Pokroky v dermatologii s využitím DNA Aptamer "Aptamin C" Inovace: Prevence oxidačního stresu a maximalizace účinku vitamínu C prostřednictvím antioxidace

joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Sooho Choi PhD1|Jeongmin Han Ph.D. Kandidát2|Ji Hyun Kim kandidát MS1|A‐Ru Kim Ph.D. Kandidát3|Sang‐Heon Kim Ph.D. Kandidát3|Weontae Lee Ph.D., profesor2|Moon‐Young Yoon Ph.D., profesor3|Gyuyoup Kim PhD1|Yoon-Seong Kim Ph.D., profesor1

Abstraktní

Pozadí:Vitamín C(také známá jako kyselina L-askorbová) hraje klíčovou roli při redukci reaktivních forem kyslíku (ROS) a regeneraci buněk tím, že chrání buňky před oxidačním stresem. Přestože je vitamin C široce používán na kosmetických a terapeutických trzích, existují značné důkazy, že vitamin C snadno podléháoxidacevzduchem, pH, teplotou a UV zářením při skladování. Tento nedostatek vitaminu C snižuje jeho antioxidační účinnost a snižuje trvanlivost produktů obsahujících vitamin C jako složku. K překonání nedostatku vitaminu C jsme vyvinuli Aptamin C, inovativní DNA aptamer, který maximalizuje antioxidační účinnost vitaminu C tím, že se váže na redukovanou formu vitaminu C a zpomaluje jehooxidace.

Metody:Vazba aptaminu C s vitaminem C byla stanovena pomocí ITC analýzy. Experiment ITC byl proveden s 0,2 mmol/lvitamín Ckterý byl 25krát injikován v 2 µl alikvotech do 1,8 ml vzorkové cely obsahující aptamin C v koncentraci 0.02 mmol/l. Data byla přizpůsobena izotermě vazby na jednom místě pomocí původního programu pro ITC v.5.0.

Výsledek:Prozkoumat účinek Aptaminu C avitamín Ckomplex v lidské kůži, byly provedeny in vitro i klinické testy. Zjistili jsme, že komplex Aptaminu C a vitaminu C byl významně účinný ve zlepšení vrásek, bělícím efektu a zvýšení hydratace. V klinickém testu subjekty léčené komplexem vykazovaly dramatické zlepšení podráždění kůže a svědění. Komplex Aptamin C v testu nevykazoval žádnou nežádoucí reakci.

Závěr:Celkově tyto výsledky ukázaly, že Aptamin C, inovativní nová sloučenina, by měla být potenciálně podávána jako klíčová kosmetická složka pro řadu kožních onemocnění.

KLÍČOVÁ SLOVAantioxidace, aptamin C (vitamín C vázající aptamer),oxidace, oxidační stres,vitamín C(kyselina L-askorbová)

cistanchemají silnou antioxidační schopnost

1|ÚVOD

Reaktivní formy kyslíku (ROS) jsou chemicky reaktivní chemické látky obsahující kyslík, který hraje důležitou roli v buněčné signalizaci a homeostáze.{0}} Patří mezi ně nejen pozitivní účinky, jako je indukce obranných genů hostitele a mobilizace iontových transportních systémů, ale i také role v apoptóze (programované buněčné smrti).4,5 Hladiny ROS mohou být zvýšeny stresem z prostředí, což vede k poškození buněčných struktur.3 Tento jev se nazývá „oxidační stres“. Oxidační stres je jednou z hlavních příčin různých onemocnění, včetně neurodegenerativních onemocnění, Lou Gehrigovy choroby, autismu, roztroušené sklerózy a kožních onemocnění.{4}} Oxidační stres má navíc přímý vliv na proces stárnutí kůže16; proteiny, lipidy a DNA citlivě reagují na oxidační stres, který je způsoben ROS.17 Antioxidanty jsou vysoce účinné v ochraně kůže, protože reagují přímo na ROS a brání jim v dosažení biologických cílových molekul.18,19 Antioxidanty jako např.vitamín C, vitamín E, koenzym Q10 a polyfenolické sloučeniny chrání pokožku před poškozením způsobeným ROS. Antioxidanty tak pomáhají předcházet a léčit různá kožní onemocnění a zpomalují proces stárnutí kůže.vitamín Cschopnost neutralizovat volné kyslíkové radikály prostřednictvím procesu zvaného vychytávání radikálů.21,22 Avšak kvůli stejným antioxidačním vlastnostem je molekula sama o sobě přirozeně náchylná k degradaci prostřednictvímoxidace. K vyřešení tohoto problému jsme vyvinuli Aptamin C, DNA aptamer, který se specificky váže na vitamin C a inhibuje oxidaci vitaminu C. Aptamery jsou jednovláknové oligonukleotidy založené na DNA nebo RNA schopné selektivně vázat širokou škálu molekul. Aptamery jsou běžně identifikovány in vitro způsobem selekce označovaným jako Systematická evoluce ligandů exponenciálním obohacením nebo "SELEX". Zjistili jsme, že aptamin C inhibujeoxidacevitaminu C z několika oxidačních činidel a zachovává antioxidační aktivitu při dlouhodobém skladování. Pro potvrzení hodnocení bezpečnosti Aptaminu C byly provedeny experimenty na buněčné úrovni a přímo aplikovány na člověka a nebyla pozorována žádná toxicita. Kožní onemocnění, jako je atopická dermatitida, psoriáza a akné, souvisí s imunitní odpovědí a ROS.23Vitamín Cmá schopnost odstraňovat ROS a má protizánětlivý účinek.24 Aptamin C zabraňujeoxidacevitaminu C a maximalizuje jeho účinnost pomalým uvolňováním. Očekáváme tedy, že komplex Aptamin C‐vitamín C bude vykazovat synergický efekt.

2|MATERIÁLY A METODY

2,1|Screening aptameru proti vitaminu C se sníženým obsahem oxidu grafenu

Tato metoda byla provedena modifikací metody předchozího výzkumu.25 Kandidáti ssDNA, kteří se mohou specificky vázat navitamín Cbyly vyvinuty z náhodné knihovny ssDNA sestávající z přibližně 1X1018 různých sekvencí. Pro knihovnu ssDNA jsme použili na zakázku vyrobenou sekvenci o velikosti 60 merů a obsahující 30 náhodně generovaných nukleotidových sekvencí a místo primeru pro amplifikaci (5′‐ATGCGGATCCCGCGC‐(N)30‐GCGCGAAGCTTGCGC‐3′). Provedli jsme celkem pět kol při změně experimentálních podmínek, abychom vybrali specifičtější sekvenci. Celkový objem pro reakci byl 200 ul. Asi 20 μl 10× vazebného pufru (10× PBS s přídavkem 10 mmol/L MgCl2), 80 μL rGO (5 mg/ml, zředěno ve vodě) a 200 pikomolů knihovny ssDNA (20 μL 100 μmol/L zásobního roztoku ) byly přidány a doplněny dH2O na 200 ul. Reakce probíhala po dobu 30 minut, aby se navázala knihovna ssDNA na rGO, a poté byla směs centrifugována při 20 000 g po dobu 20 minut, aby se odstranil supernatant. Peleta rGO byla 1krát promyta 200 ul vazebného pufru, což je stejná koncentrace jako podmínka navázání cíle v každém kole. K eluci kandidátů, 200 nanomolůvitamín Czředěné ve 200 μl vazebného pufru byly přidány k peletě rGO a eluční krok trval 1 hodinu. Eluovaná ssDNA byla rozdělena centrifugací, která byla provedena při 20 000 g po dobu 20 minut a amplifikována. Před amplifikací jsme provedli srážení EtOH, abychom odstranili nečistoty kromě ssDNA. Provedli jsme asymetrickou PCR, abychom získali amplifikovanou ssDNA. Poměr forwardového primeru k reverznímu primeru asymetrické PCR byl 10:1. Provedli jsme elektroforézu na 2,5% agarózovém gelu, abychom potvrdili PCR produkt s několika mikrolitry. Asymetrická PCR nemůže produkovat pouze ssDNA. Takže jsme provedli metodu rozdrcení a namočení, abychom izolovali kandidáty ssDNA. Pro tuto metodu jsme provedli elektroforézu na 12% polyakrylamidovém nativním gelu a gel jsme obarvili ethidium bromidem (EtBr). K oddělení dvouřetězcové DNA (dsDNA) a ssDNA byla část gelu obarvená ssDNA vyříznuta, rozmělněna a extrahována ssDNA rozdrceným a namáčecím pufrem (500 mmol/l NH4OAc, 0,1 procenta SDS, 0,1 mmol/l EDTA). přes noc. Rozmělněný gel byl oddělen centrifugací. Supernatant, který obsahuje ssDNA, se zahustí a přečistí srážením EtOH. Vysušená ssDNA byla shromážděna se sterilizovanou dH20 a tato byla použita pro další kolo jako knihovna.

přírodní ingrediencecistanche amazonka

2,2|Experiment izotermické titrační kalorimetrie (ITC).

Experiment izotermické titrační kalorimetrie byl proveden pomocí systému VP-ITC (MicroCal Inc Northampton) při 25 stupních ve fyziologickém roztoku s fosfátovým pufrem složeném z 1 mmol/l chloridu hořečnatého (pH 7,4). Před každým titračním experimentem Aptamin C 2 ml avitamín C600 µL vzorků bylo odplyňováno po dobu 30 minut ve vakuu, bez míchání, při teplotě o několik stupňů nižší, než je teplota experimentu. Připravili jsme 0,2 mmol/l vitaminu C, který byl 25krát injikován v 2 µl alikvotech do 1,8 ml vzorkové cely obsahující aptamin C v koncentraci 0,02 mmol/l. Data byla přizpůsobena izotermě vazby na jednom místě pomocí původního programu pro ITC v.5.0 (MicroCal Inc).

2,3|Fluorescenční mikrotitrační testy pro oxidaci vitaminu C

Oxidacezvitamín Cbyla měřena detekcí oxidovaného produktu dehydroaskorbátu (DHA) za použití upravené verze metody popsané Visliselem et al.7 V této metodě je DHA detekována reakcí s o‐fenylendiaminem (OPDA) za vzniku fluorescenčního kondenzačního produktu 3‐( dihydroxyethyl)furo[3,4‐b]chinoxalin‐1‐on. Test byl proveden následovně na černých 384jamkových destičkách (Greiner Bio-One). Aptamery byly nejprve rozpuštěny ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku, pH 7,2, obsahujícím 1 mM MgCl2, v koncentraci 200 umol/l, poté složeny zahřátím na 95 stupňů a ponechány pomalu vychladnout na teplotu místnosti po dobu 15 minut. Složené aptamery byly poté zředěny 1:1 (v:v) do čerstvě připraveného roztoku 5 mmol/lvitamín Cv testovacím pufru [50 mmol/l octanu sodného, ​​1 procento (w/v) BSA, 0,05 procent (v/v) Tween 20, 1mM MgCl2 (Sigma, všechny složky) upravené na pH 5,5] a směs byla inkubována po dobu 30 minut při teplotě místnosti, aby se umožnilo navázání aptamerů před přidáním oxidačního činidla. K roztokům vitaminu C/aptamer byly poté přidány oxidační činidla v koncentracích (EM) H202 (Sigma). Oxidační činidla byla předem naředěna na jejich pracovní koncentrace v testovacím pufru. Vzorky byly poté inkubovány při teplotě místnosti po dobu 10 minut před přidáním OPDA (Sigma) v koncentraci 5,5 mmol/l v testovacím pufru. Bezprostředně po přidání OPDA byla stanovena fluorescence vzorků při 425 nm pomocí čtečky destiček SpectraMax® i3X (Molecular Devices) s excitací při 345 nm, v průběhu 45 minut s měřením prováděným každých 60 sekund. Všechny vzorky a nádoby obsahující činidla byly zabaleny do fólie, aby byly chráněny před světlem během všech inkubací prováděných pro fluorescenční testy.

2,4|Měření redukce vitaminu C pomocí DCPIP (2,6-dichlorfenolindofenol)

K určení sníženívitamín Cjsme provedli experimenty pomocí DCPIP reakce. Vitamin C reaguje s DCPIP a mění barvu z modré na bezbarvou. Připravený vitamín C byl ošetřen 5% Aptaminem CTM a neošetřený vitamín C byl inkubován při pokojové teplotě po dobu 8 týdnů. Vzorek byl měřen po 2, 4 a 8 týdnech. Asi 2 ml DCPIP byly přidány do kónické baňky pomocí pipety a byl přidáván první neošetřený vitamín C, dokud se roztok nezbarvil. Množstvívitamín Cpřidaný byl měřen a opakován s dalšími vzorky. Stupeň redukce každého vzorku byl vypočten podle těchto dat.

2,5|In vitro studie účinku proti vráskám u lidských dermálních fibroblastů

Aby se vyhodnotila životaschopnost buněk v lidských dermálních fibroblastech, buňky byly ošetřeny různými konečnými koncentracemi aptaminu C svitamín C(Aptamin C ug plus vitamín C ug/ml) {{0}}.01 plus 0,5 ug/ml, 0,1 plus 5 ug/ml, 0,5 plus 25 ug /ml, 1 plus 50 ug/ml a 2 plus 100 ug/ml. Poté byly buňky ošetřeny v koncentracích aptamínu C s vitamínem C, aby se detekoval intracelulární kolagen, intracelulární kolagenáza (MMP-1) a aktivita elastázy.

Lidské dermální fibroblasty (HDF) byly vybrány na základě "Pokynů pro hodnocení účinnosti funkční kosmetiky (ΙI)" MFDS. HDF byly kultivovány ve směsi DMEM/F12 3:1 s vysokým obsahem glukózy doplněné o 10 procent FBS a 1 procento antibiotika-antimykotika ve zvlhčené atmosféře 5 procent CO2 při 37 °C.

HDF (5 × 104 buněk/jamka) byly nasazeny do 24jamkových destiček a inkubovány po dobu 24 hodin a byly ošetřeny různými koncentracemi aptaminu C svitamín Ca inkubovány po dobu 24 hodin. Po 24 hodinách byl shromážděn supernatant a množství prokolagenu uvolněného do média bylo měřeno při 450 nm pomocí ELISA soupravy Procollagen Type IC-Peptide (PIP). Stupeň produkce kolagenu byl kalibrován podle obsahu celkového proteinu a porovnán s TGF‐ 1 jako pozitivní kontrolou. Jako kontrola rozpouštědla byla použita média bez testovaných materiálů.

HDF (5 × 104 buněk/jamka) byly nasazeny do 24jamkových destiček a inkubovány po dobu 24 hodin a byly ošetřeny různými koncentracemi aptaminu C svitamín Ca inkubovány po dobu 48 hodin. Po 48 hodinách byla měřena aktivita kolagenázy při 450 nm pomocí MMP-1 Human ELISA Kit. Aktivita MMP‐1 byla hodnocena podle obsahu celkového proteinu a srovnávána s TGF‐ 1 jako pozitivní kontrolou. Jako kontrola rozpouštědla byla použita média bez testovaných materiálů.

Všechna data byla vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka a pocházela ze 3 nezávislých experimentů. Statistická analýza byla provedena t-testem nezávislých vzorků s použitím softwarového programu SPSS® (IBM) na hladině významnosti P <>

2,6|Měření vrásek pokožky systémem 3D analýzy obrazu

Této studie se zúčastnilo 22 žen (průměrný věk: 50,05 ± 2,94 let). Vrásky kůže na vraních nohách byly hodnoceny systémem 3D analýzy obrazu na začátku, 4 a 8 týdnů. Hydratace kůže byla hodnocena kapacitní metodou a TEWL metodou difúze vody na povrchu kůže a elasticita kůže metodou sání byly hodnoceny na začátku, 2, 4 a 8 týdnů po léčbě. Také vlastní dotazníky týkající se účinnosti byly vyplněny subjekty ve 2. a 4. a 8. týdnu a dotazník použitelnosti byl vyplňován subjekty 8. týdnů po léčbě. Všechna získaná data byla statisticky analyzována softwarem SPSS®. Parametry vrásek vrásek byly hodnoceny pomocí PRIMOS® Premium (GFMesstechnik GmbH). Tento systém umožnil kvantitativní analýzu drsnosti, hloubky, plochy a objemu vyčnívajících kožních vrásek. Snímek byl analyzován ve stejné oblasti z hlediska parametrů vrásek pleti (1, průměrná hloubka vrásek; 2, střední hloubka největší vráska; 3, maximální hloubka největší vráska; 4, celková plocha vrásek; 5, celkový objem vrásek; 6 , celkový tvarový faktor vrásky; 7, celková délka vrásek; 8, Ra; 9, Ry; a 10, Rz) na začátku, 4 a 8 týdnů po ošetření Primos 5,8 E ver. Software.

3|VÝSLEDEK

3,1|K úspěšnému provedení rGO‐SELEX s nestabilním cílem byl vyžadován přísný přístup k přípravě pufru

Knihovna ssDNA, která byla navázána na rGO prostřednictvím π‐π stohovacích interakcí mezi aromatickými kruhy povrchu grafenu a bázemi DNA 26, 27 a nevázanou ssDNA na rGO, byla oddělena a odstraněna centrifugací. ssDNA, které byly adsorbovány na povrchu rGO, byly eluovány působením cílové sloučeniny. Podle literárních zpráv se konformace aptameru mění po navázání na cíl a oslabením π‐πstacking interakcí s rGO.28-31 Tento proces se opakoval po pět kol. Každé následující kolo probíhalo s drsnějšími podmínkami pufru a kratšími časy eluce. Tento výkon nám umožnil zachovat ssDNA s lepší specificitou k cílovým sloučeninám.

Data NGS obohacené knihovny vytvořené procesem rGO‐SELEX poskytla 404071 sekvencí. Z těchto dat jsme vybrali 119 sekvencí, seřadili je do 11 skupin na základě strukturní podobnosti a vybrali reprezentativní sekvence pro kandidáty na aptamer (obrázek 1A).

3,2|Výběr aptaminu C

Sekundární struktury kandidátů Aptaminu C byly předpovězeny pomocí bezplatného softwaru M‐Fold.32,33 Kandidáti byli seskupeni podle jejich polohy, délky, tvaru a počtu stonků a smyček struktury s nejvyšším potenciálem (obrázek 1B). DHA, oxid ofvitamín C, je detekován reakcí s o‐fenylendiaminem (OPDA), který hraje roli indikátoru.34 Pokud se aptamer naváže a zabrání jehooxidacena vitamín C a zabraňuje jeho oxidaci, bude fluorescenční signál z 3‐(dihydroxyethyl)‐furo‐[3,4‐b]chinoxalin‐1‐onu, kondenzačního produktu vitaminu C a OPDA, nižší než u kontrola bez aptameru. Graf každého kandidátního aptameru smíchaného s vitamínem C a oxidačním činidlem, s pozitivními kontrolami,vitamín Cplus oxidační a míchací sekvence smíchané s vitamínem C a okysličovadlem (obrázek 1C). Bylo prokázáno, že pět aptamerů, aptamin Cb, Cc, Cf, Cg a Ck, má antioxidační účinky.

3,3|Inhibice oxidace vitaminu C aptaminem C

Aptamin C má vysokou vazebnou afinitu kvitamín C. Vazba aptaminu C s vitaminem C byla stanovena pomocí ITC analýzy. Z vazebné izotermy lze získat entalpii (ΔH), entropii (ΔS) a stechiometrii (n) vazebné reakce. Exotermická vazba aptaminu Cb byla detekována z měření ITC a entalpie (ΔH) byla vypočtena jako 302,5 ± 3,788, entropie (ΔS) byla vypočtena jako 18,9, stechiometrie(n) byla vypočtena jako 56,7 ± {{21 }}.426 a disociační konstanty (Kd) byly vypočteny jako 2,13 uM pro vitamín C. Exotermická vazba aptaminu Cf byla detekována z měření ITC a entalpie (ΔH) byla vypočtena jako 279,2 ± 2,992, byla vypočtena entropie (AS) jako 18,4, stechiometrie(n) byla vypočtena jako 167 ± 1,15 a disociační konstanty (Kd) byly vypočteny jako 0,89uM pro vitamín C. Exotermická vazba aptaminu Ck byla detekována z měření ITC a entalpie (ΔH ) byla vypočtena jako 250,4 ± 3,742, entropie (AS) byla vypočtena jako 19,8, stechiometrie(n) byla vypočtena jako 82,2 ± 0,732 a disociační konstanty (Kd) byly vypočteny jako 0,90 µmol/l pro vitamin C (obrázek 2A). Měření ITC odhalují, že hlavní hnací silou je změna entropie při spojení s aptaminem Cvitamín C. Aby se zabránilooxidacevitaminu C v kapalném stavu byly všechny roztoky připraveny s deionizovanou vodou upravenou dusíkem. Fluorescence byla vyjádřena a kvantitativně analyzována, když se OPDA (o-fenylendiamin) navázal na DHA generovanýoxidacevitaminu C. Stupeň oxidace vitaminu C podle koncentrace aptamínu C (125, 250, 500 a 1000 nmol/l) byl porovnán a potvrzen testem OPDA. Výsledky ukázaly, ževitamín Ckonverze na kyselinu dehydroaskorbovou byla pomalejší, když byla koncentrace aptaminu C vyšší. (Obrázek 2B). Tyto údaje dokazují, že aptamin C je na dávce závislý inhibitor oxidace vitaminu C.

Provedli jsme experimenty, abychom zjistili, zda Aptamin C může zabránitoxidacevitaminu C po dlouhou dobu. Souběžně léčeno aptaminem Cvitamín Ca neošetřený vitamín C byly vystaveny světlu a ponechány stát při pokojové teplotě po dobu 8 týdnů. Výsledkem bylo, že když byl neléčený vitamín C ponechán v klidu, stupeň redukce se během 2 týdnů snížil na méně než polovinu a téměř všechny byly po 4 týdnech oxidovány. V přítomnosti aptaminu C se vitamín C snížil na přibližně polovinu až 8 týdnů (obrázek 2C). To naznačuje, že Aptamin C zabraňuje oxidaci vitaminu C po dlouhou dobu.

cistanche kulturistika

3,4|Analýza aktivity intracelulární kolagenázy (MMP‐1) a kolagenu

Při analýze aktivity kolagenázy byla produkce matricové metaloproteinázy-1 (MMP-1) významně snížena v závislosti na dávce, a to o 7.06 procent, 9,29 procent a 31,81 procent při koncentracích {{1{ {12}}}}.01 plus 0,5 ug/ml, 0,1 plus 5 ug/ml a 0,5 plus 25 ug/ ml (obrázek 3A). Při analýze syntézy kolagenu byl karboxyterminální peptid typu Ι prokolagenu (PIP) významně zvýšen v závislosti na dávce, s 25.{{20}} procentním zvýšením na 0,01 plus 0,5 ug/ml 41,99 procenta při 0,1 plus 5 ug/ml a 71,18 procenta při 0,5 plus 25 ug/ml (obrázek 3B).

3,5|Klinická studie účinků zlepšení kožních vrásek na lidskou pokožku

Statistická analýza parametrů vrásek byla provedena pomocí systému 3D analýzy obrazu, aby se vyhodnotily účinky testovaného produktu na zlepšení vrásek kůže na lidskou pokožku. Ve srovnání s kontrolní skupinou byl parametr „Průměrná hloubka vrásek“ snížen o 4,77 procenta po 4 týdnech a o 4,25 procenta po 8 týdnech, parametr „Průměrná hloubka největších vrásek“ byl snížen o 3,37 procenta po 4 týdnech a 4,53 procenta po 8 týdnech,“ Parametr Max. hloubka největší vrásky" byl snížen o 4,36 procenta po 4 týdnech a 7,19 procenta po 8 týdnech, parametr "Celková délka vrásek" byl snížen o 1,61 procenta po 4 týdnech a 2,67 procenta po 8 týdnech, parametr "Ra" byl snížen o 4,22 procenta po 4 týdnech a 3,90 procenta po 8 týdnech byl parametr "Ry" snížen o 2,66 procenta po 4 týdnech a 7,11 procenta po 8 týdnech, parametr "Rz" byl snížen o 3,69 procenta po 4 týdnech a 6,22 procenta po 8 týdnech, pokles byl 3,69 procenta ‐7,11 procenta (obrázek 4).

4|ZÁVĚR

Vitamín Cje komerčně důležitá, ale nestabilní molekula, takže zlepšení její stability je předmětem zájmu různých sektorů trhu. Naše práce ukazuje, že aptamin C, DNA aptamery, potenciálně prodlužuje dobu použitelnosti a zvyšuje účinnost takových produktů tím, že oddalujevitamín C oxidacev řešení. Prokázali jsme klinickou účinnost komplexu Aptamin C při zlepšování vrásek a hydrataci pokožky. Komplex aptaminu C může také pomoci zmírnit drsnou pokožku.

zlepšit bělení kůže