Antioxidační aktivita, fenolický profil a nefroprotektivní potenciál etanolových a vodných extraktů Anastatica Hierochuntica proti nefrotoxicitě vyvolané CCl4-u potkanů

Prosím kontaktujteoscar.xiao@wecistanche.comvíce

Abstraktní:Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica L.) se široce používá k léčbě řady zdravotních problémů, zejména k usnadnění porodu a zmírnění poruch souvisejících s reprodukčním systémem. Cílem této studie bylo zhodnotit účinek A. hierophantic ethanolické (KEE) a vodné (KAE) extrakce CCl4-indukované oxidativním stresem a nefrotoxicitou u potkanů ​​pomocí biochemických markerů renálních funkcí aantioxidantstav i histopatologická vyšetření ledvinové tkáně.A. hierofantika obsahovala 67,49 mg GAE g-1 celkemfenolické sloučeniny(TPC), 3,51 µg g-1 celkových karotenoidů (TC) a 49,78 a 17,45 mg QE g-1 celkových flavonoidů (TF) a celkových flflavonolů (TFL). Výsledkem bylo 128,71 µmol TE g-1 DPPH-RSA a 141,92 µmol TE g-1 ABTS-RSA. A. hierophantic vykazoval vynikající antioxidační aktivitu inhibicí radikálů kyseliny linolové a chelatací oxidačních kovů. HPLC analýza vedla k 9 a 21fenolové kyselinya 6 a 2flavonoidyv KEE a KAE s převahou kyseliny sinapové a kyseliny syringové. Intramuskulární injekce vit. E plus Se a perorální podání KEE, KAE a KEE plus KAE při 250 mg kg-1 tělesné hmotnosti významně obnovilo hladiny sérového kreatininu, močoviny, K, celkového proteinu a albuminu. Navíc snížily malondialdehyd (MOD), obnovily redukovaný glutathion (GSH) a zvýšily hladiny superoxiddismutázy (SOD). KEE, KAE a KEE plus KAE chránily ledviny před CCl4-nefrotoxicitou, protože hlavně zmírňovaly indukovaný oxidační stres. Celková nefroprotekce byla asi 83,27 procenta, 97,62 procenta a 78,85 procenta pro KEE, KAE a KEE plus KAE, v daném pořadí. Oba extrakty vit.E plus Se a A. hierophantic zeslabily histopatologické změny u potkanů ​​léčených CCl{10}}. Závěrem lze říci, že A. hierophantic, zejména KAE, má potenciální schopnost obnovit oxidační stabilitu a zlepšit funkci ledvin po akutním poškození ledvin CCl4 lépe než KEE. Proto má A. hierophantic potenciál být užitečným terapeutickým činidlem při léčbě lékem indukované nefrotoxicity.

klíčová slova:Kaff-e-Maryam; polyfenoly; bioaktivita; sekundární metabolity; ledvinové markery;antioxidační enzymy; renální dysfunkce

Kliknutím sem se dozvíte více

Úvod

Onemocnění ledvin je 9. hlavní příčinou úmrtí, přičemž více než 1 ze 7, tj. 15 procent dospělých v USA nebo 37 milionů lidí, má podle odhadů chronické onemocnění ledvin (CKD) [1]. Je pozoruhodné, že nejčastější příčinou CKD zaznamenanou v roce 2015 je diabetes mellitus následovaný vysokým krevním tlakem a glomerulonefritidou [2]. Mezi další příčiny CKD patří idiopatické (často spojené s malými ledvinami na ultrazvuku ledvin) [3]. Dříve se CCl4 používal pro odmašťování kovů, chemické čištění, skvrny na tkaninách, kapaliny do hasicích přístrojů a fumigaci obilí [4]. Způsobuje vážné poruchy v játrech, plicích a varlatech a také v krvi tvorbou aktivních volných radikálů [5]. Podle zjištění Ogeturka et al. [6], expozice tomuto rozpouštědlu způsobuje akutní a chronické poškození ledvin. Peroxidace lipidů vyvolaná volnými radikály je považována za jednu z primárních příčin poškození buněčné membrány, která vede k řadě patologických stavů [7]. Tvorba reaktivních radikálů se podílí na nefrotoxicitě indukované CCl4-, která se podílí na peroxidaci lipidů a akumulaci dysfunkčních proteinů, což vede k poškození ledvin [8]. Úžasné, tradiční využití léčivých rostlin v posledních letech vzrostlo a četné výzkumy potvrdily jejich terapeutickou roli proti několika nemocem [9–12]. Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica) je pouštní léčivá bylina, která patří do čeledi Brassicaceae. Roste v různých oblastech světa, zejména v arabských zemích (např. Saúdská Arábie, Egypt, Omán, Libye, Irák, Spojené arabské emiráty, Kuvajt) a také v některých asijských, evropských a afrických zemích. Předpokládá se, že A. hierophantic má vynikající léčebný potenciál a je přednostně konzumován při různých zdravotních stavech [13]. Používá se především k usnadnění porodního procesu a k léčbě poruch reprodukčního systému a metabolických poruch, zejména diabetes mellitus [14]. Používá se jako analgetikum a k léčbě epilepsie, gastrointestinálních poruch, artritidy, bronchiálního astmatu, vředů v ústech, malárie a duševní deprese [15–17]. A. hierophantic obsahuje významné množství minerálů, jako je Mg, Ca, Mn, Fe, Cu a Zn, které jsou srovnatelné nebo větší než u mnoha bylinných rostlin, což může poskytnout kovům chelatační vlastnosti [18]. Yoshikawa a kol. [19] došli k závěru, že přítomnost flavanonů, jako je Anastasia A a B, koreluje se silnými hepatoprotektivními účinky inhibicí cytotoxicity indukované D-galaktosaminem v primárních kultivovaných myších hepatocytech. Produkce reaktivních forem kyslíku (ROS) a cytokinů, jako je tumor nekrotizující faktor a interleukin-1 Kupfferovými buňkami v játrech, přispívá k destrukci hepatocytů při hepatotoxicitě D-galaktosaminu [20]. Antioxidační a protizánětlivé vlastnosti složek A. hierophantic mohou pomoci snížit hepatotoxicitu vyvolanou D-galaktosaminem [21]. A. hierophantic si může dovolit extrakt v závislosti na ochraně proti CCl4-hepatotoxicitě [22]. Navzdory tomu, že literatura ukazuje slibné možnosti související s použitím A. hierophantic, je třeba pečlivě prozkoumat nefroprotektivní potenciál A. hierophantic ethanolických (KEE) a vodných (KAE) extraktů. Kromě toho literární přehled zdůraznil především hepatoprotektivní účinnost A. hierophantic, ale nefroprotektivní potenciál nebyl dosud studován, což motivuje tuto práci. Současná studie si proto klade za cíl pozorovat změny v antioxidačních obranných enzymech, detekovat změny renální mikroskopie po podání CCl4 u potkanů ​​a zkoumat možné ochranné účinky extraktů A. hierophantic proti poškození ledvin vyvolanému CCl4-.

Cistanche pro zlepšení sexuality

2. Materiály a metody

2.1. Příprava vzorku Vzorek rostliny Kaff-e-Maryam (A. hierophantic L.) byl zakoupen z původního trhu ve městě Buraydah, oblast Qassim, Saúdská Arábie. Rostlinný materiál byl ověřen Ústavem rostlinné výroby a ochrany, Vysoká škola zemědělství a veterinární medicíny, Qassim University, Saúdská Arábie. Vzorek byl omyt čistou vodou z vodovodu, aby se odstranil písek a nečistoty z listů, a poté byl rostlinný materiál sušený na vzduchu (při 28 ± 1 ◦C po dobu 48 h.) mechanicky rozmělněn a uchováván v neprůhledných polyetylenových sáčcích při 4 ± 1 ◦C. do použití. 2.2. Příprava ethanolových a vodných extraktů Přibližně 200 g sušeného A. hierophantic byly extrahovány 3{{1{{106}}4}}0 ml 7{{150}} procent ethanolu v Soxhletově extraktoru k přípravě ethanolové extrakce (KEE). Extrakt byl zakoncentrován na rotační odparce při 40 °C, aby se odpařilo zbývající rozpouštědlo, a poté dosucha pod proudem N2. Vodná extrakce (KAE) byla provedena tak, jak je popsáno v Asuzu [23] s menšími úpravami. Dvě stě gramů sušeného rostlinného materiálu bylo přidáno do 500 ml horké sterilní destilované vody. Směs byla poté dobře protřepána a ponechána stát 1 hodinu. Potom byl k baňce připojen zpětný chladič a poté zahříván do mírného varu po dobu 10 minut, ochlazen, dobře protřepán a přefiltrován přes filtrační papír Whatman č. 1. Filtrát se odpaří na rotační odparce a poté do sucha pod proudem N2. Alkoholové a vodné extrakty (250 mg ml-1) byly čerstvě formulovány v destilované vodě pro použití pro orální podávání. 2.3. Celkový obsah fenolů (TPC) Obsah TPC v A. hierophantic byl stanoven podle upravené metody Bettaieba et al. [24]. Výsledky byly porovnány s vynesenou standardní křivkou kyseliny gallové (GA) vytvořenou v rozmezí 50–500 mg ml-1 (R2=0,99) a TPC byla vypočtena jako mg ekvivalentu kyseliny gallové (GAE ) na gram A. hierophantic (mg GAE g−1 ). 2.4. Celkové karotenoidy (TC), celkové flavonoidy (TF) a celkové flavonoly (TFL) Jak uvádí Al-Qabba et al. [10] bylo 5 g A. hierophantic opakovaně extrahováno směsí acetonu a petroletheru (1:1, v/v). Celkový obsah karotenoidů (TC) byl stanoven spektrofotometricky při 451 nm. TC byla vyjádřena jako mg g-1 DW. Obsah TF v A. hierophantic byl testován podle protokolu popsaného Mohdaly et al. [25]. Obsah TF byl vypočten jako mg ekvivalentu kvercetinu (QE) na 100 g-1 dw. Ve stejné souvislosti byl proveden obsah TFL [26]. Byla zaznamenána absorbance při 440 nm a TFL byla vypočtena jako mg ekvivalentu kvercetinu (QE) na 100 g-1 DW. 2.5. Stanovení antioxidační kapacity Test vychytávání radikálů DPPH: RSA byl testován spektrofotometricky v závislosti na bělení purpurově zbarveného roztoku DPPH podle upravené techniky Lu et al. [27]. Antiradikálová kapacita byla prezentována jako µmol ekvivalentů Troloxu (TE) na gram A. hierophantic (µmol TE g-1 ). Aktivita vychytávání radikálů ABTS: RSA A. hierophantic proti radikálům ABTS byla testována upravenou metodou podle Lu et al. [27]. Výsledky byly vyjádřeny jako µmol TE g-1. Test bělení -karoten–kyselina linolová: Procento antioxidantu A. hierophantic bylo hodnoceno z hlediska bělení -karotenem ve srovnání s butylovaným hydroxyanisolem (BHA) za použití upraveného spektrofotometrického protokolu určeného Koleva et al. [28]; výsledky byly uvedeny jako procento související s BHA. Chelatační účinek A. hierophantic na železnaté ionty: Chelatační aktivita A. hierophantic byla měřena podle protokolu Zhao et al. [29]. Bylo měřeno procento inhibice tvorby komplexu ferrozin-Fe2 plus jako chelatační účinek kovu a prezentováno jako mg ml-1, když byla jako pozitivní kontrola použita kyselina ethylendiamintetraoctová (EDTA). 2.6. Frakcionace polyfenolických sloučenin ve vodných a ethanolických extraktech A. hierophantic Stanovení polyfenolů z ethanolických a vodných extraktů bylo provedeno pomocí HPLC systému HP1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) vybaveného automatickým vzorkovačem, kvartérním čerpadlem a diodovým polem detektor (Hewlett Packard 1050) s použitím kolony (Altima C18 150 × 4,6 mm, 5 um) s 5 mm ochrannou kolonou Altima C18 (Alltech, Nettetal, Německo) podle Goupy et al. [30]. Použitý systém rozpouštědel byl gradient A (kyselina octová 2,5 procenta), B (kyselina octová 8 procent) a C (acetonitril). Rychlost rozpouštědla byla 1 ml min-1 a separace byla prováděna při 35 °C. Injikovaný objem byl 10 ul. Fenolické sloučeniny byly testovány externí standardní kalibrací a vyjádřeny jako mg g-1 DW ekvivalentů (plus)-katechinu pro flavan-3-}oly a ekvivalentního kumarinu pro polární aromatické sloučeniny. Variabilita 8 procent byla stanovena na pěti extrakcích fenolických látek ze stejného vzorku. Všechny hodnoty byly průměrem duplicitních injekcí. Polyfenoly a jejich deriváty byly identifikovány a kvantifikovány při 280 a 320 nm, zatímco flavonoidy byly identifikovány při 360 nm. 2.7. Experimentální design Všechny experimenty byly schváleny Institutional Animal Ethics Committee (IAEC) QU (č. 15-4-2017), KSA, která je regulována Výborem pro účel kontroly a dozoru nad experimenty na zvířatech (CPCSEA) pod Národní výbor pro bioetiku (NCBE), Prováděcí předpisy zákona o etice výzkumu živých tvorů. V této studii bylo použito celkem 36 samců krys albínů, kteří byli rozděleni do 6 skupin po 6 zvířatech a léčeni následovně: Skupina I (kontrola) obdržela intraperitoneální injekci (ip) olivového oleje (1,0 ml kg-1 dvakrát denně). týden) a 0,5 ml destilované vody perorálně/denně po dobu 21 po sobě jdoucích dnů. Skupina II dostávala ip injekci čerstvé směsi stejných objemů CCl4 a olivového oleje (v dávce 1,0 ml kg-1 dvakrát týdně) a 0,5 ml destilované vody orálně/denně podle Al-Qabba et al. [10] s drobnými úpravami. Skupina III (referenční skupina) dostala intramuskulární injekci (im) 50 mg kg-1 vit. E plus Se (Selepherol, Vetoquinol Co., Magny-Vernois, Francie) dvakrát týdně, podle Asuka et al. [31] a El-Desoky a kol. [32] a 0,5 ml destilované vody perorálně/denně. Skupina IV sloužila jako test a dostávala 250 mg kg-1 KEE orálně/denně spolu s CCl4 ip dvakrát týdně. Skupina V dostávala 250 mg kg-1 KAE perorálně/denně spolu s CCl4 ip dvakrát týdně. Skupina VI dostávala 250 mg kg-1 KEE plus KAE (1:1) orálně/denně spolu s CCl4 ip dvakrát týdně. Dvacet čtyři hodin po posledním ošetření (den 21) byly krysy anestetizovány směsí (alkohol:chloroform:ether, 1:2:3). Všem zvířatům byly odebrány vzorky krve z punkce srdce a sérum bylo odděleno centrifugací při 4{155}} otáčkách za minutu po dobu 10 minut a udržováno při -20 °C pro biochemické vyšetření. 2.7.1. Biochemická analýza ledvin Koncentrace kreatininu, močoviny, celkového proteinu a albuminu v séru byly stanoveny automatickými spektrofotometrickými metodami (autoanalyzátor BM/Hitachi-911; Boehringer Mannheim, Německo) podle pokynů výrobce. Hladiny draslíku byly stanoveny plamenovou fotometrií při 766 nm. 2.7.2. Odhad renální antioxidační aktivity Po odběru vzorků krve byla zvířata všech skupin usmrcena; pravé ledviny byly rychle izolovány a opláchnuty ledově chladným fyziologickým roztokem. Tkáň byla poté odstřižena, opláchnuta ve studeném fyziologickém roztoku, osušena a ihned umístěna na led. Pomocí elektrického tkáňového homogenizátoru byly části tkáně (1,0 g) zváženy a homogenizovány s 9 objemy ledově studeného 0,05 M fosfátového pufru při pH 7,4. Buněčné zbytky byly odstraněny centrifugací při 12 000 ot./min (4 °C) po dobu 20 minut, aby se shromáždily supernatanty pro stanovení koncentrace malondialdehydu (MDA) [33], aktivity superoxiddismutázy (SOD) [34] a sníženého obsahu glutathionu (GSH) [ 35]. Koncentrace proteinu v homogenátu ledviny byla stanovena pomocí Bradfordovy metody [36]. 2.7.3. Procento nefroprotekce Procento nefroprotekce (F) vit. E plus Se, KEE, KAE a KEE plus KAE byly vypočteny pro každý biochemický parametr samostatně podle Wakchaure et al. [37] pomocí následující rovnice: F procento=[1 − (T − N) (C − N)] × 100 (1) kde T=střední hodnota léčebné skupiny, C {{ 171}} střední hodnota pozitivní kontrolní skupiny a N= střední hodnota negativní kontrolní skupiny. Navíc bylo srovnáno celkové procento nefroprotekce (TFP procento). E plus Seas následuje TFP procento=Součet F procent biochemických parametrů každého extraktu součet F procent jeho biochemických parametrů. E plus Se × 100 (2) 2.7.4. Histopatologické studie Pitevní vzorky byly odebrány z levé ledviny samostatných skupin krys a fixovány v 10% formalínovém fyziologickém roztoku po dobu 24 hodin. Po promytí vodou z vodovodu následovala dehydratace sériovým ředěním alkoholu (methyl, ethyl a absolutní ethyl). Vzorky byly vyčištěny v xylenu a uloženy v parafínu na 24 hodin při 56 ◦C v horkovzdušné peci. Bloky tkáně z parafínového včelího vosku byly připraveny pro nařezání na 4-mikronové tloušťky pomocí saňového mikrotomu. Tkáňové řezy byly odebrány na sklíčka, zbaveny parafinu a obarveny hematoxylinem a eosinem pro pravidelnou kontrolu pod světelným elektrickým mikroskopem [38]. 2.8. Statistická analýza Výsledky jsou uvedeny jako průměr ± standardní chyba (SE). Význam rozdílů mezi průměry v různých skupinách byl zkoumán pomocí jednocestné analýzy rozptylu (ANOVA) následované Duncanovým testem a p-hodnota mezi průměry byla dána na hladině p < 0,05="" [39].="" 3.="" výsledky="" 3.1.="" fytochemikálie="" a="" antioxidační="" kapacita="" a.="" hierophantic="" byla="" provedena="" kvantitativní="" analýza="" fytochemikálií="" a.="" hierophantic="" a="" souvisejících="" antioxidačních="" aktivit="" pomocí="" vychytávání="" radikálů="" dpph="" a="" abts,="" bělicích="" aktivit="" -karoten-kyselina="" linolová="" a="" chelatační="" schopnosti="" (ca).="" jak="" je="" jasně="" vidět="" v="" tabulce="" 1,="" obsah="" tpc="" byl="" 67,49="" mg="" gae="" g-1.="" obsah="" tc="" byl="" 3,51="" µg="" g-1.="" obsah="" tf="" a="" tl="" byl="" 49,78="" a="" 17,45="" mg="" qe="" g-1,="" v="" daném="" pořadí.="" kromě="" toho="" byly="" dpph-rsa="" a="" abts-rsa="" použity="" k="" měření="" progrese="" antioxidačních="" aktivit.="" výsledky="" ukázaly="" 128,71="" µmol="" te="" g-1="" a="" 141,92="" µmol="" te="" g-1="" pro="" dpph-rsa="" a="" abts-rsa,="" v="" daném="" pořadí.="" navíc="" antioxidační="" aktivita="" (aoa)="" a.="" hierophantic="" je="" uvedena="" v="" tabulce="" 1.="" procento="" inhibice="" radikálů="" kyseliny="" linolové="" bylo="" vypočteno="" jako="" 45,74="" procenta="" ve="" srovnání="" s="" bha="" za="" použití="" testu="" bělení="" karotenem="" (-cb).="" dále="" hodnocení="" kov-chelatační="" aktivity="" odhalilo="" 42,89="" mg="" g-1,="" který="" se="" zdá="" být="" zdatný="" v="" interferenci="" s="" tvorbou="" komplexu="" fe2="" plus-ferrozin,="" což="" ukazuje="" na="" jeho="" schopnost="" chelatovat="" oxidační="" kovy.="" tabulka="" 1.="" celkový="" obsah="" fenolů,="" celkové="" karotenoidy,="" celkové="" flavonoidy,="" celkové="" flflavonoly="" a="" relativní="" potenciální="" antioxidační="" aktivity="" a.="" hierophantic="" (průměr="" ±="" se),="" n="">

3.2. Kvantifikace A. hierofantických fenolových sloučenin Byla provedena kvantitativní analýza fenolických sloučenin pro KEE a KAE analýzou HPLC a data jsou uvedena v tabulce 2. Devět separovaných fenolových kyselin a šest flavonoidů bylo identifikováno v detekovatelných množstvích z KEE z A. hierofantický. Nejhojnějšími fenolovými kyselinami byly hydroxyskořicové kyseliny, jako je kyselina sinapová (28,704 mg 1{{50}}}0 g−1 ) následovaná kyselinou kávovou (6,621 mg 1{ {63}}0 g-1 ), kyselina rozmarinová (2,884 mg 100 g-1 ), kyselina ferulová (1,854 mg 10{{85} } g-1) a kyselina skořicová (0.094 mg 100 g-1); a hydroxybenzoové kyseliny, jako je kyselina p-hydroxybenzoová (3,440 mg 100 g-1), kyselina protokatechuová (1,811 mg 100 g-1), kyselina vanilová (3,326 mg 100 g-1) a kyselina syringová (1,083 mg 100 g −1). Flavonoidy jako myricetin (16,269 mg 100 g-1), D-katechin (2,410 mg 100 g-1), kempferol (0,434 mg 100 g-1), rutin (0,539 mg 100 g-1), apigenin{58} } glukosidu (0,192 mg 100 g-1 ) a kvercetinu (0,184 mg 100 g-1 ) byla detekována neocenitelná množství. Byly také stanoveny fenolové sloučeniny v KAE A. hierophantic a data jsou uvedena v tabulce 2. Kyselina syringová byla zaznamenána jako nejvyšší fenolová kyselina mezi 21 identifikovanými fenolickými látkami. Katechol a pyrogallol byly 2,526 a 1,589 mg 100 g-1, v uvedeném pořadí. Údaje naznačují, že některé fenolové kyseliny, jako je kávová, katechinová, chlorogenová, epikatechinová, e-vanilová, p-hydroxybenzoová a protokatechuová, byly detekovány v mírných množstvích 0,725, 0,256, 0,136, 0,193, 0,443, 0,2043 mg a 0,2043 mg. g−1, resp. Ve stejné souvislosti jsou malá množství 3,4,5-trimethoxyskořicové, 4-aminobenzoové, benzoové, skořicové, kumarinové, ellagické, ferulové, galské, isoferulové, -kumarové, p-kumarové a kyseliny salicylové byly kvantifikovány po identifikaci. Epikatechin a D-katechin jako flavonoidy byly rovněž kvantifikovány v KAE u A. hierophantic.

3.3. Hladiny sérového kreatininu, močoviny, K, celkového proteinu a albuminu Injekce CCl4 podstatně zvýšila hladiny sérového kreatininu, močoviny a k u GII potkanů ​​ve srovnání s kontrolními potkany (GI). Naopak hladiny celkového proteinu a albuminu byly významně sníženy u potkanů ​​léčených CCl4-(tabulka 3). Vít. E plus Se a A. hierofantické extrakty (G III, IV, V a VI) podstatně snížily změny kreatininu a močoviny způsobené injekcí CCl4, zatímco zvýšily albumin a celkové proteiny tak, aby se blížily normálním hodnotám v GI (tabulka 3 ). Hladina k v séru byla výrazně zvýšena u potkanů ​​léčených CCl4-(GII) ve srovnání s GI (tabulka 3). Injekce vit. E plus Se a podávání A. hierophantic alkoholických a vodných extraktů (G IV, V a VI) také pozitivně zlepšilo hladinu k ve srovnání s GI (tabulka 3).

3.4. Renální antioxidační biomarkery Jak je ukázáno v tabulce 4, podávání CCI4 významně snížilo hladiny SOD a GSH a zvýšilo hladinu MDA v tkáni homogenátu ledvin GII. Ve srovnání s GI však krysy léčené oběma vit. E plus Se a A. hierofantické extrakty (GIII, VI, V a VI) vykazovaly podstatné zlepšení aktivity antioxidačních enzymů SOD a GSH, stejně jako snížení hladin MDA (tabulka 4). A. hierofantický alkoholický extrakt (GIV) překonal A. hierophantický vodný extrakt (GV) a kombinované alkoholové a vodné extrakty A. hierophantic ve zmírnění hladin antioxidantů a boj s procesem autooxidace vedl k nízkým hladinám MDA ve srovnání s GI.

3.5. Procento nefroprotekce Procento nefroprotekce (vzhledem k negativní kontrole (GI) a pozitivní (GII) skupině) funkcí ledvin, jako je kreatinin, močovina, k, TP a albumin, stejně jako antioxidační aktivity v homogenátu ledvin (MDA, SOD, GSH ) je znázorněna v tabulce 5. Procento nefroprotekce zaznamenalo nejvyšší hodnotu jako kreatinin, močovina, k v GIII, TP a albumin v GV, MDA a GSH v GIII a SOD v GV (tabulka 5). Celkové procento nefroprotekce vzhledem k vit. Léčba E plus Se zaznamenala maximální hladiny ve skupině léčené KAE (GV, 97,62 procenta), poté KEE (GIV, 83,27 procenta) a poté KEE plus KAE (GVI, 78,85 procenta), jak je uvedeno v tabulce 5.

Diskuse

vynikající antioxidační látky. Předpokládá se, že polyfenolické látky mají u lidí antikarcinogenní a antimutagenní vlastnosti [40]. Hodnotný obsah TPC v A. hierophantic byl mírně vyšší než obsah získaný Mohamedem et al. [21] jako 51,97 mg GAE g-1 v bylině A. hierochuntica a AlGamdi et al. [41], kteří našli 4 mmol L−1 GAE v semenech A. hierophantic. Nedávno Zin a kol. [42] označili přítomnost taninů v A. hierophantic jako bioaktivní sloučeninu a doporučili její biologickou aktivitu, kterou je třeba důkladně prozkoumat. Obsah -karotenu jako součást celkových karotenoidů byl 2,27 µg g-1, jak uvádí Mohamed et al. [21], a dokonce i současné výsledky uváděly celkové karotenoidy jako 3,51 µg g−1. Podobné nálezy v obsahu flavonoidů a flavonolů naznačili Mohamed et al. [21]. Biologicky aktivní složky, jako jsou fenolické sloučeniny, vykazují antioxidační aktivitu jako rozklady lipidových oxidačních řetězových reakcí tím, že poskytují vodík aktivním volným radikálům. Tento vychytávací potenciál fenolických látek inhibovat radikály byl objasněn jejich fenolickými hydroxylovými skupinami [8,10,22]. Tato fenolová kyselina byla popsána jako účinná antioxidační složka, včetně peroxidu vodíku, hydroxylového radikálu a superoxidového aniontu [43]. A. hierofantická chelatační aktivita kovů se zdá být zdatná v interferenci s komplexní konstrukcí „Fe2 plus –ferrozin“, což naznačuje její schopnost zachytit „železné“ ionty před „ferrozinem“. Pozitivní vztah mezi zvýšením jejich obsahu fenolických sloučenin přímo naznačuje jejich antioxidační kapacita [42]. Andjelković a kol. [44] prokázali aktivitu mnoha fenolových kyselin při tvorbě komplexů s kovy. Cenné TPC a relevantní antioxidační aktivity využívající různé přístupy měření poskytují jasnou desku a potvrzují bioaktivitu A. hierochuntica jako léčivé byliny pro potravinářské nebo nápojové aplikace. Biologicky aktivní složky, jako jsou fenolické sloučeniny, vykazují antioxidační aktivitu jako rozklady lipidových oxidačních řetězových reakcí darováním vodíku aktivním volným radikálům [45]. Tento vychytávací potenciál fenolických látek inhibovat radikály byl objasněn

účinná antioxidační složka, včetně peroxidu vodíku, hydroxylového radikálu a superoxidového aniontu [43,45,47]. Identifikované a kvantifikované sloučeniny pomocí HPLC v KAE A. hierophantic byly vyšší než počet identifikovaných sloučenin v KEE, ale identifikované sloučeniny v KEE A. hierophantic byly prezentovány ve vyšších množstvích [22]. Výsledky odrážejí, že konzumující A. hierophantic může představovat mnoho složek v polárních i nepolárních formách. Tyto výsledky jsou podobně prezentovány AlGamdi et al. [41], když identifikovali a kvantifikovali 20 polyfenolických sloučenin v semenech A. rentalrochuntica. Extrakt obsahoval kyseliny chlorogenové a kyseliny hydroxybenzoové, ale hlavními složkami byly flavonové C-glykosidy, C-glykosidy, O-glykosidy a O-glykosid-C-glykosidy vyskytující se převážně jako luteolinové konjugáty. Kromě toho 14 z 20 sloučenin v extraktu A. hierophantic vykazovalo antioxidační aktivitu pomocí HPLC-on-line antioxidačního detekčního systému [41]. Je zajímavé, že současné údaje potvrdily, že A. hierophantic je bohatý na fytochemické sloučeniny a je dobrým zdrojem přírodních antioxidantů s potenciálními přínosy pro zdraví, jak bylo dříve u semen sotva zdůrazněno [41]. Čaj připravený z prášku celé rostliny je tedy tradiční formou konzumace; údaje ilustrovaly nové identifikované bioaktivní sloučeniny v KEE a KAE A. rentalrochuntica, které se lišily od těch nalezených v AlGamdi et al. [41] V četných studiích se nefrotoxicita vyvolaná CCl{20}} používá jako modelový systém pro testování nefroprotektivního účinku rostlinných extraktů/léků [48,49]. Současná studie sledovala účinek extraktů A. hierophantic na poškození ledvin vyvolané CCl4-, stejně jako jejich nefroprotekci a antioxidační potenciál u potkanů. V současné studii skupina léčená CCl4 (GII) významně zvýšila hladiny kreatininu, močoviny a k a snížila koncentrace celkového proteinu a albuminu ve srovnání s GI. To může být způsobeno tím, že intoxikace CCl4 je hlavním zdrojem produkce volných radikálů v řadě orgánů, včetně jater, ledvin, plic, mozku a krve [50]. Bylo také pozorováno, že po injekci CCl4 u potkanů ​​je koncentrace CCl4 distribuována rovnoměrněji v ledvinách než v játrech [51], protože ledviny mají vysokou afinitu k CCl4 a obsahují cytochrom P450, převážně v kortexu. Nejběžnějšími volnými radikály z CCl4 jsou trichlormethylový radikál (CCl3• ) a trichlormethylperoxylový radikál (CCl3O2• ) [52]. Tyto radikály se vážou na intracelulární protein, lipidy buněčné membrány a DNA, což způsobuje denaturaci proteinu, peroxidaci lipidů a oxidativní poškození DNA, které vede k buněčné smrti [53]. Naproti tomu léčba CCl4-krys s ním. Extrakty E plus Se (GIII) a A. hierophantic (GVI: VI) účinně zmírnily toto zvýšení hladin kreatininu a močoviny, stejně jako zvýšily sérový albumin a celkové proteiny, aby byly velmi blízké jejich hladinám v GI. To může být způsobeno antioxidačními vlastnostmi a bohatým obsahem fenolů v extraktech A. hierophantic a jejich antioxidační kapacitou a chelatační aktivitou. E plus Se, který vychytává volné radikály a tím inhibuje poškození ledvin. Fytochemikálie jsou nejúčinnějšími lapači volných radikálů a jsou považovány za vynikající antioxidanty z rostlin [54]. Nejhojnějšími fenolovými sloučeninami byly hydroxyskořicové kyseliny, jako je kyselina sinapová, mezi devíti identifikovanými fenolovými sloučeninami v KEE, zatímco kyselina syringová byla nejvyšší fenolovou kyselinou mezi 21 identifikovanými fenolovými kyselinami v KAE. Šest flflavonoidů bylo identifikováno v KEE a dva v KAE pomocí HPLC analýzy [55]. Navíc jako antioxidant to. Předpokládá se, že E chrání tkáně před poškozením způsobeným reaktivními metabolity kyslíku. Selen je také dobře známý jako stopový minerál nezbytný pro lidské zdraví, který chrání buňky před škodlivými účinky volných radikálů [22]. V současné studii podávání CCl4 výrazně snížilo GSH a SOD a zvýšilo hladiny MDA v homogenátech ledvin vzhledem ke GI. Vít. E plus Se a A. hierofantické extrakty zlepšily různé účinky CCl4 obnovením změněné aktivity antioxidačních činidel, jako jsou SOD a GSH, a mohou deaktivovat proces produkce MDA, jak bylo nedávno publikováno [15,21,40,41] . GSH je neenzymatický antioxidant, který se nachází ve všech savčích buňkách. Se svou oxidovanou formou, GSSG, GSH působí jako kofaktor pro četné detoxikační enzymy (GPx, GST a další) proti oxidativnímu stresu a udržuje buněčnou redoxní rovnováhu [47]. Toto zjištění je v souladu se zjištěními Khan a Siddique [56] a Makni et al. [57], kteří uvedli, že CCl4 snižuje hladinu GSH v ledvinách potkanů. Léčba s tím. Extrakty E plus Se a A. hierophantic vykazovaly ochranu proti snížení hladiny GSH vyvolané CCl4. Ve stejném kontextu SOD katalyzuje dismutaci dvou molekul superoxidového aniontu (*O2) na peroxid vodíku (H2O2) a molekulární kyslík (O2), v důsledku čehož je potenciálně škodlivý superoxidový aniont méně nebezpečný [58,59]. Intoxikace CCl4 mění hladinu genové exprese deplecí renální SOD [60]. Snížení aktivity SOD je citlivým indexem buněčného poškození. Naše testované extrakty A. hierophantic zlepšily renální toxicitu zmírněním hladiny SOD. Účastní se různých enzymatických procesů ke snížení koncentrace de-to acidifikačních reakcí [61]. MDA je prvním produktem peroxidace lipidů a je jedním z důležitých markerů oxidačního stresu. A. hierofantické extrakty snížily zvýšení hladin MDA a obnovily celkovou antioxidační sílu v ledvinách potkanů ​​ošetřených CCl4-. Tyto ochranné účinky mohou být způsobeny silnou antioxidační aktivitou extraktů A. hierophantic [15,21,40,41]. Tyto výsledky také naznačují, že extrakty A. hierophantic mohou zmírnit oxidační stres snížením hladin peroxidu lipidů v ledvinách potkanů ​​vystavených CCl4- a zabránit poškození ledvin. Tyto výsledky souhlasily s výsledky antioxidačních aktivit Zn na CCl4-indukovanou akutní nefrotoxicitu [62,63]. Extrakty A. rentalrochuntica představovaly cennou nefroprotektivní kapacitu, pokud jde o testy funkce ledvin (kreatinin, močovina, K, TP a albumin) a antioxidační aktivity homogenátu ledvin (GSH, SOD, MDA) v GIV, V a IV, v tomto pořadí. Celkové procento nefroprotekce vzhledem k vit. Léčba E plus Se zaznamenala maximální hladiny ve skupině léčené KAE (GV, 97,62 procenta), poté KEE (GIV, 83,27 procenta) a poté KEE plus KAE (GVI, 78,85 procenta), v sestupném pořadí. To může být způsobeno rozdíly v množství a kvalitě fenolických a antioxidačních obsahů extraktů A. rentalrochuntica, které mají vztah k antioxidační kapacitě [15,19,22,40,42]. Histopatologické nálezy v ledvinách jsou v souladu s biochemickými odhady zkoumaných experimentálních skupin. Podání CCl4 (GII) způsobilo glomerulární a tubulární lézi s vazokongescí v ledvinách. Dogukan a kol. [64] objevili podobný histologický obraz v renální tkáni potkana jako odpověď na prodlouženou léčbu CCl4. Má se také za to, že histologické změny jsou způsobeny funkčním přetížením nefronů, které vede k renální dysfunkci [65], a/nebo jsou způsobeny destrukcí tkáně vyvolanou jako důsledek tvorby volných radikálů prostřednictvím metabolismu CCl4 [56,66]. . Účinek toho. E plus Se a A. hierofantické extrakty k opravě a obnovení destrukčních účinků CCl4 na ledviny byly pozoruhodné. Může to být kvůli tomu. E plus Se (jako silný antioxidant) působí na ROS indukované CCl4 [67]. Výtažky z A. hierophantic potlačují akutní nefrotoxicitu vyvolanou CCl4- kvůli antioxidační roli a vlastnostem fenolických sloučenin přítomných v extraktech z A.hirerochuntica pohlcovat volné radikály [22]. Naše zjištění jsou v souladu se zjištěními jiných výzkumníků, kteří prokázali, že různé rostlinné deriváty mají farmakologické účinky eliminací zneužívání CCl4 a obnovením normálního stavu [6].

Závěry

Výsledky této studie jasně prokázaly, že rostlina A. hierophantic je bohatá na polární a nepolární fenolické sloučeniny s vynikající antioxidační kapacitou, která přímo souvisí s fytochemickým obsahem. A. hierophantic (zejména vodný extrakt) chrání krysy před oxidativním stresem vyvolaným CCl4-a akutním poškozením ledvin, o čemž svědčí významný pokles hladin MDA a zvýšená aktivita GSH a SOD, jakož i zastavení biochemických a histologických změny v ledvinách. Ochranná účinnost může vyplývat z antioxidačních vlastností a vlastností fenolických sloučenin přítomných v extraktech z A. hierophantic, které pohlcují volné radikály. Tyto vlastnosti pomáhají vysvětlit léčivou účinnost rostliny jako bylinného léku. K úplnému popisu aktivních principů v A. hierophantic je zapotřebí více výzkumu a tato studie má podnítit komplexnější související výzkum, aby nabídl dostatek údajů a doporučení pro definování jeho mechanismů a bezpečných dávek.

Reference

1. Statistics, KD Chronic Kidney Disease in United States. 2021. Dostupné online: https://www.cdc.gov/kidneydisease/pdf/ Chronic-Kidney-Disease-in-the-US-2021-h.pdf (přístup 20. července 2021).
2. Ku, E.; Glidden, DV; Johansen, KL; Sarňák, M.; Tighiouart, H.; Grimes, B.; Hsu, CY Asociace mezi přísnou kontrolou krevního tlaku během chronického onemocnění ledvin a nižší úmrtností po nástupu konečného stádia onemocnění ledvin. Kidney Int. 2015, 87, 1055–1060. [CrossRef] [PubMed]
3. Tumlin, JA; Madaio, poslanec; Hennigar, R. Idiopatická IgA nefropatie: Patogeneze, histopatologie a terapeutické možnosti. Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 2007, 2, 1054–1061. [CrossRef] [PubMed]
4. Olah, G.; Reddy, VP; Prakash, GS; Reactions, FC Kirk-Othmer encyklopedie chemické technologie. Kontaktní čočky 1978, 720–742.
5. Ozturk, F.; Ucar, M.; Ozturk, IC; Vardi, N.; Batcioglu, K. Nefrotoxicita a ochranný účinek betainu u potkanů ​​Sprague-Dawley vyvolaná chloridem uhličitým. Urologie 2003, 62, 353–356. [CrossRef]
6. Ogeturk, M.; Kus, I.; Colakoglu, N.; Zararsiz, I.; Ilhan, N.; Sarsilmaz, M. Fenethylester kyseliny kávové chrání ledviny před toxicitou tetrachlormethanu u potkanů. J. Ethnopharmacol. 2005, 97, 273–280. [CrossRef]
7. Slater, TF Mechanismy volných radikálů při poranění tkání. In Cell Function and Disease; Cañedo, LE, Todd, LE, Packer, L., Jaz, J., Eds.; Springer: Boston, MA, USA, 1988; s. 209–218. [CrossRef]
8. Khan, MR; Rizvi, W.; Khan, GN; Khan, RA; Shaheen, S. Nefrotoxicita u potkanů ​​vyvolaná chloridem uhličitým: Ochranná role Digera muricata. J. Ethnopharmacol. 2009, 122, 91–99. [CrossRef]
9. Afsar, T.; Khan, MR; Razak, S.; Ullah, S.; Mirza, B. Antipyretická, protizánětlivá a analgetická aktivita Acacia hydaspica R. Parker a její fytochemická analýza. Doplněk BMC. Alternativní. Med. 2015, 15, 1–12. [CrossRef]
10. Al-Qabba, MM; El-Mowafy, MA; Althwab, SA; Alfheeaid, HA; Aljutaily, T.; Barakat, H. Fenolický profil, antioxidační aktivita a zlepšující účinnost klíčků Chenopodium quinoa proti oxidačnímu stresu vyvolanému CCl4 - u potkanů. Živiny 2020, 12, 2904. [CrossRef]