Předběžný průzkum podpůrného účinku a mechanismu polysacharidů z Cistanche Deserticola na proliferaci lymfocytů
Dec 04, 2025
Metody
MTT test byl použit k detekci proliferace slezinných lymfocytů u myší. Cyklofosfamid (Cy) byl použit k replikaci zvířecích modelů imunokompromitovaných zvířat a byly měřeny indexy sleziny a brzlíku normálních a imunokompromitovaných zvířat. Aktivita interleukinu-2 (IL-2) byla měřena testem proliferace thymocytů. Výsledky: Polysacharid Cistanche deserticola významně podporoval proliferaci mitogenem (ConA a LPS) aktivovaných lymfocytů a neaktivovaných normálních buněk a podporoval sekreci IL-2 v lymfocytech. Intraperitoneální podání ukázalo, že polysacharid Cistanche deserticola významně zvýšil index sleziny normálních a imunokompromitovaných myší a měl také významný antagonistický účinek na snížení indexu thymu způsobené Cy. Závěr: Polysacharid Cistanche deserticola může významně podporovat proliferaci slezinných lymfocytů u myší, což může souviset s jeho podporou sekrece IL-2.
Pouštní žijící cistanche
[klíčová slova]Polysacharid Cistanche deserticola; Index sleziny; brzlíkový index; proliferace lymfocytů; Interleukin-2
Rostlinné polysacharidy přitahovaly širokou pozornost díky svým rozšířeným imunomodulačním účinkům a relativně nízké toxicitě [1]. Cistanche deserticola ma, známá jako "Pouštní ženšen", je šupinatá, suchá, masitá nať Cistanche deserticola, rostliny z čeledi Orobaceae, která má rozsáhlé farmakologické účinky. Jeho vodní odvar může výrazně zvýšit fagocytární procento a fagocytární index makrofágů. Další studie ukázaly, že jeho materiálovým základem je celkový polysacharid Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli a kol. [4] zjistili, že jediná složka polysacharidu Cistanche deserticola má významný proliferační účinek na lymfocyty thymu myší in vitro. Účinek polysacharidu Cistanche deserticola na proliferaci lymfocytů byl pozorován in vivo a in vitro.
Molekulární vzorec Cistanche deserticola
1Materiál a metody
1.1 Léky a činidla
Polysacharid z Cistanche deserticola poskytuje rostlinolékařské a chemické oddělení Institutu medicíny a pěstování, Medical College. Je extrahován z prášku extraktu Cistanche a obsah polysacharidů je 87 %.
Prášek z extraktu cistanche
Před použitím in vivo experimentů rozpusťte a zřeďte fyziologickým roztokem na požadovanou koncentraci a vařte pro sterilizaci. Před použitím in vitro experimentů bylo kultivační médium RPMI-1640 rozpuštěno a zředěno a byla provedena vysokotlaká sterilizace. Lipopolysacharid (LPS), konkanavalin (ConA), dexamethason (DEX) a MTT jsou všechny produkty společnosti Sigma Corporation. Cyklofosfamid, čínsko-americký společný podnik Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., fetální bovinní sérum, kultivační médium RPMI1640 a trypsin, to vše jsou produkty Gibco. Ostatní činidla jsou domácí analytická činidla.
1.2 Zvířata
Mladé myši BALB c (úroveň SPF) poskytuje Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Peking) 2002-2003]. Zvířata třídy SPF jsou chována v místnosti a jsou volně krmena a pijí.
1.3 Zařízení
Enzymový marker Multikan Ascent, produkt společnosti Thermo Electron Company, USA. Leici PHS-3B Přesný pH metr, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., inkubátor oxidu uhličitého NAPCOo 5410, NAPCO, USA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Inverted Microscope, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.
1.4 Metoda
1.4.1 Účinek na proliferaci lymfocytů [5]:
Rutinní příprava slezinných lymfocytů z myší BALB/c pomocí RPMI-1640 k úpravě koncentrace buněk na 1 × 107 ml, inokulovaných na 96jamkové kultivační destičce, se 100 buněčnými suspenzemi přidanými do každé jamky μL-50. Byl kokultivován s různými koncentracemi polysacharidu Cistanche deserticola (konečná koncentrace polysacharidu Cistanche deserticola pro proliferaci neaktivovaných lymfocytů byla 6,25, 12,5, 25, 50 a 100 mg/l v pořadí; konečná koncentrace Cistanche T deserticola pro proliferaci polysacharidu Concredita byla pro polysacharid A. 3,9; 7,8; 15,6; Celkový objem každého otvoru je 200 μL. Při přidání mitogenu ConA a LPS (kontrola je RPMI-1640 obsahující odpovídající koncentrace ConA nebo LPS) jsou konečné koncentrace obou 2,5 mg/l a 10 mg/l. Pro různé úpravy byly vytvořeny tři paralelní otvory. Umístěte kultivační destičku do inkubátoru na 68 hodin při teplotě 37 stupňů a 5% CO2, přidejte MTT a pokračujte v kultivaci po dobu 4 hodin. Změřte hodnotu A540 nm enzymovým markerem pomocí metody MTT k detekci proliferace. Při porovnávání každé skupiny převeďte hodnotu A540nm na rychlost proliferace lymfocytů podle následujícího vzorce:rychlost proliferace lymfocytů=AA vzorek A kontrola × 100 %.
Účinky Cistanche-Zlepšení imunity
1.4.2 Účinek na hmotnost imunitních orgánů u normálních myší [6,7]:
Mladé myši BALB c (samci, 4 týdny staré, s tělesnou hmotností 10-15 g) byly náhodně rozděleny do slepé kontrolní skupiny (fyziologický roztok) a různých dávkových skupin (125 mg (kg · bw) a 250 mg (kg · bw) s 11 krysami v každé skupině. Lék byl podáván intraperitoneálně jednou denně po dobu 7 po sobě jdoucích dnů. Myši byly zabity po cervikální dislokaci. Byla odebrána slezina a brzlík, odstraněn tuk a tkáň fascie a povrchová kapalina byla vysušena filtračním papírem. Po zvážení index sleziny=100 × Hmotnost sleziny (mg) Tělesná hmotnost (mg); Hthymusindex=100 × Hmotnost brzlíku (mg) Tělesná hmotnost (mg). Vypočítejte index sleziny a index brzlíku pro každých 100 mg tělesné hmotnosti.
1.4.3 Účinek na hmotnost imunitního orgánu u imunokompromitovaných myší [7,8]:
Mladí krysy BALB c (samci, 6 týdnů staří, tělesná hmotnost 15-20 g) byli náhodně rozděleni do 12 skupin podle tělesné hmotnosti. S výjimkou normální kontrolní skupiny (intraperitoneální injekce ekvivalentního objemu fyziologického roztoku) byl ostatním skupinám injikován Cy 50 mg (kg · bw) denně intraperitoneálně a roztok testovaného léčiva byl podáván intraperitoneálně [125 a 250 mg (kg · bw)], normální kontrolní skupině a modelové skupině byl podáván stejný objem fyziologického roztoku jednou za 13 dní. Změny hmotnosti zvířat byly pozorovány během experimentu. 24 hodin po posledním podání, byly měřeny a vypočteny indexy sleziny a brzlíku za použití stejné metody jako v 1.4.2.
1.4.4 Dopad na aktivitu IL-2:
① Indukce IL-2 [9]: Přidejte 50 do každé jamky v 96jamkové buněčné destičce μl Různé koncentrace polysacharidu Cistanche deserticola (konečné koncentrace v pořadí: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5, 125 μl kultivačního média přidejte do kontrolního média a 125 mg/l) 50 μl ConA (konečná koncentrace 5 mg/l), přidejte 1 další na jamku × 106 buněk sleziny. Inkubujte 24 hodin v inkubátoru s nasycenou vlhkostí 37 stupňů a 5 % CO2, centrifugujte 20 minut při 2500 ot./min. a odeberte buněčný supernatant a uložte jej při - 20 stupních pro pohotovostní režim. ② IL-2 detekce aktivity [9,10]: Základní metoda vychází z literatury [9] a příslušné úpravy jsou provedeny podle literatury [10]. Konvenční příprava suspenze myších thymocytů BALB c, 96jamková buněčná kultivační destička, 1 inokulace na jamku × 106 thymocytů, přičemž se přidá 50 buněk na jamku μl ConA (konečná koncentrace 2,5 mg/l), a poté se přidá připravený supernatant IL-2 50 μl (přidejte 50 μl do slepého kontrolního roztoku, do slepého kontrolního roztoku se přidá společně 50 μl kontrolního otvoru MTT, pokračujte v inkubaci po dobu 4 hodin, centrifugujte 10 až 15 minut při 1000 ot./min., odstraňte supernatant a přidejte DMSO 100 na jamku μl, protřepejte mikrooscilátorem po dobu 8 minut a změřte hodnotu A540 nm enzymovým markerem.
1.5 Statistická analýza
Data byla vyjádřena jako průměr a standardní odchylka (x ± s). K porovnání dat byl použit software Microsoft Excel a byl proveden t-test. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.
2. Výsledky
2.1 Účinek na proliferaci lymfocytů
Jak je vidět z tabulky 1, přidání polysacharidu Cistanche deserticola do kultivačního média lymfocytů myší sleziny kultivovaných in vitro v koncentraci nad 25 mg/l může významně stimulovat proliferaci lymfocytů, což ukazuje, že samotný polysacharid Cistanche deserticola má mitotický účinek. Ve stejnou dobu,z tabulky 2 a tabulky 3 lze vidět, že CDPS má významný podpůrný účinek na proliferaci ConA-indukovaných T lymfocytů nebo LPS-indukovaných B lymfocytů.
Tab.1 Vliv polysacharidu Cistanche deserticola na proliferaci neaktivovaných lymfocytů (x ±s, n =3)
Ne: ve srovnání s kontrolní skupinou, ＊P<0.05.
Tab.2 Vliv polysacharidu Cistanche deserticola na proliferaci T lymfocytů indukovanou ConA (x ±s, n =3)
Poznámka: ve srovnání se skupinou ConA, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
Tab.3 Vliv polysacharidu Cistanche deserticola na proliferaci B lymfocytů indukovanou LPS (x ±s, n =3)
Poznámka: ve srovnání se skupinou LPS, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.
2.2 Vliv na hmotnost imunitních orgánů u normálních myší
Jak je vidět z tabulky 4,Polysacharid Cistanche deserticola může významně zvýšit index sleziny normálních mladých potkanů BALB/cc, ale neovlivňuje brzlík.
2.3 Účinek na hmotnost imunitního orgánu u imunokompromitovaných myší
Z tabulky 5,lze vidět, že indexy orgánů sleziny a brzlíku u myší ve skupině s imunosupresivy Cy jsou nižší než v kontrolní skupině a polysacharid Cistanche deserticola (125, 250 mg/kg) může významně zlepšit indexy sleziny a brzlíku.
2.4 Vliv na aktivitu IL-2
Jak je vidět z tabulky 6,když dávka polysacharidu Cistanche deserticola dosáhne 7,82 mg/l, může významně zvýšit uvolňování IL-2 z buněk myší sleziny.
Tab.4 Vliv polysacharidu Cistanche deserticola na hmotnost imunitních orgánů u normálních myší (x ±s, n =11)
Poznámka: ve srovnání s kontrolní skupinou, ＊＊P<0.01.
Tab.5 Vliv polysacharidu Cistanche deserticola na hmotnost imunitních orgánů u imunodeprimovaných myší ( x ± s, n =12)
Poznámka: ve srovnání s kontrolní skupinou, ## P < 0,01; ve srovnání s modelovou skupinou, ＊＊P<0.01.
Tab.6 Vliv polysacharidu Cistanche deserticola na produkci IL-2 slezinnými lymfocyty u myší (x ±s, n =3)
Poznámka: ve srovnání s kontrolní skupinou, ＊＊P<0.01.
3. Diskuse
ConA a LPS-indukovaná proliferace slezinných lymfocytů u myší je in vitro experiment k detekci funkce T a B lymfocytů a je důležitým indikátorem specifické imunitní schopnosti. Studie ukázaly, že když je konečná koncentrace polysacharidu Cistanche deserticola vyšší než 25 mg/l, může významně podporovat proliferaci lymfocytů, což naznačuje, že má určitý mitotický účinek. V přítomnosti mitogenu (ConA nebo LPS) může menší dávka polysacharidu Cistanche deserticola zlepšit, pokud tělo vykazuje významnou proliferační aktivitu. Víme, že ConA a LPS indukují hlavně proliferaci T lymfocytů, respektive B lymfocytů. Studie ukázalyZdravotní přínosy prášku cistanche: Polysacharid Cistanche deserticola může podporovat proliferaci T lymfocytů i proliferaci B lymfocytů, ale jeho proliferační účinek na B lymfocyty je výrazně silnější než na T lymfocyty.
Zdravotní přínosy prášku Cistanche-Improve imunita
Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Improve Immunity
【Požádejte o více】 E-mail: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692
Brzlík a slezina jsou hlavními imunitními orgány u zvířat. Imunitní buňky ve slezině jsou převážně zralé B lymfocyty, zatímco brzlík jsou převážně nezralé T lymfocyty. Indexy brzlíku a sleziny mohou odrážet vývoj imunitních orgánů a funkční stav imunitních buněk. Intraperitoneální injekce polysacharidu Cistanche deserticola může významně zvýšit index sleziny normálních a imunosuprimovaných myší a má významný antagonistický účinek na atrofii thymu vyvolanou Cy u myší.
Polysacharid Cistanche deserticola nemá žádný významný vliv na thymický index u normálních zvířat, což je v souladu s výsledky experimentů in vitro, ve kterých polysacharid Cistanche deserticola podporuje proliferaci B lymfocytů spíše než T lymfocytů.
CIstanche doplněk blízko mě-Zlepšitimunita
IL-2 je cytokin produkovaný T lymfocyty od G1 fáze buněčného cyklu do S fáze. Je to hlavní růstový faktor T buněk, který působí jako autokrinní růstový faktor. Kromě toho může IL-2 podporovat proliferaci B buněk a syntézu protilátek [11,12]. Polysacharid Cistanche deserticola podporuje uvolňování IL-2 z lymfocytů, což zjevně souvisí s polysacharidem Cistanche deserticola podporujícím proliferaci lymfocytů sleziny.
Lékařský výzkum ukazuje, že Cistanche obsahuje polysacharidy, echinakosidy a akteosidy, které mohou aktivovat lymfocyty a zlepšit stav těla; funkční složky cistanche Phenylethanoid Glycosides mají významný vliv na obnovu buněk po poškození gama zářením 60 Co a také mohou zlepšit imunitní funkce proti poškození zářením. Denní užívání doplňků stravy Cistanche deserticola může dosáhnout účinku zlepšení imunity.
