Výzkum víceindexového komplexního hodnocení kvality Cistanches Herba na základě metody kritické váhy

WEI Wei, QI Yuning, CHEN Weiying, ZHU Shunjuan, HOU Jianzhong
(Středisko kontroly a testování kvality Jiuquan v provincii Gansu, Jiuquan, Gansu 735000, Čína)

Abstraktní:Cílem bylo vytvořit multiindexovou komplexní metodu hodnocení pro hodnocení kvality Cistanche deserticola a vědecky vyhodnotit kvalitativní rozdíly mezi Cistanches Herba z různých zdrojů (Cistanche deserticola a Cistanche tubulosa) a různých oblastí produkce. Obsah pěti fenylethanoidních glykosidů (echinakosid, verbascosid, tubulosid A, isoakteosid a 2'-acetylakteosid) byl stanoven pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). K výpočtu hmotnosti každé složky byla použita metoda vážení CRITIC a byla vypočtena komplexní skóre vzorků. K analýze vzorců kvalitativních rozdílů mezi vzorky byla použita shluková analýza. Výsledky ukázaly, že byly pozorovány kvalitativní rozdíly mezi Cistanche deserticola a Cistanche tubulosa. Hodnotící skóre u Cistanche tubulosa byla obecně vyšší než u Cistanche deserticola. Shluková analýza seskupila Cistanche deserticola a Cistanche tubulosa do odlišných kategorií. Kvalita Cistanche deserticola vykazovala minimální rozdíly, zatímco kvalita Cistanche tubulosa se v různých oblastech produkce lišila. Model stanovený v této studii může objektivně kvantifikovat kvalitativní rozdíly mezi Cistanches Herba z různých původů a oblastí produkce, což poskytuje vědecký základ pro hodnocení kvality Cistanche.

Klíčová slova: Cistanches Herba;hmotnostní metoda CRITIC; shluková analýza;hodnocení kvality

Prodám extrakt z bylin cistanche

 

 

 

 

 

Cistanches Herba se skládá ze sušených, šupinatých sukulentních stonků Cistanche deserticola YC Ma nebo Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, dříve běžně známé jako pouštní cistanche. Cistanches Herba je teplé povahy a sladké a slané chuti. Tonizuje jang ledvin, prospívá esenci a krvi a zvlhčuje střeva pro zmírnění zácpy. Používá se při nedostatku jangu ledvin, nedostatku esence a krve, impotenci a neplodnosti, bolestivosti a slabosti pasu a kolen, slabosti svalů a kostí a suchosti střev se zácpou. Bylo potvrzeno, že jeho farmakologicky aktivní složky, jako jsou fenylethanoidní glykosidy, polysacharidy a iridoidy, mají antioxidační, anti-agingové, imunomodulační a neuroprotektivní aktivity. Jako proslulý tradiční čínský léčivý materiál je uveden jako bylina nejvyšší kvality v Shennong's Classic of Materia Medica a je známý jako „ženšen pouště“. Je distribuován hlavně v severozápadních oblastech Vnitřní Mongolsko, Gansu, Xinjiang a Ningxia.

S rostoucí poptávkou na trhu se divoké zdroje blíží vyčerpání a umělé pěstování se stalo hlavním proudem. Vydání Pharmacopoeia Čínské lidové republiky z roku 2005 rozšířilo Cistanche tubulosa jako legální botanický zdroj Cistanches Herba. Oba zdroje mají samostatné testovací limity, ale pouze pro extraktivní látky a obsahy echinakosidu a verbascosidu, které nemohou komplexně odrážet vícesložkové a vícecílové charakteristiky tradiční čínské medicíny. Chemické složení Cistanches Herba se liší v závislosti na oblasti produkce, době sklizně a metodách zpracování. Proto je vytvoření vědeckého a systematického systému hodnocení kvality velmi důležité pro zajištění bezpečnosti a účinnosti léčivých materiálů a pro podporu udržitelného průmyslového rozvoje. V této studii bylo analyzováno 20 šarží Cistanches Herba z různých produkčních oblastí v Jiuquan. HPLC byla použita k současnému stanovení pěti fenylethanoidních glykosidů – echinakosidu, tubulosidu A, verbascosidu, isoacteosidu a 2'-acetylakteosidu. Váhová metoda CRITIC byla použita k přiřazení vah každému indikátoru pro komplexní hodnocení kvality dvou botanických zdrojů a shluková analýza (CA) byla použita k interpretaci rozdílů podle botanického původu a oblasti produkce s cílem poskytnout vědecký základ pro hodnocení kvality Cistanches Herba.

1 Nástroje a materiály cistanche

1.1 Přístroje a vybavení

Systém Agilent 1260 Infinity HPLC [včetně kvartérního čerpadla, autosampleru, kolonové pece a detektoru DAD; Agilent Technologies (China) Co., Ltd.]; elektronické analytické váhy XP205DR (Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.); KQ-500DE ultrazvuková čistička (Kunshan Ultrasonic Instruments Co., Ltd.).

 

1.2 Reagencie

Referenční standardy: verbascosid (šarže č tubulosid A (šarže č. B20471, čistota větší nebo rovna 98 %), isoakteosid (šarže č. B21535, čistota větší nebo rovna 98 %) a 2'-acetylakteosid (šarže č. B21779, čistota větší než nebo rovna 98 %) byly zakoupeny od společnosti Bio-Technology Co. Yunology Co. Ltd. Methanol byl čistoty pro HPLC (Merck). Ultračistá voda byla připravována interně. Ostatní činidla byla analytické čistoty.

 

1.3 Vzorky

Deset šarží Cistanche deserticola a deset šarží Cistanche tubulosa bylo odebráno z pěstitelských základen a lékáren Cistanches Herba v oblasti Jiuquan, označených R1–R20 (viz tabulka 1). Byly identifikovány zástupcem ředitele a lékárníkem TCM Hou Jianzhongem z Inspekčního a testovacího centra kvality Jiuquan jako sušené, šupinaté sukulentní stonky Cistanche deserticola YC Ma nebo Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Poukazové vzorky jsou uloženy v Ústavu pro testování léčiv a kosmetiky Střediska kontroly a testování kvality Jiuquan.

Tabulka 1 Zdrojové informace vzorků Cistanches Herba

R1|Cistanche deserticola|Město Dazhuangzi, okres Jinta, město Jiuquan

R2|Cistanche deserticola|Jiashan New Town, Suzhou District, Jiuquan City

R3|Cistanche deserticola|Město Xiqu, okres Jinta, město Jiuquan

R4|Cistanche deserticola|Město Zhonghe, okres Jinta, město Jiuquan

R5|Cistanche deserticola|Město Shuanglong, okres Suzhou, město Jiuquan

R6|Cistanche deserticola|Město Hongliu, okres Guazhou, město Jiuquan

R7|Cistanche deserticola|Město Hongshagang, město Dunhuang, Jiuquan

R8|Cistanche deserticola|Město Yumen, Jiuquan

R9|Cistanche deserticola|Město Tashi, okres Guazhou, město Jiuquan

R10|Cistanche deserticola|Čtvrť Zongtai, Yumen City, Jiuquan

R11|Cistanche tubulosa|Město Dazhuangzi, okres Jinta, město Jiuquan

R12|Cistanche tubulosa|Okres Suzhou, město Jiuquan

R13|Cistanche tubulosa|Okres Suzhou, město Jiuquan

R14|Cistanche tubulosa|Okres Suzhou, město Jiuquan

R15|Cistanche tubulosa|Okres Suzhou, město Jiuquan

R16|Cistanche tubulosa|Město Hongshagang, město Dunhuang, Jiuquan

R17|Cistanche tubulosa|Město Hongshagang, město Dunhuang, Jiuquan

R18|Cistanche tubulosa|Město Hongshagang, město Dunhuang, Jiuquan

R19|Cistanche tubulosa|Čtvrť Liangzhong, Yumen City, Jiuquan

R20|Cistanche tubulosa|Městečko Liugou, okres Anxi, Jiuquan

 

2 Metody a výsledky

2.1 Příprava směsného referenčního roztoku

Do samostatných 50ml odměrných baněk přesně navažte verbaskosid 10,45 mg, echinakosid 11,56 mg, tubulosid A 10,59 mg, isoakteosid 19,63 mg a 2'-acetylakteosid 9,03 mg, rozpusťte na 50 % methanolu. Dobře promíchejte, abyste získali zásobní referenční roztoky. Poté přesně napipetujte 1,00 ml každého zásobního roztoku do 10ml odměrné baňky, zřeďte na požadovaný objem 50% methanolem a promíchejte, abyste získali smíšený referenční roztok.

Supporting Service Of Wecistanche-Pro více podrobností o spolupráci
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950

 

2.2 Příprava zkušebních roztoků

Prosejte prášky vzorků přes síto č. . 3; naváží se asi 1 g přesně do 100ml hnědé odměrné baňky. Přidejte 80 ml 50% methanolu, zazátkujte, protřepejte, zvažte, namočte po dobu 30 minut a sonikujte po dobu 40 minut (250 W, 35 kHz). Ochlaďte na pokojovou teplotu, znovu zvažte, přidejte 50% methanol pro kompenzaci úbytku hmotnosti, dobře protřepejte, nechte stát, dekantujte supernatant a přefiltrujte. Následný filtrát se shromáždí jako zkušební roztok.

 

2.3 Chromatografické podmínky

Použijte kolonu InertSustain C18 (4,6 mm × 250,0 mm, 5 μm). Mobilní fáze: methanol (A) a 0,1% roztok kyseliny fosforečné (B). Gradient pro fázi A: 0–6 min, 20 %; 6–18 min, 20 %→30 %; 18–35 min, 30 %→45 %. průtok: 1,0 ml/min; teplota kolony: 35 stupňů; detekční vlnová délka: 330 nm; vstřikovací objem: 10 μL. Teoretických desek pro každou složku nebylo méně než 5 000. Chromatogramy směsného referenčního roztoku a zkušebních roztoků jsou uvedeny na obrázku 1.

 

2.4 Validace metodiky pro stanovení obsahu

2.4.1 Zkouška přesnosti

Šestkrát po sobě se nastříkne směsný referenční roztok z bodu 2.1 za podmínek v bodu 2.3. RSD ploch píku pro všechny analyty byly menší nebo rovné 0,86 %, což ukazuje na dobrou přesnost přístroje.

 

2.4.2 Zkouška opakovatelnosti

Přesně se odváží šest dávek vzorku R2 (každá asi 1,0 g) a připraví se šest zkušebních roztoků podle oddílu 2.2. Analyzujte za podmínek v části 2.3. RSD oblastí píku byly menší nebo rovné 1,12 %, což ukazuje na dobrou opakovatelnost metody.

 

2.4.3 Zkouška stability

Připravte zkušební roztok ze vzorku R1 podle bodu 2.2. Injikujte v 0, 2, 4, 8, 12 a 24 h za podmínek v bodě 2.3. RSD ploch píku byly menší nebo rovné 1,20 %, což ukazuje na dobrou stabilitu roztoku během 24 hodin.

 

2.4.4 Linearita

Připravte sérii smíšených referenčních roztoků přesným pipetováním 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 a 2,0 ml každého zásobního roztoku do 10ml odměrných baněk a naředěním na požadovaný objem 50% methanolem. Injikujte za podmínek v bodě 2.3. Graf koncentrace versus plocha píku pro získání kalibračních rovnic a lineárních rozsahů (tabulka 2). Výsledky ukázaly dobrou linearitu pro echinakosid, tubulosid A, verbascosid, isoacteosid a 2'-acetylakteosid v jejich příslušných rozmezích.

Tabulka 2 Výsledky studie linearity

Echinakosid|y=2397.4x − 15,363|r=0.9987|lineární rozsah: 0,0046–0,0462 mg·L−1

Tubulosid A|y=9428.7x − 7,104|r=0.9984|lineární rozsah: 0,0024–0,0242 mg·L−1

Verbascoside|y=12609.5x − 8,507|r=0.9986|lineární rozsah: 0,0024–0,0418 mg·L−1

Isoacteosid|y=11600.3x − 11,359|r=0.9985|lineární rozsah: 0,0079–0,0786 mg·L−1

2′-Acetyllakteosid|y=10901.8 x − 5,216|r=0.9985|lineární rozsah: 0,0036–0,0362 mg·L−1

2.4.5 Obnova
Připraví se devět dávek vzorku se známým obsahem (R1), každá o hmotnosti asi 0,5 g. Přidejte na 50 %, 100 % a 150 % nominálního obsahu vhodná množství verbascosidu, echinakosidu, tubulosidu A, isoakteosidu a 2'-acetylakteosidu. Připravte zkušební roztoky podle oddílu 2.2 a analyzujte podle oddílu 2.3. Průměrné výtěžnosti byly 99,58 %, 99,24 %, 100,26 %, 99,84 % a 100,46 %, s RSD 1,26 %, 1,67 %, 1,03 %, 1,39 % a 1,71 %, v daném pořadí, což ukazuje na dobrou přesnost.

 

2.4.6 Stanovení obsahu

Přesně odvažte asi 1 g prášku Cistanche deserticola a Cistanche tubulosa, připravte zkušební roztoky podle oddílu 2.2, analyzujte podle oddílu 2.3 a vypočítejte obsah verbascosidu, echinakosidu, tubulosidu A, isoakteosidu a 2'-acetylakteosidu. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

Tabulka 3 Výsledky stanovení obsahů pěti složek v Cistanches Herba (mg·g−1)

R1: Echinakosid 4,81|Tubulosid A 0,16|Verbaskosid 0,58|Isoakteosid 0,26|2'-Acetyllakteosid 0,49

R2: 5.02 | 0.13 | 0.70 | 0.30 | 0.61

R3: 6.62 | 0.24 | 0.67 | 0.21 | 0.43

R4: 5.25 | 0.18 | 0.82 | 0.34 | 0.67

R5: 5.63 | 0.17 | 0.75 | 0.21 | 0.39

R6: 6.85 | 0.24 | 0.91 | 0.29 | 0.44

R7: 6.08 | 0.23 | 0.63 | 0.20 | 0.54

R8: 5.17 | - | 0.49 | 0.18 | 0.24

R9: 6.78 | 0.28 | 0.73 | 0.27 | 0.37

R10: 5.44 | 0.19 | 0.68 | 0.24 | 0.26

R11: 16.77 | 0.97 | 1.20 | 1.19 | -

R12: 13.80 | 1.22 | 2.07 | 1.98 | 0.08

R13: 17.06 | 2.09 | 4.82 | 2.08 | 0.14

R14: 18.56 | 2.86 | 4.76 | 2.89 | 0.16

R15: 20.47 | 3.62 | 5.17 | 1.84 | 0.21

R16: 15.38 | 3.16 | 3.86 | 1.09 | 0.18

R17: 16.23 | 2.97 | 4.43 | 1.44 | 0.17

R18: 15.02 | 2.40 | 3.59 | 1.38 | 0.18

R19: 17.56 | 3.06 | 4.91 | 1.52 | 0.19

R20: 14.87 | 2.64 | 4.05 | 1.26 | 0.20

 

2.5 Hodnocení kvality pomocí metody vážení CRITIC

2.5.1 Standardizace dat

Vzhledem k tomu, že se naměřené obsahy indikátorů výrazně lišily, byl každý indikátor považován za indikátor typu přínosu a standardizován na rozmezí [0, 1] pomocí vzorce (1).

 

2.5.2 Stanovení hmotností

Standardizované výsledky 20 dávek byly importovány do online platformy pro zpracování dat SPSSPRO a pro výpočet vah byla použita metoda CRITIC (tabulka 4). Jak ukazuje tabulka 4, informační obsah (1,936) 2′-acetylakteosidu byl významně vyšší než u ostatních ukazatelů (0,683–0,758), a to především kvůli jeho velmi vysoké míře konfliktu (6,786), což ukazuje na velmi nízkou korelaci s ostatními ukazateli. Poskytoval tak unikátní informace v systému hodnocení a tvořil 40,112 % celkové váhy a stal se dominantním ukazatelem. Váhy ostatních čtyř ukazatelů (echinakosid, tubulosid A, verbascosid a isoakteosid) byly relativně vyrovnané.

Tabulka 4 Výsledky výpočtu váhových faktorů

Indikátor: Echinacoside|Variabilita 0,367|Konflikt 2,064|Informace 0,758|Hmotnost 15,705 %

Indikátor: Tubulosid A|0,352|1,940|0,683|14,150 %

Indikátor: Verbascoside|0,392|1,881|0,737|15,275 %

Indikátor: Isoacteosid|0,330|2,157|0,713|14,759 %

Indikátor: 2′-Acetylakteosid|0,285|6,786|1,936|40,112 %

 

2.5.3 Komplexní hodnocení

Na základě stanovených hmotností byla pomocí vzorce (2) vypočtena celková skóre hodnocení 20 šarží. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 5. Mezi těmito dvěma botanickými zdroji byly zjištěny výrazné rozdíly ve skóre. Cistanche tubulosa měla obecně vyšší obsah echinakosidu a verbascosidu, což vedlo k vyššímu komplexnímu skóre než Cistanche deserticola.

Tabulka 5 Komplexní hodnocení CRITIC pro Cistanches Herba

R1: 0,307 (14. pořadí)

R2: 0,386 (hodnocení 10)

R3: 0,292 (hodnocení 15)

R4: 0,432 (8. pořadí)

R5: 0,258 (17. pořadí)

R6: 0,313 (13. pořadí)

R7: 0,351 (12. pořadí)

R8: 0,147 (hodnocení 20)

R9: 0,265 (16. pořadí)

R10: 0,179 (19. pořadí)

R11: 0,236 (18. pořadí)

R12: 0,335 (rank 12)

R13: 0,533 (pozice 4)

R14: 0,632 (pořadí 2)

R15: 0,667 (1. pořadí)

R16: 0,497 (6. pořadí)

R17: 0,530 (5. pořadí)

R18: 0,469 (7. pořadí)

R19: 0,565 (hodnocení 3)

R20: 0,425 (pořadí 9)
 

 

2.6 Shluková analýza

Naměřený obsah 20 dávek byl importován do SPSS 20.0. Jako metrika byla použita metoda nejvzdálenějšího souseda a druhá mocnina euklidovské vzdálenosti a pro shlukování bylo použito propojení mezi skupinami (viz obrázek 2). Výsledky ukázaly rozdíly v kvalitě mezi dvěma botanickými zdroji: Cistanche deserticola a Cistanche tubulosa seskupené do samostatných skupin. Cistanche deserticola vykazovala malé rozdíly v rámci skupiny, zatímco Cistanche tubulosa vykazovala kvalitativní rozdíly mezi produkčními oblastmi a mohla být dále rozdělena do tří podskupin, což bylo obecně v souladu s komplexním hodnocením založeným na CRITIC.