, Wissing S, Lobritz MA, Santiago M, Greene WC. Identifikace dvou sestřihových variant APOBEC3F vykazujících antivirovou aktivitu proti HIV-1 a kontrastní citlivost vůči Vif*. J Biol Chem. 2010;285(38):29326–35.

5. Salter JD, Bennett RP, Smith HC. Rodina proteinů APOBEC: sjednocená strukturou, odlišná ve funkci. Trends Biochem Sci. 2016;41(7):578–94.

6. Chaudhuri J, Evans T, Kumar R, DiMenna L. Biologická funkce aktivací indukované cytidindeaminázy (AID). Biomed J. 2014;37(5):269.

7. Chen SH, Habib G, Yang CY, Gu ZW, Lee BR, Weng SA a kol. Apolipoprotein B-48 je produktem messenger RNA s orgánově specifickým in-frame stop kodonem. Věda. 1987;238(4825):363–6.

8. Powell LM, Wallis SC, Pease RJ, Edwards YH, Knott TJ, Scott J. Nová forma tkáňově specifického zpracování RNA produkuje apolipoprotein-B48 ve střevě. Buňka. 1987;50(6):831–40.

9. Hirano K, Min J, Funahashi T, Baunoch DA, Davidson NO. Charakterizace lidského aerobního -1 genu: exprese v gastrointestinálních tkáních určená alternativním sestřihem s produkcí nového zkráceného peptidu. J Lipid Res. 1997;38(5):847–59.

10. Harris RS, Dudley JP. APOBEC a omezení virů. Virologie. 2015;479–480:131–45.

11. Silvas T, Schifer CA. APOBEC3s: lidské cytidindeaminázy upravující DNA. Protein Sci. 2019. https://doi.org/10.1002/pro.3670.

12. Yu Q, König R, Pillai S, Chiles K, Kearney M, Palmer S, a kol. Jednovláknová specificita APOBEC3G odpovídá za minus-vláknovou deaminaci genomu HIV. Nat Struct Mol Biol. 2004;11(5):435–42.

13. Chan K, Sterling JF, Roberts SA, Bhagwat AS, Resnick MA, Gordenin DA. Poškození báze v rámci jednořetězcové DNA je základem hypermutability in vivo vyvolané všudypřítomným činitelem prostředí. PLoS Genet. 2012;8(12):e1003149.

14. Hoopes JI, Cortez LM, Mertz TM, Malc EP, Mieczkowski PA, Roberts SA. APOBEC3A a APOBEC3B přednostně deaminují templát zaostávajícího vlákna během replikace DNA. Cell Rep. 2016;14(6):1273–82.

15. Lada AG, Kliver SF, Dhar A, Polev DE, Masharsky AE, Rogozin IB, et al. Narušení transkripčního koaktivátoru Sub1 vede k celogenomové redistribuci skupinových mutací indukovaných APOBEC v aktivních kvasinkových genech. PLoS Genet. 2015;11(5):e1005217.

16. Seplyarskiy VB, Soldatov RA, Popadin KY, Antonarakis SE, Bazykin GA, Nikolaev SI. APOBEC-indukované mutace u lidských rakovin jsou během replikace silně obohaceny na zaostávajícím řetězci DNA. Genome Res. 2016;26(2):174–82.

17. Buisson R, Langenbucher A, Bowen D, Kwan EE, Benes CH, Zou L a kol. Mutace hotspotu cestujících u rakoviny způsobené APOBEC3A a mezoškálovými genomickými rysy. Věda. 2019;364:6447.

18. McCann JL, Cristini A, Law EK, Lee SY, Tellier M, Carpenter MA a kol. Homeostáza R-smyčky a rakovinová mutageneze podporovaná DNA cytosin deaminázou APOBEC3B. bioRxiv [Internet]. 2021;2021.08.30.458235. Dostupné z: http://biorxiv.org/content/ early/2021/08/30/2021.08.30.458235.abstract.

19. Holtz CM, Sadler HA, Manský LM. Aktivní místa deaminace cytosinu APOBEC3G jsou definována jak kontextem sekvence, tak sekundární strukturou jednovláknové DNA. Nucleic Acids Res. 2013;41(12):6139–48.

20. Harris RS. Molekulární mechanismus a klinický dopad APOBEC3Batalyzované mutageneze u rakoviny prsu. Breast Cancer Res. 2015;17(1):8.

21. Refsland EW, Harris RS. Rodina restrikčních faktorů retroprvků APOBEC3. Berlín: Springer; 2013. str. 1–27.

22. Burns MB, Lackey L, Carpenter MA, Rathore A, Land AM, Leonard B a kol. APOBEC3B je enzymatický zdroj mutací u rakoviny prsu. Příroda. 2013;494(7437):366–70.

23. Chan K, Roberts SA, Klimczak LJ, Sterling JF, Saini N, Malc EP a kol. Signatura hypermutace APOBEC3A je odlišitelná od signatury mutageneze na pozadí pomocí APOBEC3B u lidských rakovin. Nat Genet. 2015;47(9):1067–72.

24. VESMÍRNÝ. 2022.

25. Alexandrov LB, Kim J, Haradhvala NJ, Huang MN, Tian Ng AW, Wu Y a kol. Repertoár mutačních signatur u lidské rakoviny. Příroda. 2020;578(7793):94–101.

26. Alexandrov LB, Nik-Zainal S, Wedge DC, Aparicio SAJR, Behjati S, Biankin A, et al. Podpisy mutačních procesů u rakoviny člověka. Příroda. 2013;500(7463):415–21.

27. Roberts SA, Lawrence MS, Klimczak LJ, Grimm SA, Fargo D, Stojanov P, et al. Vzorec mutageneze cytidindeaminázy APOBEC je rozšířený u lidských rakovin. Nat Genet. 2013;45(9):970–6.

28. Zou J, Wang C, Ma X, Wang E, Peng G. APOBEC3B, molekulární ovladač mutageneze u lidských rakovin. Cell Biosci. 2017;7(1):29.

29. Taylor BJ, Nik-Zainal S, Wu YL, Stebbings LA, Raine K, Campbell PJ a kol. DNA deaminázy indukují spršky mutací související s přerušením s implikací APOBEC3B a 3A v kataegis rakoviny prsu. Elife. 2013;16:2.

30. Liu W, Newhall KP, Khani F, Barlow L, Nguyen D, Gu L a kol. Cytidindeamináza APOBEC3G přispívá k rakovinové mutagenezi a klonální evoluci u rakoviny močového měchýře. Cancer Res. 2022;26:2651.

31. Aaltonen LA, Abascal F, Abeshouse A, Aburatani H, Adams DJ, Agrawal N, et al. Pan-rakovinná analýza celých genomů. Příroda. 2020;578(7793):82–93.

32. Bergstrom EN, Luebeck J, Petljak M, Khandekar A, Barnes M, Zhang T, et al. Mapování skupinových mutací u rakoviny odhaluje APOBEC3 mutagenezi cDNA. Příroda. 2022;602(7897):510–7.

33. Langenbucher A, Bowen D, Sakhtemani R, Bournique E, Wise JF, Zou L a kol. Rozšířený podpis mutace APOBEC3A u rakoviny. Nat Commun. 2021;12(1):1602.

34. Burns MB, Temiz NA, Harris RS. Důkazy mutageneze APOBEC3B u mnoha lidských rakovin. Nat Genet. 2013;45(9):977–83.

35. Kim H, Kim O, Lee MA, Lee JY, Hong SH, Ha US, et al. Prognostický dopad exprese APOBEC3B u metastatického uroteliálního karcinomu a jeho asociace s cytotoxickými T buňkami infiltrujícími nádor. Curr Oncol. 2021;28(3):1652–62.

36. Wang S, Jia M, He Z, Liu XS. Mutační podpis APOBEC3B a APOBEC jako potenciální prediktivní markery pro imunoterapeutickou odpověď u nemalobuněčného karcinomu plic. Onkogen. 2018;37(29):3924–36.

37. Xia S, Gu Y, Zhang H, Fei Y, Cao Y, Fang H a kol. Imunitní inaktivace obohacením APOBEC3B předpovídá odpověď na chemoterapii a přežití u rakoviny žaludku. Onkoimunologie. 2021. https://doi.org/10. 1080/2162402X.2021.1975386.

38. Zhang J, Wei W, Jin HC, Ying RC, Zhu AK, Zhang FJ. Role APOBEC3B u rakoviny žaludku. Int J Clin Exp Pathol. 2015;8(5):5089–96.

39. Kosumi K, Baba Y, Ishimoto T, Harada K, Nakamura K, Ohuchi M, et al. APOBEC3B je enzymatický zdroj molekulárních změn u spinocelulárního karcinomu jícnu. Med Oncol. 2016;33(3):26.

40. Feng C, Zheng Q, Yang Y, Xu M, Lian Y, Huang J a kol. Vysoká exprese APOBEC3B v gastroenteropankreatických neuroendokrinních novotvarech a asociace s lymfatickými metastázami. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2019;27(8):599–605.

41. Rüder U, Denkert C, Alisa Kunze C, Jank P. Exprese proteinu APOBEC3B a analýzy mRNA u pacientek se serózním ovariálním karcinomem vysokého stupně. Histol Histopathol. 2019;34:405–17.

42. Du Y, Tao X, Wu J, Yu H, Yu Y, Zhao H. Up-regulace APOBEC3B nezávisle předpovídá prognózu rakoviny vaječníků: kohortová studie. Cancer Cell Int. 2018;18(1):78.

43. Liu W, Ji H, Zhao J, Song J, Zheng S, Chen L a kol. Účinek ovlivňuje transkripční represe a apoptózaAPOBEC3A / 3Bfunkční polymorfismy na riziko rakoviny žlučových cest. Int J Cancer. 2022;150(11):1825–37.

44. Gara SK, Tyagi MV, Patel DT, Gaskins K, Lack J, Liu Y a kol. GATA3 a APOBEC3B jsou prognostické markery u adrenokortikálního karcinomu a APOBEC3B je přímo transkripčně regulován GATA3. Oncotarget. 2020;11(36):3354–70.

45. Wagener R, Alexandrov LB, Montesinos-Rongen M, Schlesner M, Haake A, Drexler HG, et al. Analýza mutačních signatur v exomech z buněčných linií B-buněčného lymfomu naznačuje, že členové rodiny APOBEC3 se podílejí na patogenezi primárního efuzního lymfomu. Leukémie. 2015;29(7):1612–5.

46. ​​Glaser AP, Fantini D, Wang Y, Yu Y, Rimar KJ, Podojil JR, et al. Mutageneze zprostředkovaná APOBEC u uroteliálního karcinomu je spojena se zlepšeným přežitím, mutacemi v genech reakce na poškození DNA a imunitní odpovědí. Oncotarget. 2018;9(4):4537–48.

47. Cortez LM, Brown AL, Dennis MA, Collins CD, Brown AJ, Mitchell D, et al. APOBEC3A je prominentní cytidindeamináza u rakoviny prsu. PLoS Genet. 2019;15(12):e1008545.

48. Asaoka M, Patnaik SK, Ishikawa T, Takabe K. Různí členové rodiny mutátorů DNA APOBEC3 mají protichůdné asociace s prostředím rakoviny prsu. Am J Cancer Res. 2021;11:5111.

49. Wu J, Pan TH, Xu S, Jia LT, Zhu LL, Mao JS a kol. Virem indukovaný protein APOBEC3G inhibuje anoikis aktivací Akt kinázy v buňkách rakoviny slinivky břišní. Sci Rep. 2015;5(1):12230. 50. Ding Q, Chang CJ, Xie X, Xia W, Yang JY, Wang SC a kol. APOBEC3G podporuje jaterní metastázy v ortotopickém myším modelu kolorektálního karcinomu a předpovídá metastázy v játrech u lidí. J Clin Investig. 2011;121(11):4526–36.

51. Luo C, Wang S, Liao W, Zhang S, Xu N, Xie W a kol. Upregulace rodiny APOBEC3 je spojena se špatnou prognózou a ovlivňuje léčebnou odpověď na inhibitory Raf u gliomů nízkého stupně. Int J Mol Sci. 2021;22(19):10390.

52. Green AM, Budagyan K, Hayer KE, Reed MA, Savani MR, Wertheim GB, et al. Cytosindeamináza APOBEC3A senzibilizuje leukemické buňky k inhibici kontrolního bodu replikace DNA. Cancer Res. 2017;77(17):4579–88.

53. Waters CE, Saldivar JC, Amin ZA, Schrock MS, Huebner K. Poškození DNA vyvolané ztrátou FHIT vytváří optimální substráty APOBEC: vhled do mutageneze zprostředkované APOBEC. Oncotarget. 2015;6(5):3409–19.

54. Sasaki H, Suzuki A, Tatematsu T, Shitara M, Hikosaka Y, Okuda K a kol. Nadměrná exprese genu APOBEC3B u nemalobuněčného karcinomu plic. Biomed Rep. 2014;2(3):392–5.

55. Feng C, Zhang Y, Huang J, Zheng Q, Yang Y, Xu B. Prognostický význam APOBEC3B a PD-L1/PD-1 u karcinomu nosohltanu. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2021;29(3):239–44.

56. Leonard B, Hart SN, Burns MB, Carpenter MA, Temiz NA, Rathore A a kol. Upregulace APOBEC3B a vzory genomových mutací u serózního ovariálního karcinomu. Cancer Res. 2013;73(24):7222–31.

57. Heller M, Prigge ES, Kaczorowski A, von Knebel Doeberitz M, Hohen Fellner M, Duensing S. Exprese APOBEC3A u spinocelulárního karcinomu penisu. Patobiologie. 2018;85(3):169–78.

58. Petljak M, Dananberg A, Chu K, Bergstrom EN, Striepen J, von Morgen P, et al. Mechanismy mutageneze APOBEC3 v lidských rakovinných buňkách. Příroda. 2022;607(7920):799–807.

59. Petljak M, Maciejowski J. Molekulární původ mutací spojených s APOBEC u rakoviny. Oprava DNA (Amst). 2020;94:102905.

60. Carpenter MA, Li M, Rathore A, Lackey L, Law EK, Land AM, et al. Methylcytosin a normální deaminace cytosinu pomocí cizorodého DNA restrikčního enzymu APOBEC3A. J Biol Chem. 2012;287(41):34801–8.

61. Middlebrooks CD, Banday AR, Matsuda K, Udquim KI, Onabajo OO, Paquin A, et al. Asociace zárodečných variant v oblasti APOBEC3 s rizikem rakoviny a obohacením o APOBEC signaturní mutace v nádorech. Nat Genet. 2016;48(11):1330–8.

62. Nik-Zainal S, Wedge DC, Alexandrov LB, Petljak M, Butler AP, Bolli N, et al. Asociace polymorfismu počtu kopií zárodečné linie APOBEC3A a APOBEC3B se zátěží domnělých APOBEC-dependentních mutací u rakoviny prsu. Nat Genet. 2014;46(5):487–91.

63. Matsuda K, Takahashi A, Middlebrooks CD, Obara W, Nasu Y, Inoue K, et al. Celogenomová asociační studie identifikovala SNP na 15q24 spojenou s rizikem rakoviny močového měchýře v japonské populaci. Hum Mol Genet. 2015;24(4):1177–84.

64. Kim Y, Sun DS, Yoon J, Ko YH, Won HS, Kim JS. Klinické důsledky exprese APOBEC3A a 3B u pacientek s rakovinou prsu. PLoS ONE. 2020;15(3):e0230261. 65. Starrett GJ, Luengas EM, McCann JL, Ebrahimi D, Temiz NA, Love RP a kol. DNA cytosin deamináza APOBEC3H haplotyp I pravděpodobně přispívá k mutagenezi rakoviny prsu a plic. Nat Commun. 2016;7(1):12918.

66. Stavrou S, Ross SR. Proteiny APOBEC3 ve virové imunitě. J Immunol. 2015;195(10):4565–70.

67. Bosch FX, Lorincz A, Munoz N, Meijer CJLM, Shah K. Kauzální vztah mezi lidským papilomavirem a rakovinou děložního čípku. J Clin Pathol. 2002;55(4):244–65.

68. Revathidevi S, Murugan AK, Nakaoka H, ​​Inoue I, Munirajan AK. APOBEC: molekulární hnací síla v patogenezi rakoviny děložního čípku. Cancer Lett. 2021;496:104–16.

69. Riva G, Albano C, Gugliesi F, Pasquero S, Pacheco SFC, Pecorari G a kol. HPV se setkává s APOBEC: noví hráči v oblasti rakoviny hlavy a krku. Int J Mol Sci. 2021;22(3):1402.